LEUKEMIA INHIBITOR FACTOR (LIF)’in SIĞIR EMBRĐYO GELĐŞĐMĐ ÜZERĐNE ETKĐSĐ
Özlem Celasin 1, Arzu Çaputçu Taş1, Sezen Arat1,
1.TÜBĐTAK,
MAM-Gen Mühendisliği ve Biyoteknoloji Enstitüsü, Gebze, Kocaeli,
Leukemia inhibitor faktör (LIF) bir sitokindir ve blastosistin implantasyonu ve gebeliğin devamı için
gerekli olduğu düşünülmektedir. In vitro elde edilen sığır blastosistlerinden LIFr ve gp130 transkipsiyon
faktörü implantasyon öncesi dönemde salgılanırken in vivo embriyolar da moruladan hatch blastosist
safhasına kadarki zaman süresince salgılanır. LIF aynı zamanda kök hücrelerin farklılaşmamasını da
sağlar. Çalışmamızda; fare recombinant LIF kullanılmış ve sığır blastosist gelişimi üzerine etkisi
incelenmiştir. Çalışmada kullanılacak olgunlaşmamış sığır yumurtaları mezbaha materyalinden aspire
edilmiş ve 10%FCS, sodyum piruvat, EG, bLH, bFSH, IGF-1 ve penisilin/streptomisin içeren TCM199
medyumunda 38,5◦C %5CO2’li inkübatörde 18 saat tutularak olgunlaştırılmıştır. Olgunlaşan
yumurtalara 133V/500µm 30µs 1 atış yapılarak füzyon uygulanmış ve sonrasında CaI ile 5 dk (5µM),
CD(2.5 µg/ml)+cycloheximide(CHX,10µg/ml) kombinasyonu ile 1 saat ve CHX ile 4 saat muamele
edilerek aktive edilmişlerdir. Aktivasyondan sonra füzyon çiftleri 8mg/ml BSA’lı Sage cleavage®
medyumunda 72 saat kültüre edildikten sonra iki gruba (1-Sage+4mg/ml BSA+%5FCS, 2Sage+4mg/ml BSA+%5FCS+1000U LIF) ayrılarak Sage blastocyst® medyumunda 4 gün daha kültüre
edilmişlerdir. Sonuçlar incelendiğinde; ikinci grubun blastosist gelişiminin (%21,74) diğer gruba (1;
%8,52) göre anlamlı derecede yüksek olduğu görülmüştür. Sonuç olarak; serumlu medyum ortamına
ilave edilen 1000U LIF’in blastosist gelişimi üzerine olumlu etkisi olduğu görülmüştür. Bu çalışma ile
denemeler devam etmektedir. Bu çalışma TÜBĐTAK-KAMAG 106G005 projesi ile desteklenmiştir.
Elektronik Đletişim Adresi: Sezen.Arat@mam.gov.tr
THE EFFECT OF LEUKEMIA INHIBITOR FACTOR (LIF) ON THE DEVELOPMENT OF BOVINE
EMBRYOS
Özlem Celasin 1, Arzu Çaputçu Taş1, Sezen Arat1,
1.TUBITAK,
MRC- Genetic Engineering and Biotechnology Institute Gebze, Kocaeli,
Leukemia inhibitory factor (LIF) is a cytokine that is considered essential for blastocyst implantation
and pregnancy maintenance. In vitro produced bovine embryos express LIFr and gp 130 transcripts in
all stages of preimplantasyon development but in vivo embryos express gp130 from to morula to the
hatched blastocysts stage. Also, LIF is used for embryonic stem cells pluripotencies. The objective of
this study was to investigate the effect of mouse recombinat LIF on blastocysts development rates on
partenogenetic studies. Immature bovine oocytes were aspirated from slaughterhouse ovaries and in
vitro matured in tissue culture medium-199 (TCM-199) supplemented with 10% FCS, sodium
pyruvate, EGF, bLH, bFSH, IGF-1 and penicillin/streptomycin for 18 hour at 38,5°C and 5% CO2 in
humidified air. The mature oocytes were fused by one 30 µs pulse of 133V/500 µm. After fusion,
oocytes were activated by exposing to calcium ionophore (5 µM for 5 min), cytochalasin D (2.5 µg/ml)
+ cycloheximide (CHX, 10 µg/ml) combination and CHX for 5 min, 1 h and 4 h, respectively. After
activation, fusion units were cultured in Sage cleavage® medium supplemented with 8 mg/ml BSA for
72 h and then developing embryos were divided into two groups. Embryos in the first group and
second group were respectively cultured in Sage blastocyst® media supplemented with 4 mg/ml BSA
+ 5% FCS and 4 mg/ml BSA + 5% FCS+1000U LIF for additional 4 days. In the second group,
development rate to blastocyst (21,74 %) was significantly higher than the other group (8,52% the first
group). The results indicate that 1000U LIF have a beneficial effect on blastocyst development if they
are added in culture medium with serum. This study is still going on. This study was supported by
grants from TUBITAK, Turkey (KAMAG-106G005).
Contact E-mail: Sezen.Arat@mam.gov.tr

Arka Kök Ganglionu Primer Duyu Nöronlarında Lösemiİnhibe Edici

View/Open - Publications from Karolinska Institutet