Code No. 168-26871（20μg） pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus Code No. 161-26861（20μg） pCAG-Ble PA tag-C 161-26861 pCAG-Ble PA tag-C For genetic research pCAG-Ble PA tag pCAG is a gene expression vector for mammalian cells. pCAG includes CAG promoter in itself. CAG promoter is known to be able to artificially induce high expression of target recombinant proteins in mammalian cells. pCAG-Ble PA tag is inserted PA tag into N- or C-terminal part of multiple cloning site（MCS）in pCAG-Ble vector. It enables expression of target proteins fused PA tag. Because pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus is inserted secretory signal into upstream part of PA tag, target recombinant proteins fused PA tag is secreted in a conditioned medium.※1 PA tag is consisted of 12 amino acids（GVAMPGAEDDVV）and has been used as the tag for detection and/or purification of PA tag fusion recombinant proteins. ※1 Recombinant proteins fused PA tag may not secrete in a conditioned medium. It depends on target protein. 〔Host mammalian cells〕 Primates（HeLa, HEK293, HepG2, COS-7, Vero, Jurkat, HL-60, etc）, Dog （MDCK）,Rodents（NIH-3T3, FM3A, SCC131, PC12, CHO, etc）. 〔Replication in 〔Features〕 ・High expression by CAG promotor. ・Optimized expression level of drug resistance gene. ・PA tag is inserted into N- or C-terminal part of multiple cloning site （MCS）. 〔Vector Map〕 168-26871 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus 〕 DH1 strain（XL-1, XL-1 species, DH5α） , JM109 and XL10-Gold are recommended for replication of plasmid. 〔Selection of transformant by Bleomycin〕 Transformation of by heat shock methods After heat shock procedures, pre-culture the in SOC liquid medium at 37℃ for 30-90 min. ↓ Spread the pre-cultured onto LB agar medium including 2.5-5.0μg/ ml of BLEOCIN or 50-60μg/ml of Zeocin. ↓ Select some clones. 〔Transfection into mammalian cells〕 We recommend you to use generally available transfection reagents.（e.g., 293-73201 Screen ectTMA）The appropriate concentration of BLEOCIN or Zeocin for clone selection will be optimized for your research cell lines. 〔Vector size〕 Approx. 5.2kbp 〔Multiple cloning site（MCS）〕 168-26871 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus ̶1/8̶ ̶2/8̶ 161-26861 pCAG-Ble PA tag-C 〔Reference〕 Fujii, Y. et al., PA tag : A versatile protein tagging system using a super high affinity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin. , ., 95, 240-247（2014）. 〔Related products for PA tag series〕 Code No. 〔MCS sequencing primers〕 Forward primer : ttattgtgctgtctcatc Reverse primer : GCAAGTAAAACCTCTACA Product Name 168-26871 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus 20μg 161-26861 pCAG-Ble PA tag-C 20μg 〔Formulation〕 10mM Tris-HCl, 1mM EDTA 〔DNA Concentration〕 1.0μg/μl 〔Selection marker of and Mammalian cells〕 bleomycin（ ）gene 〔Nuclease contamination check〕 Checked by electrophoresis 〔MCS promoter〕 CAG 〔Replication origin〕 : pUC ori 〔Vector elements〕 pCAG-Ble PA tag -N -C 1-1697 1-1697 MCS（Multiple cloning site） 1834-1903 1729-1801 Secrerory Signal 1738-1797 PA tag 1798-1833 1807-1845 SV40 early mRNA polyadenylation signal 1905-2136 1848-2079 2753-3375 2696-3318 3677-4051 3620-3994 4532-5169 4475-5112 CAG promoter SRα promoter for expression of bleomycin （ ）gene coding sequences （ bleomycin ）gene coding sequences pUC plasmid replication origin 〔Storage〕 − 20℃ 〔Package〕 20μg 〔Notice to Purchaser〕 Wako Products（the Products）are intended for research use only. If you have required for sales and/or development of new vector which were constructed by DNA fragments and/or sequence information of the Products, please contact us.（labchem-tec@wako-chem.co.jp） ̶3/8̶ Package ̶4/8̶ Code No. 168-26871（20μg） pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus Code No. 161-26861（20μg） pCAG-Ble PA tag-C 161-26861 pCAG-Ble PA tag-C 遺伝子研究用 pCAG-Ble PA tag pCAG は、動物細胞で使用する遺伝子発現ベクターです。CAG プロモーター の働きにより、動物細胞内において、遺伝子導入による目的タンパク質の 高い発現が期待できます。 pCAG-Ble PA tag は、PA tag が pCAG の Multiple Cloning Site（MCS）の N 末端側もしくは C 末端側に挿入されたベクターです。目的の組換えタ ンパク質に PA tag を付加させて発現させることができます。N 末融合タ イプには、PA tag の上流に分泌シグナルが挿入されているので、目的の PA tag 融合組換えタンパク質を培養上清中に分泌させることができます ※1。 PA tag は、12 アミノ酸（GVAMPGAEDDVV）で構成されており、PA tag 融合組換えタンパク質の検出や精製に使用できます。 ※1 タンパク質によっては分泌しない可能性もあります。 〔特 長〕 ・CAG プロモーターによる高発現誘導 ・薬剤耐性遺伝子の発現量を最適化 ・PA tag 搭載ベクター 〔ベクターマップ〕 168-26871 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus 〔宿主動物細胞〕 霊長類細胞（HeLa, HEK293, HepG2, COS-7, Vero, Jurkat, HL-60 など） 、 イヌ細胞（MDCK）、げっ歯類細胞（NIH-3T3, FM3A, SCC131, PC12, CHO など）で使用できます。 〔大腸菌での増幅〕 DH1 系 統 （XL-1、XL-1 類 縁 株、DH5α） 、JM109、 ま た は XL10Gold など大型ベクター複製用の大腸菌株の使用を推奨いたします。 〔大腸菌形質転換後の Bleomycin 系抗生物質による選抜〕 ヒートショック法により大腸菌の形質転換を行う際には、ヒートショッ ク後の大腸菌を SOC 液体培地でプレカルチャー（30-90 分、37℃）し、 2.5-5.0μg/ml BLEOCIN、または 50-60μg/ml Zeocin を含む LB 寒天培地 に播種してください。 〔動物細胞での使用〕 遺伝子導入には一般的なトランスフェクション試薬をご使用下さい。（例： 293-73201 Screen ectTMA）また、ご使用の細胞株により、クローン選抜 用の BLEOCIN または Zeocin の濃度が変わります。本品の使用前にはクロー ン選抜可能な BLEOCIN または Zeocin の終濃度をあらかじめご検討下さい。 〔ベクターサイズ〕 約 5.2kbp 〔Multiple cloning site（MCS） 〕 168-26871 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus ̶5/8̶ ̶6/8̶ 161-26861 pCAG-Ble PA tag-C 〔参考文献〕 Fujii, Y. et al., PA tag : A versatile protein tagging system using a super high affinity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin. , ., 95, 240-247（2014）. 〔PA tag シリーズ関連製品〕 コード No. 〔MCS シークエンス用プライマー〕 Forward primer : ttattgtgctgtctcatc Reverse primer : GCAAGTAAAACCTCTACA 品 名 容 量 168-26871 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus 20μg 161-26861 pCAG-Ble PA tag-C 20μg 〔組 成〕 10mM Tris-HCl, 1mM EDTA 〔DNA 濃度〕 1.0μg/μl 〔大腸菌 ･ 動物細胞選抜マーカー〕 bleomycin（ ）gene 〔Nuclease 混入チェック〕 電気泳動で確認済み 〔MCS プロモーター〕 CAG 〔複製起点〕 大腸菌：pUC ori 〔ベクター配列概要〕 pCAG-Ble PA tag -N -C 1-1697 1-1697 MCS（Multiple cloning site） 1834-1903 1729-1801 Secrerory Signal 1738-1797 PA tag 1798-1833 1807-1845 SV40 early mRNA polyadenylation signal 1905-2136 1848-2079 2753-3375 2696-3318 3677-4051 3620-3994 4532-5169 4475-5112 CAG promoter SRα promoter for expression of bleomycin （ ）gene coding sequences （ bleomycin ）gene coding sequences pUC plasmid replication origin 〔保存条件〕 − 20℃ 〔容 量〕 20μg 〔ライセンスについて〕 和光純薬工業株式会社の製品（以下、本品）をご購入後には研究用途でご 使用下さい。本品の転売、本品に由来する DNA 断片または DNA 配列情 報を用いて新たに構築されたプラスミドの販売等を目的にご使用される場 合には、弊社お客様相談室（labchem-tec@wako-chem.co.jp）までお問合 せ下さい。 ̶7/8̶ 1407K01 ̶8/8̶
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