蛍光フィルタ波長特性表 作例提供者 1）Michael W. Davidson, National High Magnetic Field Laboratory, USA 2）Dylan Burnette, Paul Forscher Laboratory, Yale University, USA 3) 北海道大学 電子科学研究所 ナノシステム生理学分野 永井健治先生 安全に関するご注意 ■ご使用前に「使用説明書」をよくお読みのうえ、正しくお使いください。 本カタログに記載されている会社名および商品名は、各社の商標または登録商標です。 モニター画面は、はめ込み合成です。 カタログ記載の内容は2007年3月現在のものです。 製品の価格、仕様、外観は製造者/販売者側がなんら債務を負うことなく予告なしに変更されます。 ©2006/2007 NIKON CORPORATION ご注意:本書に掲載した製品及び製品の技術（ソフトウェアを含む）は、 「外国為替及び外国貿易法」等に定める規制貨物等（技術を含む）に該当します。輸出する場合には政府許可撮影等適正な手続きをお取り下さい。 株式会社 108-6290 東京都港区港南2-15-3（品川インターシティC棟） www.nikon.co.jp/ 株式会社 インステック www.nikon-instruments.jp/ ご用命は当店へ 本 社 108-6290 東京都港区港南2-15-3（品川インターシティC棟） 本社カスタマーセンター（フリーダイヤル） 関 西 支 店 532-0003 大阪市淀川区宮原3-3-31 (上村ニッセイビル) 九 州 支 店 813-0034 福岡市東区多の津1-4-1 札幌営業所 060-0051 札幌市中央区南1条東2-8-2 (SRビル) 仙台営業所 980-0014 仙台市青葉区本町1-1-1 (三井生命仙台本町ビル) 名古屋営業所 465-0093 愛知県名古屋市名東区一社3-86 (クレストビル) 京都営業所 606-8221 京都市左京区田中西樋ノ口町80 金沢営業所、岡山営業所 長崎営業所、大分営業所、熊本営業所、鹿児島営業所、宮崎営業所 電話 電話 電話 電話 電話 電話 電話 電話 本社ショールーム 108-6290 東京都港区港南2-15-3 （品川インターシティC棟） 大阪ショールーム、名古屋ショールーム、福岡ショールーム 電話 (03)6433-3982 (03)6433-3982 0120-586-617 (06)6394-8801 (092) 611-1111 (011)281-2535 (022)263-5855 (052)709-6851 (075)781-1170 Printed in Japan 2CJ-MGQH-2 (0703-05)Am/M 高精度蛍光用フィルタ CFP-HQ/GFP-HQ/YFP-HQ ニコン落射蛍光用フィルタブロック ニコンでは、多彩な蛍光色素に対応するため、 微弱な蛍光による不鮮明な像も鮮明・正確に検出。 一般的な落射蛍光用から蛍光試薬専用フィルタブロックまで幅広くご用意しています。 フィルタサイズをφ25mmに設定しておりますので、 高いクォリティが求められる高度な研究ニーズに応える 超高性能・高品質の蛍光フィルタをご用意いたしました。 用途に応じて市販の蛍光フィルタを取り付けることも可能です。 従来の蛍光試薬用蛍光フィルタに加えて、 Qdot®試薬検出専用フィルタもお取り扱いしております。 高精度蛍光用フィルタ・HQシリーズの主な特長 ◆立ち上がりの非常にシャープな波長特性を実現。 ◆励起／吸収フィルタともに、 93∼97％の透過率を実現。 製品ラインナップ ◆明るさ50％以上アップで、 励起時間を約半分まで短縮。 落射蛍光用フィルタブロック B-2AやG-2Aのように各励起色に対応した一般的な蛍光フィルタです。吸収フィルタにはロングパス CFP-HQ タイプが多いため、一つのフィルタで多数の試薬に対応することができます。 Cafl-SECFP-KDELを小胞体に発現したもの 100 例： B-2A 励起色 吸収フィルタの種類 励起フィルタの バンド幅 （Bはブルー、 Gはグリーンなど） 80 透過率（％） フィルタの名称のみかた （1は狭帯域：∼20nm、 2は広帯域：30∼50nm、 3は超広帯域：60∼nm） AとBはロングパスタイプ （同バンド幅の場合、 Ｂの方が カット波長が長い）、 Eはバンドパスタイプ 60 40 20 0 400 450 500 EX420-445 1) 蛍光試薬蛍光タンパク質専用フィルタブロック 通常フィルタを使用 GFP-HQ 100 80 透過率（％） マルチバンドフィルタブロック D N 迷光 ノイズターミネータ 400 450 500 EX455-485 550 600 波長（nm） DM495 650 700 BA500-545 3) 通常フィルタを使用 YFP-HQ HQフィルタを使用 CoxIV-Venusをミトコンドリアに発現したもの 100 高精度フィルタカセットホルダ 励起光 40 0 蛍光像を最大限に引き出すニコン蛍光顕微鏡 80 透過率（％） 吸収板 60 20 DAPI/FITC/Texas Redのように同時に2重染色、3重染色を観察できるフィルタです。 多重染色観察でフィルタブロックを切り替える必要がないため、蛍光フィルタの位置ズレがなく、 カメ ラ撮影の際、取り込みソフトのMerge機能などを使う必要がありません。 対物レンズへ↑ BA460-510 SEGFPを細胞質＆核に発現したもの 通常の蛍光タンパク質専用フィルタブロックより、 さらに波長の立ち上がりをシャープにし、透過率を 上げています。 このフィルタを採用することで、非常に明るくクリアな蛍光像を得ることができます。 よりいっそう明るい蛍光像を取得するた めに、 ニコンでは蛍光装置に自社独自開 発の 「ノイズターミネータ機構」 を採用しま した。 ダイクロイックミラーで全反射せずに、 わずかに通過する励起光 （迷光） がフィル タブロック内で散乱し、 観察像に影響を与 えてしまうのを防止しています。 これによ り、 バックグラウンドの低い （S/N比の高い） 蛍光画像が取得可能となります。 700 HQフィルタを使用 蛍光タンパク質専用高精度フィルタブロック ノイズターミネータ機構 DM450 650 3) DAPI、 FITCのように特定の蛍光試薬に対応した専用フィルタです。 吸収側はバンドパスタイプが多 いため、 植物などの自家蛍光を抑えられ、 バックグラウンドの少ないクリアな画像が得られます。 2) 550 600 波長（nm） TE2000E/U/S用の落射蛍光カセットホル ダで、 フィルタカセット切り替えによる対物瞳 面上での光源結像位置のズレを最小限に 抑えます。各種励起法でのTIRF照明に 最適です。 60 40 20 0 400 450 500 EX490-500 550 600 波長（nm） DM510 650 700 BA520-560 3) 通常フィルタを使用 HQフィルタを使用 （倒立顕微鏡の場合） EX……励起フィルタ DM……ダイクロイックミラー BA……吸収フィルタ 2 3 フィルタ分光特性表 落射蛍光用フィルタブロック UV励起 V励起 UV-2A Filter Color V-2A Filter Color B-3A Filter Color 80 80 80 40 0 60 40 350 400 EX330-380 450 500 波長（nm） DM400 550 600 650 0 700 40 0 350 400 BA420 450 EX380-420 UV-1A 60 20 20 300 透過率（％） 80 透過率（％） 100 透過率（％） 100 透過率（％） 100 60 500 550 波長（nm） DM430 600 650 700 350 400 450 EX420-490 60 40 500 550 波長（nm） DM505 600 650 0 700 Filter Color 80 透過率（％） 80 透過率（％） 80 透過率（％） 100 0 60 40 20 1) 350 400 450 EX365/10 500 550 波長（nm） DM400 600 650 0 700 BA400 Filter Color 350 400 450 EX450-490 BV-2A Filter Color 500 550 波長（nm） DM505 600 650 0 700 B-1A Filter Color 0 350 400 450 EX330-380 500 550 波長（nm） DM400 600 650 0 700 350 400 450 EX400-440 500 550 波長（nm） DM455 600 650 40 0 700 Filter Color 400 450 80 透過率（％） 80 60 40 20 500 550 波長（nm） DM505 600 650 700 BA520 450 500 550 波長（nm） DM575 600 650 700 BA590 Filter Color 60 40 0 350 400 450 EX510-560 B-1E 100 透過率（％） 350 EX470-490 100 400 20 BA470 BV-1A 500 550 波長（nm） DM575 600 650 700 BA610 Filter Color 60 40 20 350 400 450 EX435/10 EX……励起フィルタ DM……ダイクロイックミラー BA……吸収フィルタ 60 20 BA435 0 透過率（％） 透過率（％） 80 透過率（％） 80 透過率（％） 80 20 BA590 G-2B 80 20 700 Filter Color EX546/10 100 40 350 BA520 100 40 650 40 100 60 DM575 600 60 100 60 500 550 波長（nm） 20 BV励起 UV-2B 450 G-1B 100 20 400 EX510-560 B-2A 40 350 BA520 100 60 Filter Color 20 BA450 Filter Color G励起 G-2A 100 20 4 B励起 500 550 波長（nm） DM455 600 BA470 650 700 0 350 400 450 EX470-490 500 550 波長（nm） DM505 600 650 700 BA520-560 5 フィルタ分光特性表 蛍光試薬蛍光タンパク質専用フィルタブロック DAPI Filter Color Texas Red Cy7 （CHROMA社相当品・41009） Filter Color BFP （CHROMA社相当品・31021） Filter Color 80 80 80 80 60 40 20 0 60 40 400 450 500 波長（nm） EX340-380 DM400 550 0 600 525 BA435-485 FITC 550 600 波長（nm） EX540-580 DM595 650 40 0 700 Cy3 500 550 600 650 EX710/75 Filter Color 60 40 700 750 波長（nm） 800 DM750 850 0 900 GFP LP（ロングパスフィルタ） 0 500 550 0 600 350 400 450 500 550 600 波長（nm） 波長（nm） EX465-495 DM505 BA515-555 TRITC EX535/50 DM565 650 700 40 0 750 Cy5 350 400 450 500 EX480/40 Filter Color 550 600 波長（nm） DM505 650 700 0 750 GFP BP（バンドパスフィルタ） 500 550 600 650 0 DM565 BA605/55 60 40 350 400 450 EX620/60 500 550 600 波長（nm） DM660 650 BA700/75 700 750 0 450 500 550 600 波長（nm） DM455 650 700 750 BA480/40 Filter Color 60 40 20 20 波長（nm） EX540/25 透過率（％） 透過率（％） 透過率（％） 80 透過率（％） 80 0 400 YFP 80 20 BA460/50 （CHROMA社相当品・41028） Filter Color 80 20 350 EX436/20 100 40 750 Filter Color BA510 100 40 700 40 100 60 DM420 650 60 100 60 550 600 波長（nm） 20 BA610/75 （CHROMA社相当品・41008） Filter Color 60 20 20 450 透過率（％） 80 透過率（％） 80 透過率（％） 80 透過率（％） 80 20 500 CFP 100 40 450 （CHROMA社相当品・31044v2） Filter Color 100 40 400 EX380/30 100 60 350 BA810/90 100 60 Filter Color 20 BA600-660 （CHROMA社相当品・41007a） Filter Color 60 20 20 335 透過率（％） 100 透過率（％） 100 透過率（％） 100 透過率（％） 100 350 400 450 EX480/40 500 550 600 波長（nm） DM505 650 BA535/50 700 750 0 300 350 400 EX500/20 450 500 550 波長（nm） DM515 600 650 700 BA535/30 1) 6 EX……励起フィルタ DM……ダイクロイックミラー BA……吸収フィルタ 7 フィルタ分光特性表 試薬対応表/比エネルギー分布 マルチバンドフィルタブロック DAPI/FITC 試薬対応表 （CHROMA社相当品・51000） DAPI/FITC/TRITC （CHROMA社相当品・61000） Filter Color 80 80 透過率（％） 100 透過率（％） 100 60 40 20 0 60 40 20 350 400 450 FITC/TRITC 500 550 600 波長（nm） 650 700 0 750 Filter Color 400 450 500 550 600 波長（nm） 650 DAPI/FITC/Texas Red 80 80 透過率（％） 100 透過率（％） 350 700 750 （CHROMA社相当品・61002） （CHROMA社相当品・51004） 100 60 40 20 0 Filter Color Filter Color 60 40 20 300 350 400 450 500 550 波長（nm） 600 FITC/Texas Red 650 700 0 350 400 450 500 550 600 波長（nm） 650 700 750 （CHROMA社相当品・51006） Filter Color 100 透過率（％） 80 60 単フィルタは用途に応じて交換可能 40 励起、吸収、 ダイクロイックミラーを簡単に取り外しでき、観察目 的に応じて最適な組み合わせを作ることができます。 20 0 350 400 450 500 550 600 波長（nm） 650 700 750 励起フィルタ 代表的な試薬 ACMA Acridine Orange （DNA＋RNA） Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 568 Alexa Fluor 647 Allophycocyanin （APC） BCECF （high ph） BFP （Blue Fluorescent Protein） Calcein Calcium Green-１ Cascade Blue CFDA （Carboxyfluorescein） CFP （Cyan Fluorescent Protein） Cy2 Cy3 Cy5 DAPI DiOC6 Dil DsRed （Red Fluorescent Protein） Ethidium bromide FITC Fluo3 FluoroGold FM1-43 Fura2 Fura Red Hoechst 33342 & 33258 Indo1 JC-1 Lissamine rhodamine B Lusifer Yellow Lyso Tracker Green MitoTracker Green MitoTracker Orange Monochlorobimane NBD （amine） Nile Red Pacific Blue R-phycoerythrin POPO-3 Propidium lodide （PI） Pyronine Y RH795 Rhodamine123 SYTOX Texas Red TMR （Tetramethylrhodamine） TO-PRO-3 TOTO-3 XRITC （X−rhodamine-5） YFP （Yellow Fluorescent Protein） YOYO-1 EX 430 440-480 347 495 579 653 650 503 381 494 506 376 495 458 489 550 649 358 480 549 558 545 494 506 368 502 335 472 352 330 514 570 428 505 490 551 380 460 549 405 480/546/565 534 536 555 530 507 504 577 555 642 642 580 513 491 水銀ランプ EX……励起フィルタ DM……ダイクロイックミラー BA……吸収フィルタ 比エネルギー→ 434.8/435.8 546.1 577.0/579.0/1 366.29/3 404.7/407.8 334.2 302.3/6 100 300 50 692.4 5 296.8 15 0 8 312.6 313.2 20 150 275.3 289.4/5/6 289.4 比エネルギー→ 30 25 10 Xeランプ 365.02/4 35 NIKON、 CHROMA社……… 励起、吸収フィルタの矢印の向きはダイクロ側 Semrock社、 OMEGA社……励起、吸収フィルタの矢印の向きは光の向き ニコンの対応フィルタブロック BV-2B B-2A UV-2A B-2A, B-1A G-2A Cy5 Cy5 B-2A BFP FITC, B-2A B-2A UV-2A FITC, B-2A CFP B-2A, GFP-BP Cy3, G-2A Cy5 DAPI, UV-2E/C B-2A, FITC-HYQ Cy3, G-2A TRITC, G-2E/C G-2A FITC, B-2E/C B-2A UV-2A B-2A Fura-2 B-2A UV-2A Indo-1 B-2A, YFP Cy3, G-2A, G-2B B-3A B B-2A, FITC Cy3, G-2A UV-2A FITC, B-2A G V-2A Cy3, G-2A、 B-2A Cy3, G-2A G-2A Cy3, G-2A Cy3, G-2A B-2A, FITC B-2A, FITC Texas Red, Y-2E/C TRITC, G-2E/C, Cy3 Cy5 Cy5 Texas Red, Cy3, Y-2E/C YFP B-2A, FITC, GFP-BP 比エネルギー分布 ダイクロイックミラー 吸収フィルタ EM 474 520-560 442 519 604 669 660 528 445 517 531 425 520 480 506 570 670 461 501 565 583 605 518 526 565 625 505 646 461 401 529 590 536 511 516 576 461 534 628 455 578 570 617 580 712 529 523 620 580 661 660 605 527 509 400 500 波長（nm） 600 700 0 300 400 500 600 700 800 900 波長（nm） 1000 1100 1200 1300 9 Qdot®蛍光試薬検出専用フィルタ 蛍光フィルタ及びミラー選択の基礎知識 Qdot®は褪色が極めて遅いなど、数々の特長があり 蛍光フィルタ及びミラーの選択にあたっては、下記の手順で行います。 蛍光観察のための新たな標識手段として注目されています。 ニコンではこのQdot®の性能を最大限に発揮できる の取扱いを開始いたしました。 「Qdot®検出専用フィルタ」 シリーズにおける、吸収スペクトル特性（実線） および 蛍光スペクトル特性（点線） と蛍光ディテクトフィルタ （Omega社） 直径数nmの半導体素材からなり、粒径のサイズによって異 なる蛍光波長を出す特性を持つ量子ドット。 Qdot®蛍光試薬は量子ドットに対し、抗体やストレプトアビジ ンなどの生体分子を標識させたナノクリスタルです。 このQdot®は、従来の有機蛍光色素とは異なる、以下のよう な利点を持っています。 ①退色が極めて遅く長時間安定 ②蛍光強度が極めて高い ③検出波長分布が極めてシャープで、 異なる複数色をオー バーラップすることなく同時に検出可能 ④ （共焦点顕微鏡を始めとした） あらゆる光学顕微鏡に対 応可能 500,0000 吸収フィルタの選択 蛍光物質の波長特性を調べます。 カタログなどに記載され ているものでも問題ありませんが、蛍光物質の波長特性は 長波長までを透過するロングパスフィルタを選ぶのが一般的 ですが、 多重染色試料を波長分離して観察する場合や、 長 溶液条件で若干変化しますので、 蛍光光度計などを利用し、 励起と蛍光の波長特性を比較しながら、最適な光学素子を 選択します。 波長帯域に高い感度を持つカメラを使う場合は、吸収フィル タにも長波長を透過させないようなバンドパスフィルタを選択 します。 400,0000 ダイクロイックミラーの選択 300,0000 励起フィルタの選択 色素とダイクロイックミラーの関係 200,0000 100 100,0000 80 0 400 450 500 550 600 650 700 波長（nm） フィルタ名称 Qdot®カラー Qdot®525 緑 黄緑 Qdot®565 Qdot®585 黄 橙 Qdot®605 赤 Qdot®655 Qdot®705 近赤外 Qdot®800シングル 近赤外 近赤外 Qdot®800マルチ 750 800 850 900 フィルタ型番（Omega社相当品） XF3301/525WB20 XF3302/565WB20 XF3303/585WB20 XF3304/605WB20 XF3305/655WB20 XF3113/710 AF40 XF3307/800WB80 XF3308/840WB80 （注）Qdot®705、 Qdot®800は、近赤外光領域の蛍光を呈する商品です。 固定ヒト上皮細胞における多重 （5色）免疫染色 透過率（％） Qdot®蛍光試薬 蛍光物質の波長特性を確認する 励起の波長特性 蛍光物質の励起波長を満たすようなフィルタを選択します。 特に、水銀ランプを光源に利用する場合は、水銀ランプの輝 線を励起波長に取り入れることで、効率の良い励起が可能 になります。 観察する蛍光物質の励起波長以外の波長域に 強い光を与えると、 バックグラウンドを上げ、試料に不必要な ダメージを与えることになりますので、 できるだけ避けましょう。 蛍光の波長特性 60 40 20 0 400 450 500 550 波長（nm） 600 650 700 45度に傾けて測定したダイクロイックミラーの透過分光特性 曲線と、蛍光物質の波長特性を見比べながら、 ダイクロイッ クミラーの透過帯域の立ち上がり波長が、蛍光物質の励起 波長と蛍光波長の間にくるものを選びます。 蛍光物質の励起波長と蛍光波長が近い場合には、蛍光信 号をできるだけ透過させるために、 短波長寄りで立ち上がる ダイクロイックミラーを選択します。 ダイクロイックミラーは立ち 上がり波長だけでなく、 立ち上がりの傾きも意識する必要が あります。立ち上がりが緩やかなダイクロイックミラーの場合、 励起フィルタと吸収フィルタの組合せ 励起フィルタと吸収フィルタの透過波長特性を重ねた際に、 光がまったく透過しない状態が理想的です。蛍光は微弱な 光線なので、 少しでも光漏れが生じるとバックグラウンドが上 がり、 画質の劣化を招きます。 蛍光信号の透過率を下げてしまう場合があります。 Qdot® 525 Qdot® 565 Qdot® 605 抗マウスIgG抗体標識 ミトコンドリア 抗ラットIgG抗体標識 微小管 抗ウサギIgG抗体標識 Ki-67 ＊すべて擬似カラーで表示 ●Nikon Eclipse800正立型顕微鏡を使用 ●フィルターはOmega社製を使用 ・励起フィルター・ダイクロイックミラー（フィルターホルダー） ・バンドパス検出フィルター（フィルターホイール） ●励起には100Wマーキュリーランプを使用 Qdot® 655 Qdot® 705 抗ヒトIgG抗体標識 核抗原 ストレプトアビジン標識 アクチン ※Qdot®製品は、 お客様のアプリケーションによって励起エリアをご変更されることをお勧め致します。 Exciter1：living Cellを観察されていらっしゃるご研究者様用 （402.5nm∼447.5nmで励起）→ XF1009/425DF45 Exciter2：固定細胞観察、他、明るさ重視で、 ＵＶ毒性を気にされないお客様用（365nm∼465nmで励起）→ XF1301/415WB100 ニコンでは共焦点レーザ顕微鏡C1シリーズでもQdot®対応フィルタを用意しています。 10 注）本カタログに記載のフィルタ波長特性は一例です。 ロット差などによって指定の波長とは完全に一致しない場合があります。 11
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