研究用試薬 オートファジー関連 製品カタログ 2014 飢餓状態 細菌感染 肝機能維持 LC3 心筋症 細胞死 Atg16L Autophagy p62 Beclin Atg5 発生 癌化 老化 http://ruo.mbl.co.jp/ 抗原提示 神経変性疾患 目次 LC3 と LC3 結合反応系...........................................................................3 LC3 に結合して選択的に分解される p62....................................................6 リン酸化部位によって機能が制御されているリン酸化 p62..............................8 Atg9 と Atg2-Atg18 複合体...................................................................10 Atg12-Atg5 共有結合体と複合体を形成する Atg16L...................................10 Atg12 結合反応系................................................................................11 栄養センサーの mTOR に制御される ULK1-Atg13-FIP200 複合体................12 クラスⅢ PI3 キナーゼ複合体としての Atg14, Beclin1, Rubicon, UVRAG.......12 オートファジー関連注目分子..................................................................14 MBL LC3 抗体のおすすめアプリケーション..............................................14 Autophagy Ab Sampler Set、My select sampler set のご紹介.....................15 オートファジー関連製品リスト...............................................................16 LC3 と LC3 結合反応系 酵母 Atg8 の哺乳類ホモログは、LC3、GABARAP (GABAA 酵母 哺乳類 Atg8 LC3 GABARAP GATE-16 受 容 体 関 連 タ ン パ ク 質 )、GATE-16 (Golgi-associated ATPase enhancer) の 3 つです。 その中でも LC3 の研究が最も進んでおり、哺乳類のオート E2 Atg7 E1 Atg3 LC3 Atg7 LC3系 LC3 ファジーマーカーとして頻繁に使用されています。LC3 は翻 Atg3 LC3 訳後 (proLC3)、すぐに Atg4B あるいは Atg4A によりその C LC3-Ⅰ 末をプロセシングされ、LC3-I となります。 LC3-I はオート PE ファジーが誘導されると E1、E2 に受け渡され、基質の PE LC3 Atg4A PE (Phosphatidylethanolamine) と結合します。LC3-PE を LC3II と呼びます。LC3-II は LC3-I よりも分子量は大きいのですが、 Phosphatidylethanolamine LC3 Atg4B LC3-Ⅱ R proLC3 疎水性が高いため SDS-PAGE では LC3-I より移動度が大きく なります。なお、GABARAP も GATE-16 も同様の過程を経て PE と結合することが分かっています。 ◎ Anti-LC3 抗体(code no. M152-3, clone: 4E12)を用いたオートファジーの検出 (IC, FCM) Flow cytometry Immunocytochemistry Anti-LC3 栄養状態 Isotype control Anti-LC3 クロロキン処理 50 μM クロロキン 4 hr 栄養状態 クロロキンを培地中に添加すると、リソソームとオートファゴソームの融合が阻害されます。そのため、LC3抗体を用いたICでは、オートファゴソームが細胞 内に大量に蓄積している様子が観察できます。またFCMでは、クロロキン処理細胞では蛍光強度の上昇が観察できます。 LC3 PM036 LC3 Polyclonal Rab IgG 100 μL ¥48,000 M186-3 8E10 Mo IgG2aκ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト LC3 (MAP1LC3B:1-120 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト LC3 (MAP1LC3B:1-120 a.a.) ¥48,000 [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 [使用法] WB: 1 μg/mL IP: 2 μL/300 μL of cell extract from 1x107 cells [備 考] LC3B に反応します。LC3A, LC3C, GATE-16, GABARAP には IC: 1:500-1:1,000 IH: 1:1,000-1:2,000(パラフィン切片は熱処理が必要です) FCM: 1:200 [備 考] LC3 (MAP1LC3A、B、C) に反応します。GATE-16、GABARAP 反応しません。 < 参考文献 > 1) Jia, W., and He, Y. W., J. Immunol. 186, 5313-5322 (2011) 2) Tabata, K., et al ., Mol. Biol. Cell 21, 4162-4172 (2010) Western blotting とは反応しません。 < 参考文献 > 1) Tabata, K., et al ., Mol. Biol. Cell 21, 4162-4172 (2010) 2) Saitoh, T., et al ., Nature 456, 264-268 (2008) (kDa) 37 2 3 4 (kDa) 37 5 25 15 10 MEF(飢餓状態) 6 7 8 25 20 Immunocytochemistry NRK(飢餓状態) 1 20 LC3-I LC3-II 15 LC3-I LC3-II 10 Lane 1: HeLa Lane 6: MEFAtg5−/− Lane 2: NIH/3T3 Lane 7: MEF Lane 3: PC12 Lane 8: MEF (6 hr. treatment with 50 μM Chloroquine) Lane 4: CHO MEFAtg5-/-細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 Lane 5: Mouse brain tissue A549(飢餓状態) 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 3 LC3 (HRP-DirecT) M186-7 8E10 HRP標識 Mo IgG2aκ 50 μL [免疫原] リコンビナントヒト LC3 (MAP1LC3B:1-120 a.a.) LC3 ¥48,000 PD014 Polyclonal Rab IgG リコンビナントラット LC3 (1-142 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/Preservative/Stabilizer [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 [使用法] WB: 1:1,000 [備 考] LC3B に反応します。LC3A, LC3C, GATE-16, GABARAP には IC*: 文献報告あり 反応しません。 IH*: 文献報告あり < 参考文献 > 1) Jia, W., and He, Y. W., J. Immunol. 186, 5313-5322 (2011) 2) Tabata, K., et al ., Mol. Biol. Cell 21, 4162-4172 (2010) 1 37 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Western blotting 11 (kDa) 30 25 20 15 10 2 3 4 5 LC3-I LC3-II 14 Lane 7: Mouse spleen Lane 8: Mouse kidney Lane 9: MEFAtg5−/− Lane 10: MEF Lane 11: MEF (6 hr. treatment with 50 μM Chloroquine) Lane Lane Lane Lane Lane 1: HeLa 2: A431 3: NIH/3T3 4: PC12 5: CHO MEFAtg5−/−細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 LC3 M152-3 1 20 LC3-I LC3-II Lane 1: HeLa Lane 2: NIH/3T3 Lane 3: PC12 Lane 4: CHO Lane 5: Mouse brain Lane 6: Mouse liver ¥42,000 < 参考文献 > 1) Kabeya, Y., et al ., J. Cell Sci. 117, 2805-2812 (2004) 2) Mizushima, N., et al ., Mol. Biol. Sci. 15, 1101-1111 (2004) Western blotting (kDa) 100 μL [免疫原] LC3 4E12 Mo IgG1κ 200 μg ¥48,000 PD015 Polyclonal Rab IgG 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト LC3 (MAP1LC3B:1-120 a.a.) [免疫原] リコンビナントラット LC3 (1-142 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Mo, Rat [性 状] 2 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 5 μg/mL [使用法] IC: 1:100 IP: 5 μg/300 μL of cell extract from 1x107 cells < 参考文献 > 1) Kabeya, Y., et al ., J. Cell Sci. 117, 2805-2812 (2004) 2) Mizushima, N., et al ., Mol. Biol. Cell 15, 1101-1111 (2004) IC: 40 μg/mL IH*: 文献報告あり FCM: 40 μg/mL Immuno-EM: 20 μg/mL Image-based FCM*: 文献報告あり [備 考] LC3(MAP1LC3A、B)に反応します。 ¥42,000 Immunocytochemistry < 参考文献 > 1) Thayanidhi, N., et al ., Mol. Biol. Cell 21, 1850-1863 (2010) 2) Kasai, M., et al ., J. Immunol. 183, 7278-7285 (2009) Immunocytochemistry Immuno-EM AP: Autophagosome N: Nucleus NRK(飢餓状態) Immuno-EM データご提供 : 東京大学 水島 昇 先生 MEF(飢餓状態) MEF(飢餓状態) (x15,000) LC3 LC3 PM046 Polyclonal Rab IgG 100 μL M115-3 ¥48,000 51-11 Mo IgG1 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントラット LC3 (1-120 a.a.) [免疫原] リコンビナントラット LC3 (1-142 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo, Rat [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 [使用法] WB: 1 μg/mL IC: 1:100-1:200 IH*: 文献報告あり < 参考文献 > 1) Kabeya, Y., et al ., J. Cell Sci. 117, 2805-2812 (2004) 2) Mizushima, N., et al ., Mol. Biol. Cell 15, 1101-1111 (2004) < 参考文献 > 1) Kabeya, Y., et al ., J. Cell Sci. 117, 2805-2812 (2004) 2) Mizushima, N., et al ., Mol. Biol. Cell 15, 1101-1111 (2004) Western blotting Immunocytochemistry (kDa) 20 14 MEF(飢餓状態) 4 NRK(飢餓状態) A549(飢餓状態) 1 2 LC3-I LC3-II Lane 1: PC12 Lane 2: PC12 (starved) 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 ¥48,000 LC3 Positive Control PM036-PN [使用法] GATE-16 100 μL (10 tests) ¥5,000 LC3 抗体の WB用ポジティブコントロール Western blotting 1 (kDa) 2 3 4 5 75 50 Sample: PM036-PN (10 μL/lane) 37 PM038 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL [免疫原] GATE-16 N末端領域( 合成ペプチド) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 IH*: 文献報告あり [備 考] LC3、GABARAP とは反応しません。 < 参考文献 > 1) Klionsky, D. J., et al ., J. Cell Sci. 118, 7-18 (2005) 2) Tanida, I., et al ., J. Biol. Chem. 277, 13739-13744 (2002) 25 20 Western blotting LC3-I LC3-II 15 1 (kDa) 50 Lane 1: Anti-LC3 pAb (MBL; code no. PM036), 1:1,000 Lane 2: Anti-LC3 pAb (MBL; code no. PD014), 1:1,000 Lane 3: Anti-LC3 pAb (MBL; code no. PM046), 1:1,000 Lane 4: Anti-LC3 mAb (clone: 8E10) (MBL; code no. M186-3), 1 μg/mL Lane 5: Anti-LC3 mAb (clone: 4E12) (MBL; code no. M152-3), 10 μg/mL 2 3 37 25 20 Lane 1: LC3 transfectant Lane 2: GABARAP transfectant Lane 3: GATE-16 transfectant 15 GABARAP M135-3 Atg3 1F4 Mo IgG1 100 μg/100 μL ¥48,000 M133-3 3E8 Mo IgG2bκ 100 μg/100 μL [免疫原] ヒト GABARAP N末端領域( 合成ペプチド) [免疫原] リコンビナントヒト Atg3 (1-314 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1 μg/mL [使用法] WB: 1 μg/mL IC*: 文献報告あり IP: 2.5 μg/300 μL of cell extract from 3x106 cells IH*: 文献報告あり IC: 0.5 μg/mL < 参考文献 > 1) Klionsky, D. J., et al ., J. Cell Sci. 118, 7-18 (2005) 2) Tanida, I., et al ., J. Biol. Chem. 277, 13739-13744 (2002) 2 3 Western blotting 4 5 6 7 (kDa) 1 2 3 4 5 6 7 8 50 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: Jurkat Lane 4: NIH/3T3 Lane 5: WR19L Lane 6: Rat1 Lane 7: PC12 Lane 8: CHO 35 GABARAP-I 15 30 GABARAP-II 10 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: Raji Lane 4: NIH/3T3 Lane 5: Rat1 Lane 6: PC12 Lane 7: CHO GABARAP PM037 Atg3 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL ¥48,000 PM034 Polyclonal Rab Ig (aff.) [免疫原] GABARAP N末端領域( 合成ペプチド) [免疫原] リコンビナントヒト Atg3 100 μL [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 [使用法] WB: 1:1,000 IC: 1:100 IC: 1:50 [備 考] GATE-16、LC3 とは反応しません。 < 参考文献 > 1) Klionsky, D. J. et al ., J. Cell Sci. 118, 7-18 (2005) 2) Tanida, I., et al ., J. Biol. Chem. 277, 13739-13744 (2002) < 参考文献 > 1) Klionsky, D. J., et al ., J. Cell Sci. 118, 7-18 (2005) 2) Tanida, I., et al ., J. Biol. Chem. 277, 13739-13744 (2002) Western blotting 1 2 3 50 35 25 15 Lane 1: LC3 transfectant Lane 2: GABARAP transfectant Lane 3: GATE-16 transfectant ¥38,000 Western blotting (kDa) 37 20 ¥48,000 < 参考文献 > 1) Klionsky, D. J., et al ., J. Cell Sci. 118, 7-18 (2005) 2) Tanida, I. et al ., J. Biol. Chem. 277, 13739-13744 (2002) Western blotting (kDa) 1 30 25 (kDa) 50 ¥48,000 30 1 2 3 4 5 6 7 8 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: Raji Lane 4: NIH/3T3 Lane 5: WR19L Lane 6: Rat1 Lane 7: PC12 Lane 8: CHO 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 5 Atg4B Atg7 M134-3 9H5 Mo IgG1 100 μg/100 μL ¥48,000 PM039 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Atg4B (1-393 a.a.) [免疫原] ヒト Atg7C末端領域( 合成ペプチド) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo(-), Rat(-), Hm(-) [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1 μg/mL [使用法] WB: 1:1,000-1:2,000 IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells < 参考文献 > 1) Yoshimura, K., et al ., Autophagy 2, 200-208 (2006) 2) Kumanomidou, T., et al ., J. Mol. Biol. 355, 612-618 (2006) < 参考文献 > 1) Komatsu, M., et al ., J. Cell Biol. 169, 425-434 (2005) 2) Yu, L., et al ., Science 304, 1500-1502 (2004) Western blotting (kDa) 1 2 3 4 5 6 Western blotting 7 (kDa) 97 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: Raji Lane 4: NIH/3T3 Lane 5: Rat1 Lane 6: PC12 Lane 7: CHO 66 45 ¥38,000 1 2 3 4 5 75 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: Raji Lane 4: HL-60 Lane 5: Jurkat 50 LC3 に結合して選択的に分解される p62 p62/SQSTM1 は LC3 に直接結合し、オートファジーにおい ■ Immunohistochemistry て選択的に分解される基質と考えられている注目分子です。 抗 p62/SQSTM1 抗体は WB、IP、IC、IH の様々なアプリケー ションに使用できることから、p62 による疾病発症と分子レベ ルの動態観察に有用です。 ユビキチン結合タンパク質 p62/SQSTM1 は TRAF6, ERK, aPKC などのシグナル伝達を担う多彩な分子群と相互作用す るためスカフォールドタンパク質と考えられています。最近、 p62 はオートファゴソームマーカーである LC3 に直接結合し、 オートファジーにより選択的に分解される事が判明しました。 Human Liver Carcinoma (Female, age 48, Grade Ⅱ) 実際、肝臓または脳特異的オートファジー欠損マウスにおいて は、p62 は過剰に蓄積し、ユビキチン・p62 陽性の封入体が 形成されました。重要なことに、ユビキチン・ p62 陽性封入体 抗体:Anti-p62 pAb (code no. PM045) ヒト肝臓癌組織においてp62陽性封入体が検出されました。 は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症 などの神経変性疾患やアルコール性肝炎、脂肪肝、肝癌患者組 織においても確認されています。現在、これら疾患の発症とオー トファジーによる p62 代謝不全の関連に注目が集まっています。 p62/SQSTM1 M162-3 5F2 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト p62 (120-440 a.a.) [交差性] Hu, Mo(-), Rat(-), Hm(-) [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1 μg/mL IP: 2 μg/250 μL of cell extract from 2.5x106 cells ¥48,000 IC: 5 μg/mL IH: 2-10 μg/mL(パラフィン切片は熱処理が必要です。) FCM: 2 μg/mL < 参考文献 > 1) Ichimura, Y., et al ., J. Biol. Chem. 283, 22847-22857 (2008) 2) Komatsu, M., et al ., Cell 131, 1149-1163 (2007) 6 Immunohistochemistry Immunoprecipitation (kDa) 1 2 75 50 37 Human liver carcinoma p62 IgG heavy chain Sample: HeLa Lane 1: Isotype control (MBL; code no. M075-3) Lane 2: Anti-p62 mAb (M162-3) 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 p62/SQSTM1 M162-A48 5F2 Alexa Fluor® 488 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト p62 (120-440 a.a.) p62/SQSTM1 ¥58,000 PM045 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト p62 (120-440 a.a.) [交差性] Hu [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] 1 mg/mL in PBS/1% BSA/0.09% NaN3 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] IC: 2 μg/mL [使用法] WB: 1:1,000 FCM: 1 μg/mL IP: 2 μL/300 μL of cell extract from 1x107 cells IC: 1:500 IH: 1:1,000(パラフィン切片は熱処理が必要です。) < 参考文献 > 1) Ichimura, Y., et al ., J. Biol. Chem. 283, 22847-22857 (2008) 2) Komatsu, M., et al ., Cell 131, 1149-1163 (2007) ¥38,000 < 参考文献 > 1) Myeku, N., and Figueiredo-Pereira, M. E., J. Biol. Chem. 286, 22426-22440 (2011) 2) Waguri, S., and Komatsu, M., Methods Enzymol. 453, 181-196 (2009) Immunocytochemistry Western blotting (kDa) 1 2 3 4 5 6 100 75 p62 50 A549(飢餓状態) Lane 1: HeLa Lane 2: 293T Lane 3: MEF Lane 4: NIH/3T3 Lane 5: PC12 Lane 6: CHO 37 A549(栄養状態) 25 p62/SQSTM1 M162-A59 5F2 Alexa Fluor® 594 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL p62 C-terminal ¥58,000 PM066 Polyclonal Guinea Pig Ig (aff.) 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト p62 (120-440 a.a.) [免疫原] ヒト p62 C末端領域( 合成ペプチド) [交差性] Hu [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] 1 mg/mL in PBS/1% BSA/0.09% NaN3 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] IC: 5 μg/mL [使用法] WB: 1:1,000 IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IC: 1:500 IH: 1:100 < 参考文献 > 1) Ichimura, Y., et al ., J. Biol. Chem. 283, 22847-22857 (2008) 2) Komatsu, M., et al ., Cell 131, 1149-1163 (2007) Immunocytochemistry < 参考文献 > 1) Komatsu, M., et al ., Cell 131, 1149-1163 (2007) 2) Moscat, J., et al ., Mol. Cell 23, 631-640 (2006) Western blotting (kDa) 100 75 A549(飢餓状態) p62/SQSTM1 2 3 4 5 6 7 8 9 Immunohistochemistry 10 p62 25 Alexa Fluor® 647 Mo IgG1κ 1 37 A549(栄養状態) Lane Lane Lane Lane Lane M162-A64 5F2 100 μg/100 μL ¥58,000 1: 2: 3: 4: 5: HeLa 293T MEF NIH/3T3 PC12 Lane Lane Lane Lane Lane 6: CHO 7: Mouse brain 8: Mouse liver 9: Mouse spleen 10: Mouse kidney Human liver carcinoma p62 C-terminal (HRP-DirecT) PM066-7 Polyclonal HRP標識 Guinea Pig Ig (aff.) 50 μL [免疫原] リコンビナントヒト p62 (120-440 a.a.) [免疫原] ヒト p62 C末端領域( 合成ペプチド) [交差性] Hu [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] 1 mg/mL in PBS/1% BSA/0.09% NaN3 [性 状] PBS/Preservative/Stabilizer [使用法] IC: 5 μg/mL [使用法] WB: 1:1,000 FCM: 1 μg/mL < 参考文献 > 1) Komatsu, M., et al ., Cell 131, 1149-1163 (2007) 2) Moscat, J., et al ., Mol. Cell 23, 631-640 (2006) < 参考文献 > 1) Ichimura, Y., et al ., J. Biol. Chem. 283, 22847-22857 (2008) 2) Komatsu, M., et al ., Cell 131, 1149-1163 (2007) Western blotting (kDa) Immunocytochemistry 100 75 50 37 25 A549(飢餓状態) ¥38,000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Lane Lane Lane p62 Lane Lane Lane Lane Lane Lane Lane ¥48,000 1: HeLa 2: HEK293T 3: MEF 4: NIH/3T3 5: PC12 6: CHO 7: Mouse brain 8: Mouse liver 9: Mouse spleen 10: Mouse kidney A549(栄養状態) 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 7 リン酸化部位によって機能が制御されているリン酸化 p62 p62 はユビキチン化タンパク質凝集体に結合し、 ター分子として働くことが提唱されています。近 年、p62 は様々な部位がリン酸化され、それぞれ Ser405 (マウス) Ser403 (ヒト) Ser351 (マウス) Ser349 (ヒト) その凝集体をオートファゴソームへ導くアダプ p62 PB1 zz TB LIR KIR UBA の部位のリン酸化により p62 の機能が制御され ていることが見いだされました。 p62 の Ser403 がリン酸化されると、ポリユビキチン鎖と p62 の親和性が上昇し、ポリユビキチン化タンパク質のオート ファジーによる分解が促進されることが報告されました。これにより、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病など、 細胞内に異常に蓄積したタンパク質(凝集体)が細胞の機能を障害することで発症すると考えられている神経変性疾患において、 p62 の Ser403 のリン酸化を特異的に促進する薬剤の開発が治療への応用につながる可能性が示唆されています。 p62 の Ser351 がリン酸化されると、ユビキチンリガーゼアダプタータンパク質である Keap1 との結合親和性が著しく上 昇します。リン酸化 p62 (Ser351) が Keap1 と結合することにより、多くの抗酸化タンパク質の遺伝子発現を制御している 転写因子 Nrf2 が安定化して核内へ移行し、一連の生体防御遺伝子の発現を誘導します。(リン酸化 p62 と Keap1 の複合体は、 最終的にオートファジーにより分解されます。)また、Nrf2 の安定化により細胞増殖関連遺伝子の発現も上昇するため、リン 酸化 p62(Ser351)と Keap1 との相互作用に対する阻害剤が、がんの治療薬になる可能性も報告されています。 Phospho-p62 (Ser403) Phospho-p62 (Ser403) D343-3 4F6 Rat IgG2aκ 100 μg/100 μL D344-3 ¥48,000 4C8 Rat IgG2aκ 100 μg/100 μL [免疫原] ヒト p62 (396-410 a.a.)( 合成ペプチド) [免疫原] ヒト p62 (396-410 a.a.)( 合成ペプチド) [交差性] Hu, Mo [交差性] Hu, Mo [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 5 μg/mL [使用法] WB: 5 μg/mL IH: 10 μg/mL IH: 5 μg/mL < 参考文献 > 1) Matsumoto, G., et al ., Mol. Cell. 44, 279-289 (2011) Immunohistochemistry Western blotting (kDa) 1 2 < 参考文献 > 1) Matsumoto, G., et al ., Mol. Cell. 44, 279-289 (2011) 3 4 150 100 GFP-tagged Phospho-p62 75 Phospho-p62 50 37 Lane 1: GFP-tagged human p62/Neuro2a Lane 2: GFP-tagged human p62/Neuro2a, Bafilomycin A1-treated (1 μM, 24 hr.) Lane 3: MEFAtg5-/Lane 4: MEF 25 20 GFP-tagged human p62発現Neuro2a細胞ご提供: 順天堂大学 貫名 信行 先生・松本 弦 先生 MEFAtg5−/−細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 Atg5 conditional knockout Wild type Brown: Anti-Phospho-p62 (SQSTM1) (Ser403) mAb (D343-3) Blue: Hematoxylin サンプルご提供:順天堂大学 貫名 信行 先生・松本 弦 先生 Immunohistochemistry Atg5 conditional knockout Wild type Brown: Anti-Phospho-p62 (SQSTM1) (Ser403) mAb (D343-3) Blue: Hematoxylin サンプルご提供:順天堂大学 貫名 信行 先生・松本 弦 先生 8 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 ¥48,000 Phospho-p62 (Ser351) PM074 Polyclonal NRF2 Rab Ig (aff.) 100 μL ¥48,000 PM069 Polyclonal Rab Ig (aff.) [免疫原] マウス p62 (346-359 a.a.)( 合成ペプチド) [免疫原] リコンビナントヒト NRF2 (1-605 a.a.) 100 μL [交差性] Hu, Mo [交差性] Hu, Mo(w), Rat(w), Hm(w) [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:500 [使用法] WB: 1:1,000 IC: 1:500 IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IH: 1:1,000 IC: 1:1,000 IH: 1:1,000 < 参考文献 > 1) Ichimura, Y., et al ., Mol. Cell 51, 618-631 (2013) < 参考文献 > 1) Taguchi, K., et al., Genes Cell 16, 123-140 (2011) 2) Komatsu, M., et al ., Nat. Cell Biol. 12, 213-223 (2010) 3) Nguyen, T., et al ., J. Biol. Chem. 284, 13291-13295 (2009) Western blotting (kDa) 150 100 75 1 2 3 4 5 6 Western blotting (kDa) 150 Phospho-p62 (Ser351) 50 1 2 3 Lane 1: MEF, sodium arsenite-treated (10 μM, 12 hr.) Lane 2: MEF Lane 3: MEFAtg5-/- Lane 4: huH-1 Lane 5: huH-1, λ-phosphatase-treated Lane 6: p62-knockout huH-1 亜ヒ酸ナトリウム処理MEF細胞、p62ノックアウトhuH-1細胞ご提供: 新潟大学 小松 雅明 先生・東京都医学総合研究所 一村 義信 先生 MEFAtg5−/−細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 Immunocytochemistry Immunocytochemistry 4 100 37 ¥48,000 NRF2 75 50 Lane 1: NRF2 transfectant Lane 2: 293T Lane 3: HeLa Lane 4: A549 HeLa Immunohistochemistry MEF, sodium arsenite-treated MEF (20 μM, 6hr) huH-1 Green: Anti-Phospho-p62 (SQSTM1) (Ser351) pAb (PM074) Blue: DAPI 亜ヒ酸ナトリウム処理MEF細胞ご提供: 新潟大学 小松 雅明 先生・東京都医学総合研究所 一村 義信 先生 NRF2 M200-3 1F2 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト NRF2 (1-605 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1 μg/mL IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IC: 0.5 μg/mL IH: 1 μg/mL ¥48,000 Human cancer tissue Upper: Lung carcinoma (different fields) Lower: Colon carcinoma (different fields) < 参考文献 > 1) Nguyen, T., et al ., J. Biol. Chem. 284, 13291-13295 (2009) Western blotting (kDa) 1 2 3 4 5 150 100 75 Immunoprecipitation (kDa) 1 2 150 100 75 50 50 37 Lane 1: NRF2 transfectant Lane 2: HeLa Lane 3: PC12 Lane 4: CHO Lane 5: NIH/3T3 Immunocytochemistry HeLa Sample: HeLa Lane 1: Isotype control (MBL; code no. M075-3) Lane 2: Anti-NRF2 mAb (M200-3) Immunohistochemistry Human lung carcinoma Brown: Anti-NRF2 mAb (M200-3) Blue: Hematoxylin 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 9 Atg9 と Atg2-Atg18 複合体 オートファジーが細胞内のどこで誘導されるかは不明ですが、酵母においては Atg タンパク質が集中して集まる前オートファゴ ソーム構造体(pre-autophagosomal structure: PAS)がその形成開始部位と考えられています。 ATG9 遺伝子を欠損した出芽酵母では多くの Atg タンパク質が PAS 局在を失うことから、Atg9 は PAS 形成の初期に何らかの 機能をしていると考えられています。PAS 上の Atg9 には Atg2 と Atg18 の複合体が結合しています。Atg18 はホスホイノシチド 3- リン酸(PI3P)と結合することが知られていますが、この複合体の機能は現在までのところ不明です。ATG18 と ATG2 に変異 をもつ酵母では PAS に Atg9 が高度に蓄積することが示されています。一方、オートファゴソーム上には Atg9 は局在しないことから、 PAS から Atg9 が離脱する仕組みが存在しているはずです。Atg2-Atg18 複合体がその過程に関与しているのかもしれません。 Atg2A Atg9A PD041 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL ¥48,000 PD042 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Atg2A (700-1,400 a.a.) [免疫原] リコンビナントマウス Atg9A (506-839 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 [使用法] WB: 1:500 IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IP: 2.5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IC: 1:400 IC: 1:400 < 参考文献 > 1) Velikkakath, A. K., et al ., Mol. Biol. Cell 23, 896-909 (2012) Western blotting 1 (kDa) 2 < 参考文献 > 1) Itakura, E., et al ., J. Cell Sci. 125, 1488-1499 (2012) Immunoprecipitation Immunocytochemistry 3 (kDa) 1 2 4 250 Atg2A 150 Lane Lane Lane Lane 100 1: 2: 3: 4: 293T MEF PC12 CHO ¥48,000 Immunocytochemistry 150 Lane 1: Isotype control (MBL; code no. PM035) Lane 2: Anti-Atg9A pAb (PD042) 100 Atg9A 75 IgG 50 HeLa(飢餓状態) A549 Atg12-Atg5 共有結合体と複合体を形成する Atg16L Atg16L は Atg12-Atg5 共有結合体と約 800 kDa の複合体を形成しています(次ページ Atg12 結合反応系参照)。この Atg16L 複合体は栄養飢餓状態では隔離膜に局在し、LC3 とホスファチジルエタノールアミン (PE) の結合を促進します。また、 Atg16L 遺伝子欠損マウスではオートファゴソームの形成が認められないことから、Atg16L はオートファジーに必須の因子で ある事が明らかとなっています。 Atg16L は酵母 Atg16 と高い相同性を持っていますが、酵母 Atg16L と異なり C 末端に大きな WD リピートドメインを持っ ています。原因不明の炎症性腸疾患であるクローン病の感受性 1 塩基多型 (SNP) がこの WD リピート中に見出されており、ク ローン病と Atg16L との関連の更なる解析が待たれます。 Atg16L M150-3 Atg16L 1F12 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL ¥48,000 PM040 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト ATG16L1 TV2 (85-588 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト ATG16L1 TV2 (85-588 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1 μg/mL [使用法] WB: 1:1,000 IH*: 文献報告あり IP: 2.5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells <参考文献> IC: 1:200-1:500 1) Matsushita, M., et al ., J. Biol. Chem. 282, 6763-6772 (2007) Image-based FCM*: 文献報告あり Western blotting (kDa) 2 3 4 5 6 7 97 Atg16L 66 β α 45 30 10 1 < 参考文献 > 1) Matsushita, M., et al ., J. Biol. Chem. 282, 6763-6772 (2007) Immunoprecipitation Lane 1: HeLa Lane 2: 293T Lane 3: Jurkat Lane 4: Raji Lane 5: NIH/3T3 Lane 6: WR19L Lane 7: Rat1 (kDa) 75 50 1 2 Sample: HeLa Atg16Lβ Atg16Lα IgG heavy chain Lane 1: Isotype control Lane 2: Anti-Atg16L pAb (PM040) 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 ¥38,000 Atg12 結合反応系 E1 Atg7 E2 Atg12 Atg10 Atg7 ユビキチン様タンパク質である Atg12 は他のユビキチン様タンパク質と異 なって C 末がグリシンであり、プロセシングを受けません。E1 は Atg8 と共 Atg12系 Atg12 Atg12 Atg10 通の Atg7 です。E2 である Atg10 に渡されたのち、基質の Atg5 に転移され ます。この Atg12-Atg5 結合体は Atg16 と複合体を形成します。Atg16 は自 基質 Atg5 Atg12 己多量体化するため、Atg12-Atg5-Atg16 結合体はより大きな複合体を形成 します。この複合体の機能は不明ですが、酵母では前オートファゴソーム構 Atg5 Atg12 造体である PAS への局在に必須であることが示されています。 Atg16 Atg16 Atg5 Atg12 Atg5 Atg12 PM050 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL ¥38,000 M154-3 6E5 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL [免疫原] ヒト Atg5 の C末端領域( 合成ペプチド) [免疫原] ヒト Atg12 の internal reagion( 合成ペプチド) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm(-) [交差性] Hu, Mo(-), Rat(-), Hm(-) [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:500 [使用法] WB: 1 μg/mL [ 備 考 ] Atg5-Atg12 複合体に反応します。 IP: 5 μg/250 μL of cell extract from 1x107 cells < 参考文献 > 1) Myeku, N., and Figueiredo-Pereira, M. E., J. Biol. Chem. 286, 22426-22440 (2011) 2) Hanada, T., et al ., J. Biol. Chem. 282, 37298-37302 (2007) IC: 10 μg/mL [備 考] 1 2 3 4 5 6 ヒト Atg5-Atg12 複合体に反応します。Atg12 は大半が Atg5 と複 合体を形成して存在しているため、Atg12 モノマーはほとんど検出 Western blotting (kDa) されません。 7 < 参考文献 > 1) Mizushima, N., et al ., J. Cell Sci. 116, 1679-1688 (2003) 2) Mizushima, N., et al ., FEBS Lett. 532, 450-454 (2002) 100 75 Atg5-Atg12 complex 50 Immunoprecipitation 37 (kDa) 1 2 3 4 5 Mouse IgG 75 Lane 1: MEFAtg5-/Lane 2: MEF Lane 3: NIH/3T3 Lane 4: HeLa ¥48,000 Atg5-Atg12 complex 50 Lane 5: 293T Lane 6: NRK Lane 7: PC12 35 30 MEFAtg5-/-細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 Sample: Lane 1, 2, 5: HeLa Lane 3, 4: 293T Lane 1, 3: Isotype control Lane 2, 4: Anti-Atg12 mAb (M154-3) Atg5 Atg10 M153-3 4D3 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL ¥48,000 M151-3 5A7 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Atg5 (1-275 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト Atg10 (1-220 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat(-), Hm [交差性] Hu [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 2-5 μg/mL [使用法] WB: 2 μg/mL [備 考] Atg5-Atg12 複合体に反応しますが、Atg5 モノマーには反応しま IH*: 文献報告あり せん。 < 参考文献 > 1) Nemoto, T. et al ., J. Biol. Chem. 278, 39517-39526 (2003) 2) Kabeya, Y. et al ., EMBO J. 19, 5720-5728 (2000) < 参考文献 > 1) Hanada, T., et al ., J. Biol. Chem. 282, 37298-37302 (2007) 2) Pyo, J. O., et al ., J. Biol. Chem. 280, 20722-20729 (2005) Western blotting (kDa) 105 75 50 30 25 15 1 2 3 Western blotting (kDa) 4 5 6 50 Atg5-Atg12 complex Lane1: MEFAtg5-/Lane2: MEF Lane3: NIH/3T3 Lane4: CHO Lane5: HeLa Lane6: 293T ¥48,000 35 30 25 1 2 3 4 Lane Lane Lane Lane 1: HeLa 2: 293T 3: A431 4: Myc tag-Atg10 Myc tag-Atg10 Atg10 MEFAtg5-/-細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 11 栄養センサーの mTOR に制御される ULK1-Atg13-FIP200 複合体 ULK1/Atg1 はオートファジーに必須のセリンスレオニンキナーゼです。哺乳類において ULK1 は普段 Atg13 と FIP200 と ともに巨大な複合体を形成していますが、Atg13 と ULK1 は mTOR(target of rapamycin)によって高レベルにリン酸化され ることで不活化しています。一方、栄養が枯渇すると、mTOR は ULK1-Atg13-FIP200 複合体から解離し、ULK1 と Atg13 のリン酸化レベルが減少します。それによって、ULK1-Atg13-FIP200 複合体は隔離膜に局在化するとともに ULK1 のキナー ゼ活性が回復し、オートファジーが進行すると考えられています。 Atg13 Atg13 PD036 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL ¥48,000 M183-3 5G4 Mo IgG2aκ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Atg13 (1-518 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト Atg13 (1-518 a.a.) [交差性] Hu, Mo(-) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:500 [使用法] WB: 1 μg/mL IP: 4 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IP: 2 μg/300 μL cell extract from 3x106 cells < 参考文献 > 1) Ganley, I. G. et al ., J. Biol. Chem. 284, 12297-12305 (2009) 2) Jung, C. H. et al ., Mol. Biol. Cell 20, 1992-2003 (2009) < 参考文献 > 1) Ganley, I. G. et al ., J. Biol. Chem. 284, 12297-12305 (2009) 2) Hosokawa, N., et al ., Mol. Biol. Cell. 20, 1981-1991 (2009) Western blotting (kDa) 1 2 Western blotting 3 (kDa) 50 1 2 3 4 5 6 100 100 75 ¥48,000 75 Atg13 Atg13 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: A549 50 Lane Lane Lane Lane Lane Lane 1: 2: 3: 4: 5: 6: HeLa 293T NIH3T3 MEF Rat1 CHO クラスⅢ PI3 キナーゼ複合体としての Atg14, Beclin1, Rubicon, UVRAG 酵母 Atg14 はオートファジー必須因子として同 定されていましたが、その哺乳類ホモログは見つ かっていませんでした。近年哺乳類ホモログとし オートファゴソーム形成 Atg5Atg12 etc. p62 ubiquitin て Atg14L が同定されました。Atg14L は Beclin1、 Vps34、p150 とクラス III PI3K 複合体を形成して います。この Atg14L 複合体は隔離膜への局在を示 オートファゴソーム融合過程 LC3 融合 し、オートファジー初期段階におけるオートファゴ ソーム形成の正の制御因子として機能していること Atg14L UVRAG がわかっています。また、Atg14L は隔離膜やオー Beclin1 Beclin1 トファゴソームに加えて小胞体膜にも局在する事が hVps34 p150 hVps34 UVRAG Endosome/ lysosome p150 Beclin1 Rubicon hVps34 p150 わかっており、オートファゴソーム形成に小胞体が 重要な役割を果たしている可能性も示唆されていま す。 輸送 エンドサイトーシス過程 一方、Beclin1、hVps34、p150、Rubicon、UVRAG 複合体は、オートファゴソーム / リソソーム融合過程 (Autophagosome maturation) 及びエンドサイトーシス過程を制御することが報告されています。これらのことから、オートファジーとエンドサ イトーシスという 2 つの重要な細胞機能を、Beclin1 を介して Atg14L と Rubicon が調節している可能性が考えられています。 12 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 Atg14 UVRAG PD026 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL M160-3 ¥48,000 1H4 Mo IgG1κ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Atg14 (167-404 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト UVRAG (389-699 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm(-) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:500 [使用法] WB: 1 μg/mL IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3 x106 cells < 参考文献 > 1) Liang, C., et al ., Autophagy 3, 69-71 (2007) 2) Liang, C., et al ., Nat. Cell Biol. 8, 688-699 (2006) < 参考文献 > 1) Matsunaga, K., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 385-396 (2009) 2) Itakura. E., et al ., Mol. Biol. Cell. 19, 5360-5372 (2008) Western blotting Immunoprecipitation (kDa) 1 (kDa) 2 1 2 3 4 5 6 100 75 75 Atg14 IgG heavy chain Sample: HeLa Lane 1: Isotype control (MBL; code no. PM035) Lane 2: Anti-Atg14 pAb (PD026) 50 37 Lane Lane Lane Lane Lane Lane 50 37 1: 2: 3: 4: 5: 6: HeLa Jurkat NIH3T3 WR19L Rat1 CHO Rubicon Atg14 M184-3 4H8 Mo IgG2aκ 100 μg/100 μL M170-3 ¥48,000 1H6 Mo IgG2aκ 100 μg/100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Atg14 (167-404 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト Rubicon (722-972 a.a.) [交差性] Hu, Mo(-), Rat(-) [交差性] Hu, Mo(-) [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1 μg/mL [使用法] WB: 1 μg/mL IP: 2 μg/300 μL cell extract from 3x106 cells < 参考文献 > 1) Matsunaga, K., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 385-396 (2009) 2) Zhong, Y., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 468-476 (2009) < 参考文献 > 1) Zhong, Y., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 468-476 (2009) 2) Matsunaga, K., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 385-396 (2009) Western blotting (kDa) 1 2 3 4 ¥48,000 Western blotting (kDa) 1 2 3 5 150 100 75 Atg14 50 Lane Lane Lane Lane Lane 37 25 Rubicon 100 1: Atg14 transfectant 2: HeLa 3: 293T 4: A549 5: Jurkat Lane 1: Rubicon transfectant Lane 2: HeLa Lane 3: A549 75 Rubicon Beclin 1 PD017 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL PD027 ¥38,000 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100 μL [免疫原] リコンビナントヒト Beclin 1 (1-450 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト Rubicon (722-972 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo(-) [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:1,000 [使用法] WB: 1:1,000 IP: 2.5 μL/200 μL of cell extract from 5x106 cells IP: 5 μL/300 μL of cell extract from 3x106 cells IC: 1:100 IH*: 文献報告あり < 参考文献 > 1) Matsunaga, K., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 385-396 (2009) 2) Zhong, Y., et al ., Nat. Cell Biol. 11, 468-476 (2009) < 参考文献 > 1) Yu, L., et al ., Science 304, 1500-1502 (2004) 2) Kihara, A., et al ., EMBO Rep. 2, 330-335 (2001) Western blotting (kDa) ¥48,000 1 2 3 4 5 6 75 7 ¥48,000 Western blotting (kDa) 1 2 3 4 150 100 Rubicon Nonspecific band 75 50 35 Lane 1: 293T Lane 2: HeLa Lane 3: Raji Lane 4: NIH/3T3 Lane 5: WR19L Lane 6: PC12 Lane 7: CHO Lane 1: Rubicon transfectant Lane 2: 293T Lane 3: A549 Lane 4: HeLa 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 13 オートファジー関連注目分子 Syntaxin-17 VMP1 PM072 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100μL ¥38,000 PM076 Polyclonal Rab Ig (aff.) 100μL [免疫原] リコンビナントヒト VMP1(131-217 a.a.) [免疫原] リコンビナントヒト Syntaxin-17 (1-302 a.a.) [交差性] Hu, Mo, Rat, Hm [交差性] Hu, Mo(-), Rat(-) [性 状] PBS/50% glycerol, pH 7.2 [性 状] 1 mg/mL in PBS/50% glycerol, pH 7.2 [使用法] WB: 1:500 [使用法] WB: 1:1,000 IP: 5 μL/2x106 cells/sample IP: 2.5 μg/sample IC: 1:2,000 < 参考文献 > 1) Itakura, E., et al ., Autophagy. 6, 764-76 (2010) 2) Itakura, E., et al ., J. Cell Biol. 192, 17-27 (2011) < 参考文献 > 1) Itakura, E., et al ., Cell 151, 1256–1269 (2012) Western blotting (kDa) 150 100 75 1 2 3 4 5 6 7 8 50 37 25 20 ¥48,000 Immunocytochemistry Lane Lane Lane Lane Lane Lane Lane Lane 1: VMP1 transfectant 2: 293T 3: A431 4: NIH/3T3 5: MEF 6: NRK 7: PC12 8: CHO Green: Anti-Syntaxin-17 (Human) pAb (PM076) Blue: DAPI A549 MBL LC3 抗体のおすすめアプリケーション PM036 M152-3 Polyclonal 様々なアプリケーションに使用できます WB IP [ 免疫原 ] [ 備 考 ] [ 交差性 ] IC 30 1 2 (kDa) 30 10 20 Lane Lane Lane Lane (kDa) 30 LC3-I HA-LC3-I LC3-II HA-LC3-II 15 IC WB IP FCM Immuno -EM ヒト LC3B LC3 A、B に反応します。 Hu, Mo, Rat, Hm Immunocytochemistry Western blotting HeLa 3 NIH/3T3 4 1 2 3 4 25 20 細胞染色に最適です [ 免疫原 ] [ 備 考 ] [ 交差性 ] FCM ヒト LC3B LC3 A、B、C に反応します。 Hu, Mo, Rat, Hm Immunoprecipitation (kDa) IH Monoclonal (4E12) Lane 1, 3: Normal Rabbit IgG (MBL; code no. PM035) Lane 2, 4:pAb Anti-LC3 1: Anti-HA-tag (MBL;pAb code no. 561) 2: Anti-LC3 pAb(MBL; (MBL;code codeno. no.PM036) PM036) 3: Anti-LC3 mAb (MBL; code no. M115-3) 4: Anti-LC3 pAb (MBL; code no. PD014) 20 14 1 2 LC3-I LC3-II Lane 1: MEFAtg5−/− Lane 2: Wild-type MEF MEFAtg5-/-細胞ご提供: 東京大学 水島 昇 先生 Immunohistochemistry NRK(飢餓状態) NRK(栄養状態) M186-3 Monoclonal (8E10) WB でクリアーなデータが得られます WB [ 免疫原 ] [ 備 考 ] [ 交差性 ] ヒト LC3B LC3 B に反応します。 Hu, Mo, Rat, Hm Western blotting Normal human liver Normal human pancreas Flow cytometry (kDa) 37 1 2 3 4 (kDa) 37 5 25 10 Isotype control Anti-LC3 栄養状態 Anti-LC3 クロロキン処理 14 7 8 25 20 15 6 20 LC3-I LC3-II 15 10 LC3-I LC3-II Lane 1: HeLa Lane 6: MEFAtg5−/− Lane 2: NIH/3T3 Lane 7: MEF Lane 3: PC12 Lane 8: MEF (6 hr. treatment with 50 μM Chloroquine) Lane 4: CHO MEFAtg5-/-細胞ご提供:東京大学 水島 昇 先生 Lane 5: Mouse brain tissue 交差性 : Hu: Human, Mo: Mouse, Rab: Rabbit, Hm: Hamster (-) 交差性なし (w) 交差性弱い (aff.): affinity purified 使用法 : WB: Western Blotting, IP: Immunoprecipitation, FCM: Flow Cytometry, IC: Immunocytochemistry, IH: Immunohistochemistry, Immuno-EM: Immuno-electron microscopy *: 論文で報告されております(MBL では未確認) 。 Autophagy Ab Sampler Set ~人気の MBL オートファジー関連抗体をセットにしてご提供~ ● オートファジー研究を始められる方 Anti-LC3 ×3種類 LC3 positive control Anti-p62 Anti-Beclin 1 Anti-Atg5 Anti-Atg16L ● MBL オートファジー抗体を試してみたい方 ● 数種類の抗体を少量ずつ揃えたい方 にオススメです! 製品コード 8485 製品名 包装 価格(税別) Autophagy Ab Sampler Set Antibodies: 25 μL each, Positive control: 10 tests ¥80,000 <構成品> 製品コード 抗体名 クローン アイソタイプ 容量 使用法 交差性 PM036Y Anti-LC3 pAb Polyclonal Rabbit IgG 25 μL WB, IP, FCM, IC, IH Hu, Mo, Rat, Hm M186-3Y Anti-LC3 mAb 8E10 Mouse IgG2aκ 25 μL WB Hu, Mo, Rat, Hm M152-3Y Anti-LC3 mAb 4E12 Mouse IgG1κ 25 μL WB, IP, FCM, IC, Immuno-EM Hu, Mo, Rat, Hm PD017Y Anti-Beclin 1 pAb Polyclonal Rabbit Ig (aff.) 25 μL WB, IP, IC Hu, Mo, Rat, Hm PM040Y Anti-Atg16L pAb Polyclonal Rabbit Ig (aff.) 25 μL WB, IP, IC Hu, Mo, Rat, Hm PM045Y Anti-p62 (SQSTM1) pAb Polyclonal Rabbit Ig (aff.) 25 μL WB, IP, IC, IH Hu, Mo, Rat, Hm PM050Y Anti-Atg5 pAb Polyclonal Rabbit Ig (aff.) 25 μL WB Hu, Mo, Rat PM036-PNY Positive control for anti-LC3 antibody 100 μL WB My select 自由に選べる♪ サンプラーセット ● セット内容をカスタマイズできるサービスをご用意いたしました。 ● 対象製品からお好きな抗体を 5 本以上お選びください。 ● まとめ買いで更にお買い求めやすくなりますので、この機会に是非ご検討下さい。 ※ My select sampler set 対象製品は、通常製品の 5 分の 1 容量となっております。 ! good d! goo数種類の抗体を 研究の立ち上げ時に! 少量ずつ揃えたい時に! 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