2009/09/08 技術報告書 ニッタ株式会社 事業開発センター モニタリングシステムＧ １． 題名：ＡＴＰ検出チューブの運用方法（保管方法、使用方法の検証） ２． 目的 ＡＴＰチューブの劣化要因を調査し、適切な保管方法について検証するとともに、ＲＬＵの再現性 を確保するための最適なる使用方法を提案する。 ３． 実験内容 （１）サンプル：牛乳を秤量ピペットで３０μＬ一定量秤量し、チップ管に注入。 （２） 計測条件：反応開始から６０秒後に測定開始。３サンプルの平均値を採用。 （３） 測定環境：室温２５．４℃、湿度４０％ （４）試験パラメーター： ①温度６℃（冷蔵庫での保管温度） 、２５℃、３５℃以上＊の３水準 ・劣化試験： ②光照射有/無（２５℃と３５℃＊についてアルミホイルで遮光有/無） 条件①、②で７０時間保管しＲＬＵ値を計測 ・使用運用試験：③拭取り～反応開始時間の検証 ④冷蔵庫からの取り出し時間と発光量の関係 ＊２５℃は蛍光灯、３５℃以上の条件は直射日光で計測 ４・結果および考察 劣化試験の結果（実験項目①、②）の結果を図１に示す。Ｈｙｇｉｎｅが推奨する冷蔵庫で保管 200 150.0 発光量 ＲＬＵ 150 169.0 159.7 100 61.0 50 0.0 0 図１ ６℃ 1 ２５℃ 2 ２５℃ 3 ３５℃ 4 ３５℃ 5 （冷蔵庫） 光照射 遮光 光照射 遮光 保管環境によるＲＬＵの変化。保管期間は各条件下で７０時間 保管後のＲＬＵ値を計測。 したサンプルのＲＬＵ値は１５０であった。冷蔵庫で保管した条件と比較した時、遮光した条件した条 件では保管温度に関わらず、ＲＬＵ値は同等である。これに対して光を照射した場合、２５℃では遮光 したときと比較して６０％の減少は見られた。ここでは室内の蛍光灯でも、ＲＬＵ値は減少するため室 内で保管する場合でも、光を遮光する必要がある。さらに直射日光を照射した場合では、発光はまった く検出されない。しかしながらこの条件でも、アルミ箔で光を遮光すれば、ＲＬＵの減少は見られない ことから、チップ管の劣化メカニズムとして、光の影響が支配的であることが考えられる。したがって、 チップ保管の保管環境としては、温度の影響より、むしろ、光を照射しないことが重要である。 200 発光量 ＲＬＵ 150 100 50 0 0 1 2 3 4 5 放置時間（時間） 図２ 放置時間と発光量の関係。放置時間は拭取り時間を開始 時間とし、反応するまでの時間。 200 発光量 ＲＬＵ 150 100 50 直後 １０分放置 0 0 50 100 150 200 250 300 反応開始からの経過時間（秒） 図３ 冷蔵庫から取り出し時間の影響。取り出し直後と１０分放置 した時の発光量と反応開始からの経過時間の関係を比較。 次に、試験③拭取り～反応時間の影響についての結果を図２に示す。放置時間が１時間の場合、０時 間と変化は見られなかった。しかしながら４時間程度放置した場合、発光量は１７％減少した。現状、 減少するメカニズムについては明らかではないが、（１時間以上）長時間放置した場合の影響は無視で きない。したがって、拭取り後１時間以内にＡＴＰ試験をすることを推奨する。 図 3 に試験④：冷蔵庫からの取り出し時間の影響を示す。冷蔵庫から取り出した直後では、反応液は 冷えた状態になっている。この状態で試験をした場合、発光量は１０分放置した場合と比較して１６％ 程度減少する。１０分放置したサンプルに関して言えば、発光量は６０秒程度までやや増加傾向を示す が、比較的安定した値を示す。一方、冷蔵庫から取り出した直後の場合、発光量は１２０秒まで増加傾 向にあり、その後、発光値は安定する。発光量が安定した後では、両者の条件では発光量の差は見られ ない。このことから、発光量を安定化させるためには、測定環境下でチップを放置することで、あらか じめ反応液を測定環境温度にしておく必要がある。本試験の結果から言えば、安定した発光量を得るた めには少なくとも２分程度放置時間を推奨したい。 ４． 結論 （１） 保管方法としては、光を十分に遮断する必要がある。７０時間、直射日光や室温環境 に放置しても、遮光した環境にすれば劣化しないことから、光を遮断するような梱包形 態であれば通常の運搬方法でも適用可能である。 （２） 拭取り～測定時間を１時間以上にした場合、発光量は減少する可能性があるため、拭 取り～測定時間の時間管理する必要がある。できれば１時間以内にすることを推奨する。 （３） 冷蔵庫からチップを取り出す際、チップをあらかじめ測定環境下に放置し、反応液を 測定環境の温度にする必要がある。本試験によれば２分以上の放置時間を推奨する。
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