Noboru Inoue, D.V.M., Ph.D., E-mail: ircpmi@obihiro.ac.jp National Research Center for Protozoan Diseases Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Obihiro, Hokkaido 080-8555, Japan トリパノソーマ・パラシテミアカウント法 ウエットスメア法 ウエットスメアの作製 1)尾の先端を 1 mm ほど切断し、2〜3 µl の血液を直接清潔なスライドグラ ス上に採取する。 2)清潔なカバーガラスを血液にかぶせる。 原虫数の算定 1)対物 40 倍、接眼 10 倍のレンズを用いてスメアを観察し、1 視野あたり の原虫数を求める。 原虫を算定する際に数える視野数の目安 原虫がほとんどいないとき: 40 視野 1 視野あたり 1〜10 匹: 20 視野 1 視野あたり 10〜20 匹: 5 視野 1 視野あたり 20〜50 匹: 1 視野 1 視野あたり 50 匹以上: 血球計算盤法を行う 2)次の計算式で血液中のおよその原虫濃度をもとめる。(前に鳴海君と作 製したコンバージョンテーブルから導き出した計算式です。) 原虫濃度(cells/ml)= 3.27×106×(1視野あたりの原虫数)0.944 例えば 40 視野に原虫が 1 匹見つかった場合 原虫濃度 = 3.27×106×(1÷40)0.944 = 3.27×106×0.0250.944 = 100509 cells/ml 血球計算盤法 感染血液 5 µl を PSG 2.5 ml と混合(500 倍希釈)して血球計算盤で原虫数を算 定し、原虫濃度をもとめる。 (注意)500 倍以下の希釈率では赤血球濃度が高く、原虫を血球計算盤でカウン トしずらくなります。 Noboru Inoue, D.V.M., Ph.D., E-mail: ircpmi@obihiro.ac.jp National Research Center for Protozoan Diseases Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Obihiro, Hokkaido 080-8555, Japan バフィコート法 1)ヘマトクリット管に 1/4 採血し、遠心する。データの比較検討を可能とする ため毎回採血量を同じにする。 2)遠心後、バフィコートから約 1 mm 血漿側をアンプルカッターで切断する。 3)バフィコートを清潔なスライドグラス上に押しだす。(ヘマトクリット管底 部の粘土を注射針などで押してやると簡単にバフィコートがでてきます) 4)清潔なカバーグラスをかぶせてバフィコートのウエットスメアを作製する 5)スメアの全領域を 100 倍程度の低倍率で観察し、原虫を検出する。 (注意)バフィコートで検出できる原虫濃度は 1000〜10000 cells/ml ぐらいで す。
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