近赤外分光法および Aquaphotomics を用いた乳牛の発情診断 竹村豪 1、G. バザール 1、生田健太郎 2、山口悦司 2、*R. ツェンコヴァ 1 1 神戸大学農学研究科、2 兵庫県立農林水産技術総合センター Cow’s estrus diagnostics by Near Infrared Spectroscopy and Aquaphotomics Go Takemura1, G. Bazar1, Kentarou Ikuta2 and Etsuji Yamaguchi2, *R. Tsenkova1 1 Kobe University and 2Hyogo Prefectural Technology Center for Agriculture, Forestry and Fisheries, E-mail: rtsen@kobe-u.ac.jp 1.目的 変動が大きく、牛 1 の午後の( Pre ) - ( Post )を除い 今日、乳牛の繁殖成績は低下し続けており、酪農業で て全て有意な相関が得られ、( E ) - ( Pre )、( E ) - 損害を生んでいる[1]。繁殖には発情診断が重要である ( Post )では常に 1100-1800 nm よりも高い相関が得ら が、酪農業の経営体系の制限などにより診断が困難に れた( Figure2-b )。なお、牛 1 は発情予定期間の直前 なっている[1]。また、今日利用されている発情診断手 に乳房炎であると診断されており、他個体と結果が異 法は環境の影響を大きく受けたり時間や費用がかかっ なったことの原因の一つであると考えられる。 てしまう[1]。従って、本研究では新たな発情診断手法 4. 結論 として迅速、簡便な近赤外分光法と、近年 Tsenkova に 乳牛は発情時に生乳や血清において特に水の第一倍音 よって提唱された Aquaphotomics とよばれる概念に着 領域で特異的なスペクトルパターンを示すことが分か 目した[2]。Aquaphotomics とは、生体内の分子の変化 り、近赤外分光法および Aquaphotomics による乳牛の と水分子との相互作用を観察するものであり、多水系 発情診断の可能性が示された。 への応用が可能である。先行研究としてジャイアント 診断の可能性を検討した[3]。 2.方法 供試個体にはホルモン製剤によって発情同期した淡路 農業技術センターのホルスタイン牛 3 頭を用いた。試 0 Subtracted spectra (-) どが挙げられる。本研究では乳牛の体液を用いた発情 料は生乳と血清であり、生乳は発情予定期間を中間に0.6 0.4 0.6 含む 31 日間毎日、午前と午後に合乳を採取した。 血清0.2 0.4 -0.4 -0.8 1300 -0.4 -0.6 により光路長 1 mm で 400-2500 nm の近赤外スペクト -0.4 ルを測定した。牛乳と血清はそれぞれ 40-0.6℃、30 ℃で 1300 -0.8 -0.8 1300 1 試料につきそれぞれ 3 本、6 本のスペクトルを得た。 1400 主に 1100-1800 nm と 1300-1600 nm を用い、スペクト ルを発情前( Pre )、発情( E )、発情後( Post )の組に 1 分けた。解析は個体毎に、さらに午前と午後に分けて 0.8 1 0.6 行った。Pre、E、Post の組に含まれるスペクトルを平 0.8 0.4 0.6 0.2 均し、組毎に平滑化と 2 次微分を適用した。その後、 0.4 1600 1400 1500 (E)-(Pre) 1600 Wavelength (nm) (E)-(Post) (E)-(Pre) 0 -0.2 -0.2 1500 b -0.2 に採取した。次に、近赤外分光器 XDS ( Metrohm 社 -0.4 ) 1400 0.06 0.03 0 0.6 -0.03 0.4 -0.06 0.2 1300 0 0.2 も同様に発情予定期間を中間に含む 8 日間毎日、午前 0 a 0.4 パンダの尿を用いた Aquaphotomics による発情診断な (E)-(Pre) (E)-(Post) (E)-(Post) (Pre)-(Post) Figure 1. Examples of subtracted spectra. -0.8 (Pre)-(Post) 1300 1400 1500 1600 -0.6 (Pre)-(Post) (a: Cow2 am milk, b: Cow2 serum). E: Estrus, Pre: Pre-estrus, Post: 1400 1500 1600 Post-estrus. 1600 1500 1 0.8 10.6 0.80.4 0.2 0.6 0 0.4 0.2 0 0 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 a (E)-(Pre) b (E)-(Pre) (E)-(Pre) (E)-(Post) (E)-(Post) (Pre)-(Post) 0.2 Post ) - ( Post ) ( E ) - ( Post )、( E ) - ( Post )、( (E)-(Post) (Pre)-(Post) Figure 2. Absolute values of R between milk and serum. の 3 種類の差スペクトルを算出した。また、組毎に生 (Pre)-(Post) ( a: 1100-1800 nm, b: 1300-1600 nm ). Rs are significant 乳と血清の差スペクトルの相関係数 R を計算し、t 検 except for Cow1_pm ( Pre ) - ( Post ) in b. 定により有意水準 1 %で R の有意性を検定した。 参考文献 3. 結果と考察 1) M. Saint-Dizier and S. Chastant-Maillard, Reprod Dom 生乳、血清共に牛 1 の午前を除き、E と Pre、E と Post Anim 47, 1056-1061 (2012) とのスペクトルの間に大きな差が見られ、Pre と Post 2) R. Tsenkova, J. Near Ifrared Spectrosc. 17, 303-314 の差は小さかった( 例: Figure 1 )。また、生乳と血清 (2009) の差スペクトルの間には、1100-1800 nm の全ての組で 3) K. Kinoshita, M. Miyazaki, H. Morita, M. Vassileva, C. 有意な相関が得られた( Figure2-a )。さらに水の第一倍 Tang, D. Li, O. Ishikawa, H. Kusunoki and R. Tsenkova, 音領域である 1300-1600 nm の範囲ではスペクトルの Sci. rep. 2, 856; DOI:10.1038/srep00856 (2012) 0
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