Run 98 Immunocytochemistry IN THIS ISSUE Short Report UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012 Page 4-9 Results - Summary Graphs - Pass Rates Best Methods - Selected Images Assessment Dates: 25th June - 20th July 2012 Immunocytochemistry Modules General Pathology: CD31/CD34 & TTF-1 Breast pathology: PR 10-17 Molecular Pathology: Focussing on Patients October 12th – 14th 2012 18-25 Breast pathology: HER2 IHC 26-32 Gastric: HER2 IHC 33-41 Lymphoid pathology: CD30 & BCl-6 42-49 Neuropathology: Synaptophysin & Tau 50-57 Cytology: CD45 & Calretenin 58-65 Alimentary Tract: GIST: CD117 & DOG-1 66-73 A joint meeting provided by UK NEQAS for ICC & ISH and UK NEQAS for Molecular Genetics at The Beaumont Estate Hotel & Conference Centre Old Windsor, UK www.beaumonthousewindsor.co.uk In-situ Hybridisation Modules Breast: HER2 ISH Interpretive 75-78 Breast HER2 ISH Technical 79-86 Commercial sponsors in this Issue See Pages 2-3 for Programme and Registration Details © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent General Information Data shown in this article is collated from UK NEQAS ICC & ISH assessments and is presented and described ‘as collected’, and does not ether endorse nor denounce any particular product or method and is provided as a guide to highlight optimal and suboptimal staining methodologies. UK NEQAS ICC & ISH does not endorse any of the products featured by the commercial sponsors and are placed at the discretion of UK NEQAS ICC & ISH. Furthermore, commercial companies featured do not have any input or influence over the content, including results that are shown. For further information of the UK NEQAS ICC & ISH scheme, general EQA enquiries, slide returns and advertising opportunities please contact: For enquiries concerning training issues, meetings, or courses, please contact: Dr Merdol Ibrahim, Scheme Manager UK NEQAS ICC & ISH Suite 3/02 Hamilton House Mabledon Place London WC1H 9BB, UK Tel: (+44)207 554 8678 E-mail: merdol.ibrahim@ucl.ac.uk Mr Keith Miller, Scheme Director UK NEQAS ICC & ISH UCL-AD, 21 University Street, University College London London WC1E 6JJ, UK Tel: (+44)207 679 6048 E-mail: k.miller@ucl.ac.uk Director Mr Keith Miller (k.miller@ucl.ac.uk) Deputy Director Mr Andrew Dodson (a.r.dodson@liverpool.ac.uk) Assistant Manager Ms Suzanne Parry (s.parry@ucl.ac.uk) Manager Dr Merdol Ibrahim (merdol.ibrahim@ucl.ac.uk) Office Manager Mrs Ailin Rhodes (a.rhodes@ucl.ac.uk) Quality Manager Mr Neil Bilbe (n.bilbe@ucl.ac.uk) Clerical Assistant Mrs Clara Lynch (clara.lynch@ucl.ac.uk) ASSESSORS United Kingdom Mr C Abbott, Bristol Dr N Atkey, Southampton Dr M Arends, Cambridge Dr M Ashton-Key, Southampton Mrs J Bell, Nottingham Mr N Bilbe, London Mr D Blythe, Leeds Mr J Brown, London Dr L Carson, Aberdeen Ms E Clark, Surrey Mrs A Clayton, Preston Mrs A Cramer, Manchester Dr S Di Palma, Surrey Mr A Dodson, Liverpool Mrs G Donald, Maidstone Dr D Faratian, Edinburgh Mr R Fincham, Cambridge Mr D Fish, Reading Mrs S Forrest, Liverpool Dr I Frayling, Cardiff, Wales Ms J Freeman, London Dr C Gillett, London Ms J Gorst, Bucks Mr J Gregory, Birmingham Prof A Hanby, Leeds Mr N Hand, Nottingham Ms L Happerfield, Cambridge Dr R Hunt, Stockport Dr M Ibrahim, London Mr P Jackson, Leeds Prof B Jasani, Cardiff Mrs N Johnson, Cambridge Ms S Jordan, London Dr J Joseph, Preston Mrs M Judd, Southampton Mrs J MacMillan, Glasgow Mr C Marsh, Newcastle Dr P Maxwell, Belfast Dr G King, Aberdeen Mrs H McBride, Belfast Mr J McGloin, London Dr S McQuaid, Belfast Mr K Miller, London Ms J Moorhead, London Dr M Morgan, Cardiff Ms P Jones, London Ms A Newman, London Mrs L Necus, Kettering Dr G Orchard, London Ms S Parry, London Dr S Pinder, London Dr M Pitt, Preston Mrs F Rae, Edinburgh Dr A Riley, Stirling Mr G Rock, Birmingham Mr J Ronan, Nottingham Dr J Starczynski, Birmingham Mrs C Thomas, Preston Mr P Thompson, Leeds Mr A Watson, Newcastle Mr P Wencyk, Nottingham Mrs H White, Maidstone Mrs J Williams, Portsmouth Ms S Wozniak, Cardiff Australia Mrs J Brincat, Victoria Canada Mrs J Tunnicliffe, Vancouver, Prof. J Bartlett, Toronto Denmark Mr J Askaa, Copenhagen Dr E Baslev, Herlev Dr B Rasmussen, Roskilde Germany Dr Iris Nagelmeier, Kassel Slovenia Dr M Flezar, Ljubljana Mrs I Kirbis, Ljubljana South Africa Mrs R Van Wijk, Cape town Sweden Dr G Elmberger, Stockholm Switzerland Prof. Pierre-Andre Diener, St Gallen Hungary Dr T Krenacs, Szeged Ireland Prof E Kaye, Dublin Mr K McAllister, Dublin Dr T O’Grady, Dublin Ms Yvonne Connolly, Dublin Dr Hilary Magee, Dublin Portugal Dr J Cabecadas, Lisbon Dr M Franco, Lisbon Dr F Schmitt, Porto Mr A Ferrero, Lisbon Mrs T Periera, Lisbon Mr R Roque, Lisbon Mr J Matos, Lisbon Journal layout and design prepared by UK NEQAS ICC & ISH © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 1 Meeting Announcement Molecular Pathology: Focussing on Patients October 12th – 14th 2012 A joint meeting provided by UK NEQAS for ICC & ISH and UK NEQAS for Molecular Genetics at The Beaumont Estate Hotel & Conference Centre Old Windsor, UK www.beaumonthousewindsor.co.uk Friday 12th October 12.00 Breast Cancer Registration and buffet lunch Lung Cancer: Pathology, Personalised Therapy & Related Biomarkers 14.00 Introduction by chairman Professor Adrienne Flanagan (UCL Cancer Institute) 14.45 Histopathology of lung cancer Dr Mary Falzon (University College London Hospitals) 15.30 Refreshments and trade 15.50 “Personalized Therapy for Advanced Non-small Cell Lung Cancer Professor Roy Hebst (Yale Comprehensive Cancer Centre) 16.30 ALK Rearrangements in Non-Small Cell Lung Cancer Dr Jens Dhein (Abbott Molecular) 17.20 Summary and discussion 11.00 Usual and unusual molecular Her-2/neu signal patterns in breast carcinoma Dr Matteo Brunelli (Verona, Italy) 11.50 HER2 IQFISH pharmDx™. Get your In Situ Hybridization Results in 3½ hours. Performance Evaluation – Results from IntraLaboratory Comparison Study Dr Iris Nagelmeier (Targos) Clinical Perspectives – How will this new Technology Change the Use of ISH in Cancer Diagnostics and the value for Oncologist and Patients Dr Kenneth Bloom (GE Health Care- Clarient) 12.35 Lunch and trade 14.00 Introduction by chairman Andrew Dodson (Liverpool Royal Infirmary) 14.05 The Roche oncology pipeline Dr Julian Cole (Roche Products Ltd) 14.50 The Roche biomarking pipeline Dr Eric Walk, (Ventana – Tucson) 15.35 Refreshments and trade th Saturday 13 October Novel Slide Based Testing 9.00 Introduction by chairman Professor Bharat Jasani (University of Wales College of Medicine) 9.05 Modern slide based predictive testing Dr Kenneth Bloom (GE Health Care- Clarient) 16.00 Pathology of the GI tract Professor Marco Novelli ( UCLH) 9.50 Current status of IHC4 in breast cancer Professor Mitch Dowsett (ICR Royal Marsden Hospital) 16.45 The impact of cetuximab therapy on colorectal cancer TBC 10.35 Refreshments and trade 17.30 Summary and discussion GI Tract: Pathology, Personalised Medicine & Targeted Therapy © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 2 Meeting Announcement Sunday 14th October Session 3 Selected Topics 9.00 Introduction by chairman Dr Matteo Brunelli (Verona, Italy) 9.05 Aspects of Quality Assessment (Part I) Dr Merdol Ibrahim (UK NEQAS –ICC & ISH, UCL) 9.40 UK NEQAS ICC & ISH scheme updates: Technical modules for breast ISH and Gastric ICC HER2 Suzanne Parry (UK NEQAS –ICC & ISH, UCL) 10.15 Refreshments and trade 10.45 Oncotype DX Dr Christer Svedman (Genomic Health) 11.30 The role of NICE in biomarker approval Professor Ian Cree (Warwick University Hospital) 12.15: Summary, discussion and presentation of poster prizes. 12.30 Lunch and depart Satellite Meetings Saturday 13th October Molecular Pathology Meeting Leader – Dr Sandi Deans 16.00 Introduction by chairman Dr Philippe Taniere (Birmingham) 16.05 Metastatic Melanoma – The disease and current treatment TBC 16.45 Metastatic Melanoma – The laboratory’s perspective Dr David Gonzalez de Castro (Royal Marsden Hospital) UK NEQAS Mock Assessments 10.00 - 6.00. UKNEQAS –ICC & ISH (Meeting Leader – Dr Merdol Ibrahim, UKNEQAS –ICC & ISH) ALK Workshop 12.30 -14.00. Workshop for ALK in Non-Small Cell Lung Cancer (Workshop Leader - Michael Gandy, UCL-Advanced Diagnostics) Conference dinner and entertainment from 19.00 Sunday 14th October 9.00 - 2.30. UK NEQAS - CPT (Meeting Leader – Garry Thompson (UKNEQAS-CPT) Session 1 9.25 Introduction by chairman Dr Sandi Deans (UK NEQAS for Molecular Genetics) 9.30 Aspects of personalised medicine Dr Hendrik-Tobias Arkenau (Sarah Cannon Research POSTERS Abstracts are invited for posters – closing date 31st UK) TBC 9.30 - 11.00. Workshop on Gastric HER-2 (Workshop Leader - Dr Iris Nagelmeier, Targos) August 2012 10.30: Refreshments and Trade 11.00 Crizotinib: a wonder drug? Dr Sanjay Popatt (Royal Marsden Hospital) 11.50 Molecular diagnostics in lymphoma Professor Ming Du (Addenbrooke’s Hospital) 12.30 Lunch and Trade Session 2 14.00 Introduction by chairman Dr Rachel Butler (Cardiff) 14.05 Molecular markers in ovarian cancer Dr James Brenton (CR-UK) TBC CRUK Stratified Medicine Dr James Peach (CR-UK) TBC 14.50 15.35 Royal College and IBMS CPD points – to be confirmed For Further Details & Registration Click HERE Or Visit www.ukneqasicc.ucl.ac.uk/ meetings.shtml Refreshments and Trade © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 3 UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback Neil Bilbe, Merdol Ibrahim and Keith Miller Introduction Survey questions and topics As part of the annual requirements of an EQA scheme to assess user satisfaction, a survey was sent to all participants in May 2012. Q1. Packaging of samples Method Q3. Time to stain/return samples In May 2012, approximately 528 active participants were registered with UK NEQAS ICC & ISH. An email, with a link to the online survey, was sent to each of them, along with instructions. Participants were given 1 month to respond – the closing date was June 8th 2012. At the start of the survey, there were 5 mandatory fields to complete: Participant Number Region (UK or non-UK) Person completing survey Yearly workloads Modules participated in for year 2011/2012 (Runs: 94 – 97) There were also a number of optional fields including ‘How long have you been using our service’ Q2. Labelling of slides, module identification Q4. Details in cover letter and online Q5. Procedure for returning samples Q6. Web based format of the results Q7. Assessor comments and feedback Q8. Technical help and advice Q9. Communication with UK NEQAS ICC & ISH Q10. Dealing with complaints Q11. Ease of contacting UK NEQAS ICC & ISH Q12. The UK NEQAS ICC & ISH E-Journal Q13. UK NEQAS ICC & ISH meetings generally Q14. Location of UK NEQAS ICC & ISH meetings There were 26 main questions. For the first 16 questions respondents were asked to give a rating of: Very Satisfied Satisfied Neutral Dissatisfied or Very Dissatisfied Question 17 asked how likely participants were to continue using the service; questions 18, 19, 20, 21, 23 and 24 required a Yes or No type response. Questions 22 A, B, & C asked participants to rate the quality of the EQA material. The final two questions (Q. 25 & 26) asked for the overall rating of our service; firstly by satisfaction level, and secondly, with a score out of 10. At the end of the main survey there were 4 additional questions (optional) relating to the use of in-house controls. Return Details 167 single replies were received, (any duplicate, incomplete or multiple entries were deleted), approximately 32% of participants. Q15. Content or type of meetings Q16. Number of meetings Q17. How likely to continue using our service Q18. Would you recommend service to others Q19. Ever had cause to complain to UK NEQAS ICC & ISH office Q20. Do you treat UK NEQAS ICC & ISH samples differently to your in-house controls/slides Q21. Do you find the assessment of your in-house controls useful Q22. How do you rate the quality of: EQA Tissue sections EQA Cytospins EQA Cell Lines Q23. Do you use your EQA results to try and improve the quality of your in-house staining Q24. Have you ever requested a reassessment Q25. Overall how satisfied with our service Q26. Rating of UK NEQAS ICC & ISH out of 10 67 (40%) of replies were from UK participants 31% of all registered UK participants 100 (60%) of replies were from overseas (OS) participants 32% of all registered non-UK participants. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 4 UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback At the end of each section, or following some individual questions, there were comments sections allowing participants to express their views, or make any comments they felt would be useful to UK NEQAS ICC & ISH management. Overall analysis of satisfaction Results from the response to Q. 25 & Q. 26 relating to overall satisfaction levels. User Survey 2012: Level of Satisfaction by Percentage (S) Slides & module labelling/identification: 58% (D) Web based format of results/Time to stain and return slides (2 topics): 3.5% Part 2: Participant feedback and communication section (Q. 7 – 12) (S) Ease of contacting UK NEQAS: 30.5% (D) Assessor comments and feedback: 12.5% 80% 70% Part 1: Sample and results section (Q. 1 – 6): 65.66% 60% Part 3: UK NEQAS ICC & ISH meetings section (Q. 13 – 16) % of Labs 50% 40% (S) UK NEQAS ICC & ISH meetings: 10.1% (D) Location of meetings: 6.5% 30% 24.70% 20% 9.64% 10% 0.00% 0.00% Dissatisfied V. Dissatisfied 0% V. Satisfied Satisfied Neutral Very Satisfied (41) Satisfied (109) Neutral (17) Very/Dissatisfied Part 4: Specific questions about the service (Q. 17 – 21) These required answers not related to satisfaction or dissatisfaction. 24.7% 65.7% 9.6% 0% 17. How likely are you to continue to use our service? Effectively, over 90% of users were either Very Satisfied or Satisfied with the service, 9.6% responded to being Neutral. There were no Dissatisfied responses this year (1 in 2011). Response by region: UK (67) OS (100) Very Satisfied 21 (31.3%) 20 (20%) Satisfied 43 (64.1%) 66 (66%) 3 (4.4%) 14 (14%) 0 (0%) 0 (0%) 18. Would you recommend this service to others? Neutral Very/Dissatisfied N.B. In general, more UK labs expressed higher percentages of satisfaction than OS labs. Replies to individual questions The response to individual questions was not mandatory, therefore the number of participants leaving feedback varied from question to question, and topic to topic. The highest levels of very satisfied (S) and highest level of dissatisfaction (D) for each of the sections is summarised below. 19. Have you ever had cause to complain to UK NEQAS ICC & ISH in last year? © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 5 UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback 20. Do you treat UK NEQAS ICC & ISH samples differently to your in-house sections/samples? 21. Do you find the assessment of your in-house controls useful? Question 23 asked whether labs used their EQA results to improve in-house staining Question 24 asked whether labs had ever requested a reassessment of their EQA result Questions 22 A, B & C related to the quality of the EQA material Module Related Data a. Tissue sections The average number of modules that labs participate in is 3.5; the combined number of modules for all labs responding was 583, the number of labs for each module was: b. Cytology preparations When this is compared to the actual number of labs registered for each module: c. Cell lines On average 35.6% of labs registered for a particular module responded to the survey, with a median of 33.6%. Lowest response 29.4% (Her2 both ICC & ISH), highest 48.1% (Cytology). © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 6 UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback Overall rating of UK NEQAS ICC & ISH out of 10 by module (Q. 26) There is little difference in the two sets of figures, with over 90% of participants ‘satisfied’ in both surveys. Using the same method employed for the 2010 and 2011 surveys, the percentage of non-satisfied responses derived from totalling up all the relevant individual questions (Q. 115/16) is 3.1% (2010), 3.3% (2011) and 3.0% (2012) so again static. Levels of dissatisfaction 2011 v 2012 The lowest levels of satisfaction in 2011 are compared with the results for 2012: The average score was 7.8 (same as last year), with a low of 7.7 (cytology and neuropathology) and a high of 8 (HER2 ISH). The median was also 7.8. Location of meetings (same level) Assessor comments (improved) Online report format/data input (improved) Time given to stain samples (worse) Handling of complaints (improved) Receipt of samples (same) Most of these changes are small +/- 1 - 2% Overall satisfaction levels by module (Q. 25) Topic Using the combined Very Satisfied and Satisfied percentages returned for each module the results are: 2011 % (Dissatisfied) 2012 % (Dissatisfied) Location of meetings 7.1 7 Assessor comments 13.6 12.5 Online reports/data input 6.4 3.5 Handling of complaints 2.1 1.1 0 0 2.8 4 Receipt of samples Time given to stain samples Comments, suggestions, and feedback about the service: With a low of 84.2% (cytology) and a high of 96% (HER2 ISH) this mirrors the scores out of 10 (see graph above). Comparisons with data from 2011 Survey The levels of satisfaction remain relatively unchanged, but with a slight decrease in the number of Very Satisfied ( 6.8%) responses and an increase in the Satisfied ( 7.1%) responses Comments were returned throughout the survey; these were collated and categorized into 6 main areas: Sample and results section Participant feedback and communication section UK NEQAS ICC & ISH meetings section Quality of UK NEQAS ICC & ISH EQA material General comments and feedback about the service Comments relating to the in-house controls mini survey Responses 2011 (%) 2012 (%) Very Satisfied 31.5 24.7 Satisfied 58.6 65.7 All other responses 9.9 9.6 (this will form part of a separate article and therefore will not be discussed here) It is not possible to list all the comments, many were not relevant to the section or questions they appeared in or responded to, and several participants made the same or a similar comment. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 7 UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback Suggestions and Comments “with a response from UK NEQAS ICC & ISH” Cover letters and emails should mention both ICC and the ISH run numbers and references “The HER2 ISH run number, along with the ICC run numbers, will appear on future participant communications (letter, email etc)” Late receipt of slides and hence return of samples (Overseas labs) “UK NEQAS ICC & ISH appreciates that slides sent to some countries/regions takes longer than we would like, any labs experiencing particular difficulties are advised to contact the scheme. There is an option for slides to be sent by courier, but the labs have to pay for this. Labs are not penalised for late submissions, but we do audit the receipt times.” Data entry still complicated and time consuming “In order for us to give the level of feedback we desire (best methods etc) input of data relating to methodologies is extremely important. In order to ensure that labs re-enter important data every time these fields are not saved for each run and are mandatory” More information on UK NEQAS ICC & ISH samples (pathology, fixation and processing) “The amount of information we are able to provide is dependent on the details we receive from the EQA material supplier, but we will endeavour to obtain as much as we can” Variable and conflicting assessor comments particularly for breast modules (ER/HER2) “The breast modules are amongst the most difficult to assess, and like any staining method are very subjective; the comments are those of the individual assessors, UK NEQAS ICC & ISH does not audit these prior to reports being generated. Participants are welcome to contact the scheme concerning any report related issues.” Cell lines require different (pre) treatments to paraffin sections making staining difficult or tricky “This should only apply to certain modules or tissue types, but UK NEQAS ICC & ISH is aware that the preparation (fixation etc) of cell lines may differ from tissue sections” Publication of the ISH reference centre methodologies “Best methods are available as part of the standard feedback, both online, and in the E-Journal. UK NEQAS ICC & ISH will look at the feasibility of collating the reference centre methods” “The forthcoming meeting at Windsor will have ICC and ISH workshops. UK NEQAS ICC & ISH is also planning to run some local technical meetings for all modules, as well as possibly introducing webcasts to its educational portfolio” Cell blocks more common than cytospins now “UK NEQAS ICC & ISH currently uses effusions to create a mixed cellular population. Cytospins are an accepted preparation method in most labs and are a cytological sample. The use of cell blocks may be trialled in the future, but in view of the range of techniques in cytology, cytospins are considered the best compromise at present” UK NEQAS ICC & ISH samples do not reflect laboratory day-to-day specimens “Samples used by UK NEQAS ICC & ISH are taken from routine surgical cases and normally treated the same as for the diagnostic samples on the same cases. Given the quantity of material required for some of the modules may mean that on occasion, we are unable to obtain sufficient amounts of material resulting in samples being treated differently. The tissue, fixation and section details are provided as part of the online data” More antigen specific staining criteria “UK NEQAS ICC & ISH provides an overview of the staining requirements and characteristics of the antigens it requests. The tissue type and pathology (where appropriate) should allow labs to glean the expected staining of our EQA samples” Website often out-of-date and lacks information “The UK NEQAS ICC & ISH website is currently listed as a future scheme enhancement, but with the recent launch of several new modules and other upgrades, is now temporarily on hold. The new UK NEQAS ICC & ISH E-Journal contains the most up-to-date technical feedback and news” Variety of antibodies needs to be expanded (cytology) “We carried out a user ‘antibody repertoire’ survey earlier this year, we will be contacting our suppliers with the details of any markers not currently being used by UK NEQAS ICC & ISH so that they may be able to provide suitable material in order for us to do so in the future” Slides received broken more than previously “The final handling and carrying of the packages sent out to participants is not overseen by UK NEQAS ICC & ISH. This will be discussed to see if arrangements can be made to minimise this as much as possible” More technically based meetings and workshops (ISH) with some done online © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 8 UK NEQAS ICC & ISH User Survey 2012: Participant Feedback Data entry only remembers details for 1st stain not 2nd “The online entry system should store both sets of data. It is important to remember that until both sets of details have been added, to use the Save button so that you can return at a later date” Control material (tumours etc) very precious so are reluctant to use for EQA purposes “It is understandable that labs are reluctant to use valuable material for EQA purposes, but EQA samples should ideally be treated/stained alongside routine material demonstrating the same antigen. Admittedly, this creates a problem concerning the use and availability of the control slide(s). If this information is relayed to UK NEQAS ICC & ISH we will be aware of the reason for the use of the particular control material/slide submitted” Summary Levels of participant satisfaction remain high at c. 90%. The actual level of Very Satisfied respondents showed a decrease from 31.5% (2011) to 24.7% (2012). The reason for this appears to be the reduction in Very Satisfied UK participants (down 9.7%). The main areas where there were any significant differences in dissatisfaction between UK and OS labs are for ‘time taken to return slides’ and the ‘procedure for returning samples’. This possibly reflects the increase in OS participants and decrease in UK labs, so is perhaps not unexpected. The percentage of UK labs returning adverse comments concerning: ‘Assessor comments and feedback’ and ‘The number of UK NEQAS ICC & ISH meetings’ was higher than for OS labs; all other areas were equal. The overall number of dissatisfied response to all questions was exactly 50:50 between UK and OS labs (32/64 each). The survey results will be reviewed and discussed further, at UK NEQAS ICC & ISH Quality Management meetings, and the Annual Management Review, October 2012. UKNEQAS ICC & ISH staff and management would like to thanks all the users and participants for their time and comments whilst completing this survey. If you require any further information, or wish to contact the office concerning this article, please write, call, or email: n.bilbe@ucl.ac.uk When comparing the score out of 10 results from last year, the overall response is the same at 7.8/10. Only three modules showed any significant difference in scores: 1. General Path (up) 7.6 to 7.9 2. HNPCC (down) 8.4 to 7.9 3. HER2 ISH (up) 7.7 to 8.0 The feedback received via the assessor comments, all aspects of the online data input, and the results format, are still the main cause of adverse comments and dissatisfaction, although this is closely followed by the comments from nonUK labs concerning the time taken to receive/stain/return EQA samples. The levels of ‘very satisfied’ responses for specific questions are relatively static, with two noticeable exceptions: Time to stain samples ( 17%) and Assessor feedback and comments ( 3.5%) The new E-Journal had 72% Very/Satisfied with the rest Neutral. Section/cytospin/cell line quality is acceptable, without being spectacular, with between 6-10% returning an ‘excellent’ response; the majority (80-90%) responded either Very Good or Good/Acceptable. 4-6% responded Poor and only the EQA cell lines got a response of Very Poor 0.9% (1 lab). There were no significant differences in the UK or OS lab responses. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 9 The General Pathology Module Run 98 Perry Maxwell and Merdol Ibrahim Gold Standard Second Antibody Antigens Assessed: CD31/CD34 TTF-1 Tissue Sections circulated: Normal Appendix & GIST Normal Lung & Lung Tumour Number of Registered Participants: 357 Introduction Endothelial markers - Gold Antibody CD31: also called Platelet Endothelial Cell Molecule-1 (PECAM1) is a transmembrane glycoprotein found at endothelial cell junctions which is thought to play a role in angiogenesis, wound healing and thrombosis. It is expressed on endothelial cells in a wide range of tissues including sinusoidal cells of liver, lymph nodes and spleen. It is also found on megakaryocytes, platelets and other haematopoietic cells including B-lymphocytes particularly in the follicular mantle zone. Its main diagnostic use is in the identification of endothelial tumours as it is said to be a more sensitive marker than either CD34 or Von Willebrand Factor (DeYoung et al). It has been shown to be a good marker of endothelial differentiation. Staining is predominately in the cell membrane but some weaker staining of the cytoplasm can be seen. CD34: is a transmembrane glycoprotein which is expressed on immature haematopoietic stem/progenitor cells, capillary endothelial cells and embryonic fibroblasts. It can also be found in splenic marginal zones, dendritic interstitial cells around vessels, nerves, hair follicles, muscle cells and sweat glands in various tissues. CD34 labels capillaries in most tissues but may be absent in large veins and arteries and is negative in the sinus endothelium of placenta and spleen. CD34 is an excellent indicator of vascular differentiation, regardless of the tumour grade, therefore it is a good marker for vascular tumours (Cerilli et al, Leong). Due to the comparatively wide range of cell types stained by CD34 it is recommended that this antibody is used with a panel of endothelial makers including CD31 and Von Willebrand Factor. There are a number of clones available for CD34, of which, QBEnd/10 is the most popular. Staining with CD34 is restricted to the cell membrane. Features of optimal immunostaining CD31 • Strong staining of the endothelial cells in the blood vessels and lymphatic vessels throughout the appendix • Strong staining of the T-cells in the base of the lamina propria and weaker staining of the B-cells in the follicular mantle with HIER pretreatment. • Minimal background staining. CD34 • Strong staining of the endothelial cells in the blood vessels and lymphatic vessels throughout the appendix • Strong staining on the dendritic interstitial cells in the lamina propria with HIER pre-treatment • Minimal background staining. Features of sub-optimal immunostaining CD31 and CD34 • Weak or negative staining of the endothelial cells and other elements in the appendix. • Non-specific nuclear staining possibly caused by over-pretreatment. • Inappropriate staining of, for example, epithelium and lymphocytes, probably due to over-pretreatment References 1. DeYoung BR, Wick MR, Fitzgibbon JF et al. CD31: an immunospecific marker for endothelial differentiation in human neoplasms. Applied Immunohistochem. 1993; 1: 97-100 2. Cerilli LA and Wick MR. Immunohistology of soft tissue and osseous neoplasms. In: Diagnostic Immunohistochemistry. Dabbs DJ. (Editor). Churchill Livingstone, Philadelphia 2002; 71 3. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. CD34. In: Manual of Diagnostic Antibodies for Immunohistology (1st Ed.). Oxford University Press, Oxford 1999; 83-84 4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Factor VIII RA (Von Willebrand factor). In: Manual of Diagnostic Antibodies for Immunohistology (1st Ed.). Oxford University Press, Oxford 1999; 167. Thyroid Transcription Factor (TTF1)- Secondary Antibody Thyroid transcription factor (TTF1) is part of the family of homeodomain (protein structural domain that binds DNA or RNA) transcription factors and is a gene regulatory factor expressed in the follicular epithelial and parafollicular c-cells of the thyroid, epithelial cells of the lung, brain and pituitary gland. TTF1 is essential for the normal development of both the thyroid and lung, and increased TTF1 immunohistochemical expression if seen in both pulmonary adenocarcinomas and thyroid neoplasms of follicular origin (follicular adenoma and follicular and papillary carcinoma). Not all pulmonary adenocarcinomas have been shown to be positive for TTF1, with a positivity range of between 65-80% (Comperat et al 2005), depending on the antibody clone used. TTF1 in small lung carcinomas have been shown in about 96% of cases (Ordonez et al., 2000) and in 75% of non-small cell pulmonary carcinomas, but generally not thought to be expressed in typical pulmonary carcinoids, although the literature does have some contrasting views. TTF1 can also be used to differentiate between tumours of primary and metastatic origin e.g. primary lung adenocarcinoma (T T F 1+/ c dx2- ) vs m et as t ast at i c gastroint est i nal adenocarcinomas (TTF1+/cdx2-). Furthermore, TTF1 alongside other antibodies such as CK 20 can help to further identify tumour types including Merkel cell carcinoma (TTF1-/CK20+) and metastatic small cell lung carcinoma ( TTF1+/CK20-). Features of optimal immunostaining Normal Lung Strong, nuclear staining of the basal epithelial cells lining the bronchial ducts Weak to moderate nuclear staining of bronchial luminal epithelial cells Clean background Lung adenocarcinoma Strong, nuclear staining virtually all neoplastic cells Strong, nuclear staining of the basal epithelial cells lining the bronchial ducts Weak to moderate nuclear staining of bronchial luminal epithelial cells Features of suboptimal immunostaining Weak staining of the basal epithelial cells lining the bronchial ducts Weak staining of neoplastic cells of the tumour Non-specific nuclear staining Excessive background staining References 1. Comperat E, Zhang F, Perrotin C, Molina T, Magdeleinat P, Marmey B, Regnard JF, Audouin J, Camilleri-Broet S. Variable sensitivity and specificity of TTF1 antibodies in lung metastatic adenocarcinoma of colorectal origin. Mod Pathol. 2005 18(10):1371-6. 2. Ordonez NG. Value of thyroid transcription factor-1 immunostaining in distinguishing small cell lung © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 10 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 1. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆34 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ αππενδιξ σεχτιον. Εϖεν ατ λοω ποωερ τηε στρονγ διστινχτ σταινινγ οφ τηε ϖεσσελσ ανδ ενδοτηελιαλ χελλσ ισ χλεαρλψ ϖισιβλε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:50, ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ. Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον Χ∆34 ιν ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ πρεδοµιναντλψ µεµβρανουσ ανδ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ. Φιγ 3. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆34 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον. Ονλψ α φεω ενδοτηελιαλ χελλσ ανδ ϖεσσελσ αρε δεµονστρατεδ ανδ τηε σταινινγ ισ ϖερψ ωεακ (χοµπαρε το Φιγ1). Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:00, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ1 ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ. Φιγ 4. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆34 ιν ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον. Τηε σταινινγ ισ ϖερψ ωεακ ανδ ιν σοµε αρεασ τηε αντιγεν ισ νοτ δεµονστρατεδ (χοµπαρε το Φιγ2). Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΘΒΕνδ αντιβοδψ, 1:00, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ1 ανδ Ρεφινε δετεχτιον κιτ. Φιγ 5. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆31 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ αππενδιξ σεχτιον. Χ∆31 νοτ ονλψ σταινσ ενδοτηελιαλ χελλσ ανδ ϖεσσελσ, βυτ αλσο µαντλε ζονε Β χελλσ ανδ Τ χελλσ ασ σεεν ιν τηισ ιµαγε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο (ϑΧ/70Α) αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ. Φιγ 6. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆31 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον. Τηε τυµουρ ισ νεγατιϖε φορ Χ∆31 βυτ τηε ενδοτηελιαλ χελλσ αρε στρονγλψ σταινεδ ασ εξπεχτεδ ανδ τηε βαχκγρουνδ ισ χλεαν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο (ϑΧ/70Α) αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:36 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 11 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 7. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νορµαλ λυνγ σεχτιον, σηοωινγ στρονγ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ ιν τηε επιτηελιαλ χελλσ. Σηοων το βεττερ αδϖανταγε ιν τηε ηιγη ποωερ ινσερτ ϖιεω. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΣΠΤ24 αντιβοδψ, 1:150, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 8. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον. ςιρτυαλλψ αλλ τηε νεοπλαστιχ χελλσ σηοω στρονγ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ, ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΣΠΤ24 αντιβοδψ, 1:150, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 9. Γοοδ ΤΤΦ−1 σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον. Τηε νεοπλαστιχ χελλσ ανδ βασαλ επιτηελιαλ χελλσ λινινγ τηε βρονχηιαλ δυχτ σηοω στρονγ, διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ, ωηιλε τηε λυµιναλ επιτηελιαλ χελλσ σηοω ωεακ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 8Γ7Γ3/1 ανδτιβοδψ, 1:200, ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ, ΧΧ1 στανδαρδ. Φιγ 10. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νορµαλ λυνγ σεχτιον. Αλτηουγη τηε επιτηελιαλ χελλσ αρε σταινινγ ασ εξπεχτεδ, τηερε ισ αλσο ιναππροπριατε βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 8Γ7Γ3/1 αντιβοδψ, ον τηε Λειχα ΒονδΜαξ, ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 11. Ποορ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον. Τηε σταινινγ ισ ϖερψ ωεακ ανδ διφφυσε (χοµπαρε ωιτη Φιγσ 8 & 9). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεχτορ ΣΠΤ24 αντιβοδψ, 1:400, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ σταινεδ ον τηε ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ αυτοσταινερ ωιτη τηε ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ κιτ. Φιγ 12. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΤΤΦ−1 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ λυνγ τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ χψτοπλασµιχ σταινινγ ανδ λιττλε σπεχιφιχ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 8Γ7Γ3/1 αντιβοδψ, 1:500, πρε−τρεατεδ ιν τηε ∆ακο Πασχαλ ανδ σταινεδ ον τηε αυτοσταινερ ωιτη τηε ΡΕΑΛ κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:36 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 12 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ ΡΥΝ 98Α Χ∆31 / Χ∆34 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ 80 ΡΥΝ 98Β Χ∆31 / Χ∆34 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 140 4 = 0 (0%) 4 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 70 5 = 0 (0%) 120 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 100 9 = 5 (1%) 50 10 = 7 (2%) 11 = 13 (4%) 40 12 = 22 (6%) 30 13 = 25 (7%) νο. οφ ρετυρνσ 8 = 9 (3%) νο. οφ ρετυρνσ 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 60 14 = 20 (6%) 20 8 = 0 (0%) 9 = 1 (0%) 80 10 = 0 (0%) 11 = 2 (1%) 12 = 15 (4%) 60 13 = 15 (4%) 14 = 10 (3%) 40 15 = 41 (12%) 15 = 22 (6%) 16 = 79 (23%) 10 16 = 129 (38%) 20 17 = 55 (16%) 17 = 53 (16%) 18 = 33 (10%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 18 = 41 (12%) 0 19 = 23 (7%) 4 5 6 7 8 9 20 = 9 (3%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 199 (58%) 16 − 20 = 274 (81%) 13 − 15 = 86 (25%) 13 − 15 = 47 (14%) 10 − 12 = 42 (12%) 10 − 12 = 17 (5%) 0 − 9 = 14 (4%) 0 − 9 = 1 (0%) Μεδιαν = 14.00 Μεδιαν = 15.00 ΡΥΝ 98Χ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ 60 19 = 28 (8%) 20 = 23 (7%) ΡΥΝ 98∆ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 140 4 = 0 (0%) 4 = 1 (0%) 5 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 50 6 = 0 (0%) 120 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 7 = 1 (0%) 40 9 = 4 (1%) 10 = 6 (2%) 11 = 11 (3%) 30 12 = 34 (10%) 13 = 15 (5%) 8 = 4 (1%) 100 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 8 = 7 (2%) 9 = 0 (0%) 10 = 3 (1%) 80 11 = 3 (1%) 12 = 19 (6%) 60 13 = 8 (2%) 14 = 14 (4%) 14 = 13 (4%) 20 15 = 36 (11%) 40 15 = 35 (11%) 16 = 137 (42%) 16 = 59 (18%) 10 17 = 52 (16%) 17 = 49 (15%) 20 18 = 32 (10%) 18 = 48 (15%) 0 19 = 26 (8%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 20 = 13 (4%) 0 19 = 13 (4%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 20 = 5 (2%) Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 198 (61%) 16 − 20 = 236 (73%) 13 − 15 = 64 (20%) 13 − 15 = 57 (18%) 10 − 12 = 51 (16%) 10 − 12 = 25 (8%) 0 − 9 = 12 (4%) 0 − 9 = 5 (2%) Μεδιαν = 13.50 Μεδιαν = 14.00 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 13 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ. Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆31 / Χ∆34 Πριµαρψ Αντιβοδψ : Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) Αντιβοδψ ∆εταιλσ Αβχαµ Χ∆31 αβ9498 (ϑΧ/70Α) Βεχκµαν Χουλτερ Χ∆34 ΙΜ0786 (ΘΒενδ10) ΒιοΓενεξ ΑΜ236 5Μ (ΘΒενδ10) Χ∆34 Χελλ Μαρθυε Χ∆31 131Μ/760−4378 (ϑΧ70) Χελλ Μαρθυε Χ∆34 134Μ/760−2620/ΧΜΧ33 (ΘΒενδ) ∆ακο Χ∆31 ΡΤΥ ΦΛΕΞ ΙΡ610 (ϑΧ70Α) ∆ακο Χ∆34 ΡΤΥ ΦΛΕΞ ΙΡ632 (ΘΒενδ10) ∆ακο Χ∆34 ΡΤΥ Ν1632 (ΘΒενδ10) ∆ακο Μ0823 (ϑΧ/70Α) Χ∆31 ∆ακο Μ7165 (ΘΒενδ10) Χ∆34 Λαβςισιον Χ∆34 ΜΣ363Π (ΘΒενδ10) Λεχια/Νοϖοχαστρα Χ∆31 ΝΧΛ−Χ∆−31−1Α10 (1Α10) Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆31 ΡΤΥ ΠΑ0250 (1Α10) Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΝΧΛ−ΕΝ∆ (ΘΒενδ) Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΡΤΥ ΠΑ0212 (ΘΒενδ) Οτηερ Σεροτεχ Χ∆34 ΜΧΑ 547 (ΘΒενδ10) ΣΚΨΒΙΟ Χ∆34 (ΘΒενδ10) Τηερµο Σχι Χ∆31 ΜΣ353 (ϑΧ/70Α) ςεχτορ Χ∆34 ςΠ Χ345 (ΘΒενδ10) ςεντανα Χ∆31 760−2619 (ϑΧ/70Α) ςεντανα Χ∆31 760−4378 (ϑΧ70) ςεντανα Χ∆34 790−2927 (ΘΒενδ10) Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ ∆ακο Πασχαλ ∆ακο ΠΤΛινκ Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 Μιχροωαϖε Οϖεν ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Οτηερ Πρεσσυρε Χοοκερ Στεαµερ ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ2 (Ε) Ωατερ βατη 68 ΟΧ Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ Ν % 1 1 1 1 4 4 11 6 46 118 2 7 2 65 12 6 3 1 1 11 2 2 28 100 100 0 100 75 75 100 83 65 86 100 71 50 94 100 67 33 100 100 100 50 100 71 Χ∆31 / Χ∆34 Ν 7 6 59 7 13 12 38 37 13 8 7 8 3 0 14 17 3 0 12 11 1 2 16 26 0 1 1 % 100 83 92 86 85 92 84 95 85 50 86 63 100 0 71 76 33 0 67 82 0 100 69 88 0 100 100 Αντιβοδψ ∆εταιλσ Βιογενεξ ΜΥ397−ΥΧ Χελλ Μαρθυε 343Μ−95/96/97 (8Γ7Γ3/1) Χελλ Πατη ΜΟΒ 285 (8Γ7Γ3/1) ∆ακο ΙΡ056 (8Γ7Γ3/1) ∆ακο ΙΣ056 (8Γ7Γ3/1) ∆ακο Μ3575 (8Γ7Γ3/1) Ινϖιτρογεν 180221 (8Γ7Γ3/1) Λειχα Βονδ ΤΤΦ1 ΣΠΤ24 (ΡΤΥ) ΠΑ0364 Λειχα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ Λ136446 Μεναρινι ΤΤΦ1 ΜΠ−087−χµ05 Νεοµαρκερ ΤΤΦ−1 ΜΣ−699−ΠΟ Νεοµαρκερσ ΜΣ−69−ΞΞ (8Γ7Γ3/1) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) Νοϖοχαστρα ΠΑ0364 (ΣΠΤ24) Οτηερ ΤΗερµο−Σχιεντιφιχ ΜΣ/699Π1 ςεχτορ ςΠ−Τ483 (ΣΠΤ24) ςεντανα 760−2829 (8Γ7Γ3/1) ςεντανα ΤΤΦ−1 (8Γ7Γ311) 790−4398 Ζψµεδ 08−1221 (8Γ7Γ3/1) Ζψµεδ 18−0221 (8Γ7Γ3/1) 6 4 58 6 5 13 36 53 13 2 5 11 2 4 7 25 0 2 7 12 0 4 9 37 1 1 2 Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ % 100 75 81 83 100 92 97 85 62 50 80 64 0 100 57 88 0 50 43 67 0 100 67 73 100 0 100 ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ∆ακο Προτεινασε Κ (Σ3020) ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Οτηερ ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1 ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 2 ςεντανα Προτεασε ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018) % 2 1 9 3 6 3 96 4 12 14 1 2 5 83 22 5 3 3 10 10 22 5 3 ΒΟΝ∆ ΡΤΥ ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) ΠΑ0364 Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) Ν Ν 50 100 56 100 100 67 68 50 100 93 100 50 80 98 100 100 67 67 90 70 68 20 33 Χ∆31 / Χ∆34 Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 Ν % Ν % 6 1 96 1 6 1 1 3 100 100 79 100 100 100 100 33 7 0 109 0 0 0 0 0 100 0 77 0 0 0 0 0 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 14 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Χ∆31 / Χ∆34 ∆ετεχτιον Ν Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ) ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ Βιοχαρε πολψµερ (Μ4Υ534) ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ) ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) ∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007) ∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7 ∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (Κ5207) ∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354) ∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713) Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) Νονε ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ) Οτηερ Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200) ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200) ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500) ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) 2 28 1 1 4 10 37 8 2 1 1 3 1 2 1 1 89 6 1 1 2 10 1 2 1 1 20 8 72 Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 % Ν 100 89 100 100 75 90 97 88 100 100 0 33 100 100 100 0 89 83 100 100 100 80 100 100 100 100 60 88 78 3 23 1 1 3 6 42 7 0 0 1 3 0 2 2 1 90 5 2 5 2 11 1 2 1 1 24 5 72 % 67 83 100 100 67 83 88 71 0 0 100 33 0 0 100 100 89 60 0 100 100 64 100 100 100 100 79 80 72 Χηροµογεν Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΑΕΧ ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430) ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ) ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ) ∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3465) ∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468) ∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001) ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆) Λαβςισιον ∆ΑΒ µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860) Οτηερ Σιγµα ∆ΑΒ (∆56 5) Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637) Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905) ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ςεντανα ∆ΑΒ ςεντανα ιϖιεω ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ Χ∆31 / Χ∆34 Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) Ν % Ν % 1 52 1 1 1 1 1 9 2 1 50 6 2 1 1 8 9 1 1 1 79 9 13 80 3 100 94 0 100 100 100 0 89 50 100 92 100 0 100 100 88 100 100 100 0 86 67 54 75 67 2 42 0 1 1 2 0 8 4 3 47 6 1 1 1 7 7 0 2 1 85 5 19 79 1 50 81 0 100 100 50 0 63 75 67 85 67 0 100 100 71 100 0 0 100 92 80 79 71 0 Γενεραλ Πατηολογψ Ρυν: 98 Χ∆31 / Χ∆34 Αυτοµατιον ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ ∆ακο Αυτοσταινερ ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ ∆ακο ΤεχηΜατε 500 Λαβςισιον Αυτοσταινερ Λειχα Βονδ Μαξ Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ Νονε (Μανυαλ) Οτηερ Σηανδον Σεθυενζα ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) Ν % Ν % 4 2 10 43 9 6 1 10 77 33 7 10 3 4 8 34 71 50 100 80 88 89 100 100 90 88 91 86 90 100 100 38 71 77 4 1 10 33 14 9 1 10 83 25 6 9 4 4 7 29 75 50 100 80 85 79 67 100 80 90 88 67 44 100 75 86 62 77 ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Γολδ Στανδαρδ Αντιβοδψ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ7165 (ΘΒενδ10) Χ∆34 , 30 Μινσ, 21 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ιλυτιον 1: 50 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ακο ηιγη πΗ ταργετ ρετριεϖαλ σολυτιον, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) , 30 Μινσ, 21 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 15 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 2 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΝΧΛ−ΕΝ∆ (ΘΒενδ) , 15 Μινσ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μετηοδ: ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 ∆ιλυτιον 1: 25 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ∆ετεχτιον: Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 10 Μινσ Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα/Νοϖοχαστρα Χ∆34 ΝΧΛ−ΕΝ∆ (ΘΒενδ) , 60 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 27 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ∆ιλυτιον 1: 40 Χ∆31 / Χ∆34 − Μετηοδ 4 Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ7165 (ΘΒενδ10) Χ∆34 , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Αυτοµατιον: ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Ασ Περ Κιτ, ΠΗ: 9 ∆ιλυτιον 1: 100 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Σεχονδαρψ Αντιβοδψ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) , 30 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: Οτηερ ∆ιλυτιον 1: 50 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 16 ΓΕΝΕΡΑΛ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 2 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Ινϖιτρογεν 180221 (8Γ7Γ3/1) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.4 ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, ΠΗ: 9 ∆ιλυτιον 1: 200 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 22 ≡Χ., Τιµε 1: 7 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεχτορ ςΠ−Τ483 (ΣΠΤ24) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Αυτοµατιον: Λαβςισιον Αυτοσταινερ ∆ιλυτιον 1: 200 Μετηοδ: Στ ΑΒΧ Μαιν Βυφφερ: ΤΒΣ + Τωεεν ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ∆ακο ηιγη πΗ ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆) ∆ετεχτιον: ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Τηψροιδ Τρανσχριπτιον Φαχτορ 1 (ΤΤΦ1) − Μετηοδ 4 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΤΤΦ−1 (ΣΠΤ24) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Αυτοµατιον: Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ Μετηοδ: µεναπατη ξχελλ πλυσ Μαιν Βυφφερ: ΤΒΣ + Τωεεν ΗΜΑΡ: Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ, Βυφφερ: χιτρατε, ΠΗ: 6 ∆ιλυτιον 1: 1/50 ΕΑΡ: Χηροµογεν: µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860), 25 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ ∆ετεχτιον: ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) , 10 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 17 The Breast Hormonal Receptor Module Run 98 Suzanne Parry and Merdol Ibrahim Antigens Assessed: Progesterone Receptors (PR) Tissue Sections circulated: Sections from a composite block (see table below) Number of Registered Participants: 325 Circulated Tissue The table below left shows the staining characteristics of the tissue sections circulated during Run98, which composed of three infiltrating ductal carcinomas (IDCs) with differing levels of receptor expression. The staining of the tumours were characterised using the PGR 16 (A) antibody clone. Tissue Sections % positivity Staining Intensity Allred / Quick Score A. IDC 85-95% High 7-8 B. IDC 11-33% Medium-High 4-6 C. IDC 0% Negative* 0 General Guideline Used in The Assessment of Slides SCORE 0 STAINING PATTERN Slide not returned by Participant. 1 or 2 No staining or staining of considerably fewer nuclei than expected in one or more of the distributed tissue sections, or inappropriate staining of nuclei in cells not expected to stain. 3 Staining of 10% or greater of tumour nuclei in each of the positive tumour sections, though substantially less than expected to stain, or staining is weaker than expected. 4 or 5 Demonstration of the expected proportion of nuclei stained in the invasive tumours, with roughly the expected staining intensity. Marks are also deducted when correct clinical interpretation of staining may be hindered due to factors such as: - False positive / false negative / non-specific or inappropriate staining - Excessive cytoplasmic or diffuse nuclear staining - Excessively strong or weak haematoxylin counterstain - Excessive Antigen retrieval resulting in morphological damage - Poor quality/inadequate choice of in-house control tissue ( poor/inadequate fixation, damaged cell morphology, over retrieval etc.) In-House Tissue Recommendations & Assessment Participants in-house control tissue MUST consist of composite breast tissue (cell line controls are an acceptable alternative), placed onto a single slide as outlined below: i. >80% tumour positivity with high intensity (Allred/Quick score 7-8) ii. 30-70% tumour positivity with low-moderate intensity (Allred/Quick score 4-6) iii. Negative tumour, with normal positively stained glands (Allred/Quick score <1) Participants NOT using a composite control are assessed a maximum score of a 'borderline' pass (10-12/20). © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 18 The Breast Hormonal Receptor Module Introduction Expression of the steroid hormone receptors, oestrogen receptor-alpha (ER- ) and progesterone receptor (PR, types A and B) in breast epithelial cells is important in the development and function of the normal breast (Anderson). They also play a key-role in proliferative and neoplastic diseases of the breast (Cui et al.). When examined by immunocytochemical staining, approximately 75% of primary breast cancers express ER- , and of those approximately 50% co-express PR. Hormone receptor status is a good predictor of response to antioestrogen based treatments such as tamoxifen and aromatase-inhibitors (Fisher et al). PR expression is under the control of ER- , and because of this it has been proposed that PR expression in a tumour indicates the presence of functional ER- (Cui et al); moreover, it potentially defines a subpopulation of patients with superior response to tamoxifen (Osborne et al); conversely, there is evidence that ER- positive tumours that are PR negative are best treated with aromatase-inhibitors in preference to the ER-antagonists (Cui et al.). Finally, patients whose breast tumours are ER- negative but PR positive respond equally well to anti-oestrogen based treatments as do those whose tumours are ER- positive (Ciocca and Elledge). All these factors lead to the conclusion that correct PR status determination is of great importance. Assessment Results Features of optimal immunostaining (figs 1- 4) • Staining of the expected proportion of invasive tumour nuclei with the anticipated staining intensity • Intense nuclear staining of the appropriate distribution in normal glands • Cytoplasmic staining not excessive • No background staining of connective tissues or inappropriately localised staining Features of sub-optimal immunostaining (figs 5-8) • Relatively weak nuclear staining of the receptor positive tumours and/or lower than the expected proportion of nuclei staining positive • Excessive cytoplasmic staining • Excessive background staining of connective tissue elements • Inappropriate staining of some cells e.g. lymphocytes, fibroblasts NEQAS Slide Results The overall pass rate for participants as a whole on the NEQAS distributed sections was 65% (scores of 13-20/20). 23% (10-12/20) of participants received a borderline score, and the failure rate was 12% (scores under 10/20). The main reason for failure during this assessment was due to false negative or lower than expected staining, in the midexpressing tumour (see figs 5&7). Another main contributor to failure in this assessment was over-excessive antigen retrieval, which caused inappropriate and non-specific staining and background (see figs 6&8). Once again all participants are encouraged to properly validate their methodologies and use appropriate composite control material, showing high, medium and negative PR expression, so both the sensitivity and specificity of the PR IHC staining can be adequately monitored. Run 98 Previous assessment runs for PR have highlighted the potential for false positive staining when using the rabbit monoclonal anti-PR antibodies. (Dodson and Ibrahim; Ibrahim et al.). However, we have since noticed a decline in usage of the SP2 clone, and for this assessment run 98 only 1 laboratory submitted slides stained using this antibody (see table below): RUN Use of SP2 Clone 75 (2006) 30 (6 UK labs) 79 (2007) 15 (0 UK labs) 93 (2011) 3 (0 UK labs) 98 (2012) 1 (0 UK labs) In-house Tissue Results As of the previous Run 97 it was decided that unstained inhouse slides will no longer be requested. Therefore, assessors scored in-house slides based on the quality/ readability of the samples and the correct choice of tissue and good morphological preservation, Participants were given a maximum score of 12/20 if the in-house control samples did not comprise of a composite breast tissue with the following levels of PR expression: i) a high expressing tumour (Allred=7-8) ii) a mid expressing tumour (Allred=4-6) and iii) a negative tumour (Allred=0). The presence of normal staining glands is also encouraged. Participants submitted in-house control material showed an overall pass rate of 62%, comparable to that of the NEQAS material, and the failure rate was very encouraging at only 3%. The main reasons behind the borderline scores were mainly due to participants not submitting control slides with composite controls i.e. a mid-expressing or negative tumour, which accounted for 35% of the assessor comments during the assessment. References 1. Jennet M. Harvey, Gary M. Clark, C. Kent Osborne, and D. Craig Allred (1999) Estrogen Receptor Status by Immunohistochemistry Is Superior to the Ligand-Binding Assay for Predicting Response to Adjuvant Endocrine Therapy in Breast Cancer J Clin Oncol 17:1474-1481 2. Robin Leake, Diana Barnes, Sarah Pinder, Ian Ellis, Liz Anderson, Tom Anderson, Ruth Adamson, Tony Rhodes, Keith Miller and Rosemary Walker (2000) J. Clin. Pathol. 2000: 634-635 3. Anderson E. The role of oestrogen and progesterone receptors in human mammary development and tumorigenesis. Breast Cancer Res. 2002; 4:197201. 4.Fisher B, Costantino J, Redmond C, Poisson R, Bowman D, Couture J, Dimitrov NV, Wolmark N, Wickerham DL, Fisher ER, et al. (1989) A randomized clinical trial evaluating tamoxifen in the treatment of patients with node-negative breast cancer who have estrogenreceptor-positive tumors. N Engl J Med 1989: 479-484. 5. Osborne CK, Schiff R, Arpino G, et al. Endocrine responsiveness: understanding how progesterone receptor can be used to select endocrine therapy. Breasst 2005; 14:485-465. 6. Ciocca DR and Elledge R. Molecular markers for predicting response to tamoxifen in breast cancer patients. Endocrine. 2000;13: 1-10. 5. Dodson A and Ibrahim M. The breast hormonal receptor module. Immunocytochmistry 2008; 6: 74-78. 6. Ibrahim M, Dodson A, Barnett S, Fish D, Jasani B, Miller K. (2008) Potential for false-positive staining with a rabbit monoclonal antibody to progesterone receptor (SP2): findings of the UK National External Quality Assessment Scheme for Immunocytochemistry and FISH highlight the need for correct validation of antibodies on introduction to the laboratory. Am J Clin Pathol. 129:398-409 © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 19 ΡΥΝ 98 ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 1. Οπτιµαλλψ σταινεδ ΠΡ ιν τηε ηιγη εξπρεσσινγ τυµουρ φροµ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ χοµποσιτε βλοχκ. ςιρτυαλλψ αλλ τηε τυµουρ χελλ νυχλει αρε στρονγλψ δεµονστρατεδ ωιτη χλεαν στροµαλ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ σεχτιον (Αλλρεδ σχορε=4−6). Τηε τυµουρ νυχλει αρε φορ τηε µοστ παρτ, µοδερατελψ σταινεδ ανδ ηετερογενουσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, 1:50, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. Φιγ 3. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε ηιγη εξπρεσσορ σεχτιον φροµ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χοµποσιτε βλοχκ. Μαιν φιελδ σηοωσ εϖεν, ωελλ λοχαλισεδ σταινινγ οφ τηε τυµουρ νυχλει. Ηιγη−ποωερ (ινσετ) σηοωσ ϖιρτυαλλψ αλλ τηε νυχλει αρε στρονγλψ ποσιτιϖε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16+ΣΑΝ27) αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 4. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ ωελλ λοχαλισεδ ΠΡ εξπρεσσιον ιν τηε εξπεχτεδ περχενταγε οφ τυµουρ νυχλει (Αλλρεδ=4−6). Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16+ΣΑΝ27) αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 5. Συβ−οπτιµαλλψ σταινεδ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσορ σεχτιον φροµ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χοµποσιτε βλοχκ. Αλτηουγη α φεω νυχλει αρε σταινινγ, τηε σενσιτιϖιτψ οφ τηε ασσαψ ισ τοο ωεακ ωιτη λεσσ τυµουρ νυχλει σταινινγ τηαν τηε εξπεχτεδ λεϖελ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16Α) αντιβοδψ, 1:300, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 6. Ποορ δεµονστρατιον οφ ΠΡ ιν τηε µιδ εξπρεσσινγ ΥΚ ΝΕΘΑΣ τυµουρ, σηοωινγ εξχεσσιϖε χψτοπλασµιχ ιναππροπριατε σταινινγ. Τηισ ισ µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, 1:50, πρε−τρεατεδ ιν τηε ∆ακο Παχαλ, ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ ΡΕΑΛ δετεχτιον κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:43 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 20 ΡΥΝ 98 ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ7. Ποορ σταινινγ ωιτη ΠΡ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ µιδ εξπρεσσινγ σεχτιον. Τηε ασσαψ ισ τοο λοω, ωιτη λεσσ τηαν τηε εξπεχτεδ περχενταγε οφ τυµουρ νυχλει σταινινγ ποσιτιϖε. Τηε χουντερσταιν ισ αλσο τοο εξχεσσιϖε, µακινγ ιτ διφφιχυλτ το ιντερπρετ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα (16Α) αντιβοδψ, 1:100, ΧΧ1 στανδαρδ Υλτραϖιεω κιτ ον τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ. Φιγ 8. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νεγατιϖε σεχτιον, σηοωινγ εξχεσσιϖε ιναππροπριατε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ σταινινγ. Τηισ ισ µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 636 (Α+Β) αντιβοδψ, πρε−τρεατεδ ον τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 φορ 25 µινσ. Φιγ 9. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοµποσιτε βλοχκ (σεε φιγσ 10 & 11 φορ φυρτηερ ιµαγεσ φροµ τηε σαµε σλιδε) χονσιστινγ οφ α ηιγη εξπρεσσινγ ΠΡ ποσιτιϖε τυµουρ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα 16Α αντιβοδψ, διλυτεδ 1:350, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. Φιγ 10. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοµποσιτε βλοχκ (σεε φιγσ 9 & 11 φορ φυρτηερ ιµαγεσ φροµ τηε σαµε σλιδε) χονσιστινγ οφ α µιδ−εξπρεσσινγ ΠΡ ποσιτιϖε τυµουρ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα 16Α αντιβοδψ, διλυτεδ 1:350, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοµποσιτε βλοχκ (σεε φιγσ 9 & 10 φορ φυρτηερ ιµαγεσ φροµ τηε σαµε σλιδε) χονσιστινγ οφ α ΠΡ νεγατιϖε τυµουρ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα 16Α αντιβοδψ, διλυτεδ 1:350, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:43 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 21 Ρυν 98 ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ ΡΥΝ 98Ε Προγεστερονε ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ 80 ΡΥΝ 98Ε Προγεστερονε ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 4 = 0 (0%) 4 = 0 (0%) 35 5 = 0 (0%) 70 5 = 0 (0%) 6 = 1 (0%) 6 = 0 (0%) 30 7 = 1 (0%) 7 = 0 (0%) 8 = 28 (9%) 9 = 5 (2%) 50 10 = 10 (3%) 11 = 11 (4%) 40 12 = 49 (16%) 13 = 28 (9%) 30 14 = 31 (10%) 8 = 16 (11%) 25 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 60 15 = 33 (11%) 20 9 = 3 (2%) 10 = 4 (3%) 20 11 = 6 (4%) 12 = 32 (21%) 15 13 = 15 (10%) 14 = 18 (12%) 15 = 13 (9%) 10 16 = 73 (24%) 16 = 31 (20%) 17 = 19 (6%) 10 17 = 8 (5%) 5 18 = 7 (2%) 18 = 4 (3%) 19 = 3 (1%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 19 = 2 (1%) 0 20 = 0 (0%) 4 5 6 7 8 9 Σχορεσ 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Συµµαρψ 16 − 20 = 102 (34%) 16 − 20 = 45 (30%) 13 − 15 = 92 (31%) 13 − 15 = 46 (30%) 10 − 12 = 70 (23%) 10 − 12 = 42 (28%) 0 − 9 = 35 (12%) 0 − 9 = 19 (13%) Μεδιαν = 12.50 Μεδιαν = 13.50 ΡΥΝ 98Φ Προγεστερονε ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 45 4 = 0 (0%) 80 5 = 0 (0%) 40 6 = 0 (0%) 7 = 1 (0%) 7 = 0 (0%) 10 = 8 (3%) 50 11 = 20 (7%) 40 12 = 77 (26%) 13 = 32 (11%) 30 14 = 17 (6%) 8 = 0 (0%) νο. οφ ρετυρνσ 9 = 5 (2%) νο. οφ ρετυρνσ 6 = 0 (0%) 35 8 = 3 (1%) 60 9 = 2 (1%) 30 10 = 3 (2%) 25 11 = 7 (5%) 12 = 44 (29%) 20 13 = 23 (15%) 14 = 9 (6%) 15 15 = 36 (12%) 20 16 = 66 (22%) 15 = 15 (10%) 10 16 = 40 (26%) 17 = 20 (7%) 10 18 = 7 (2%) 19 = 2 (1%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 20 = 2 (1%) Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 4 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 70 20 = 0 (0%) Σχορεσ Συµµαρψ ΡΥΝ 98Φ Προγεστερονε ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 17 = 5 (3%) 5 0 18 = 3 (2%) 19 = 1 (1%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 20 = 0 (0%) Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 97 (33%) 16 − 20 = 49 (32%) 13 − 15 = 85 (29%) 13 − 15 = 47 (31%) 10 − 12 = 105 (35%) 10 − 12 = 54 (36%) 0 − 9 = 9 (3%) 0 − 9 = 2 (1%) Μεδιαν = 13.50 Μεδιαν = 14.00 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 22 Ρυν 98 ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ. Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98 Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98 Πριµαρψ Αντιβοδψ : Προγεστερονε Αυτοµατιον Αντιβοδψ ∆εταιλσ Βιογενεξ ΑΜ172 (1Α6) Χελλ Μαρθυε 323Ρ−16 (Α) ∆ακο ΙΡ068 (ΠγΡ 636) (Α&Β) ∆ακο ΙΣ068 (ΠγΡ 636) (Α&Β) ∆ακο Κ1904 (ΠγΡ 1294 (β)) ∆ακο Μ3569 (ΠγΡ 636) (Α&Β) ∆ακο Ν1630 ΡΤΥ (ΠγΡ 636) (Α&Β) ΝεοΜαρκερσ ΡΜ−9102−Σ (ΣΠ2) (Α&Β) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ−312 (16) (Α) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ−ΑΒ (16+ΣΑΝ27) (Α&Β) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ/2 (1Α6) (Α&Β) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΓΡ (1Α6) (Α&Β) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΓΡ−312 (16) (Α) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΠΓΡ−ΑΒ (16+ΣΑΝ27) Νοϖοχαστρα ΠΑ0312 (16) (Α) Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΠΓΡ (1Α6) (Α&Β) Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΠΓΡ−312 (16) (Α) Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΠΓΡ−ΑΒ (16+ΣΑΝ27) (Α&Β) Οτηερ Σεροτεχ ΜΧΑ 1800 (1Α6) (Α&Β) ςεχτορ Λαβσ ςΠ−Π975 (1Α6) (Α&Β) ςεχτορ Λαβσ ςΠ−Π976 (16) (Α) ςεχτορ Λαβσ ςΠ−Π977 (16+ΣΑΝ27) (Α&Β) ςεντανα 790−2223 (1Ε2) (Α&Β) ςεντανα 790−4296 (1Ε2) (Α&Β) Ζψτοµεδ Σψτεµσ ΣΑ−ΡΒΚ−02 (ΣΠ42) (Α&Β) Προγεστερονε Ν 1 1 7 3 3 67 3 1 40 10 1 4 27 7 11 1 5 1 1 1 5 1 1 58 31 1 % 0 0 86 67 67 63 33 100 60 80 100 0 74 43 82 100 60 0 100 0 20 100 100 69 68 0 Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98 ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ ∆ακο Αυτοσταινερ ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ Λαβςισιον Αυτοσταινερ Λειχα Βονδ Μαξ Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ Νονε (Μανυαλ) Σηανδον Σεθυενζα ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ % 2 1 5 37 10 6 7 71 26 4 7 4 5 34 79 50 100 80 70 50 67 57 76 58 25 57 75 80 79 52 Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98 Προγεστερονε Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ ∆ακο Πασχαλ ∆ακο ΠΤΛινκ Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 Μιχροωαϖε Οϖεν Οτηερ Πρεσσυρε Χοοκερ Πρεσσυρε Χοοκερ ιν Μιχροωαϖε Οϖεν ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ2 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ Ν Προγεστερονε Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ Ν % 5 4 48 6 9 17 24 47 10 3 7 1 1 2 17 16 1 10 17 1 1 1 16 31 3 40 50 71 67 67 65 71 74 50 100 71 100 0 50 59 63 0 80 88 100 0 0 38 55 33 ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1 Ν % 4 126 1 50 62 0 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 23 Ρυν 98 Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98 ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε Βρεαστ Στεροιδ Ηορµονε Ρεχεπτορ Ρυν: 98 Προγεστερονε Προγεστερονε ∆ετεχτιον Χηροµογεν Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ) ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) ∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007) ∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7 ∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354) ∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ Λειχα Βονδ Πολψµερ ΑΠ Ρεδ ∆ετεχτιον (∆Σ9305) Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) Νονε ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ) Οτηερ Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200) ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500) ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) Ν % 1 7 2 6 34 7 1 1 3 1 1 1 1 89 5 2 1 3 11 1 2 1 17 4 92 100 86 100 67 71 43 100 0 67 100 0 0 0 70 40 0 100 67 73 0 100 100 53 100 60 Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΑΕΧ ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430) ∆ακο ∆ΑΒ Κ3468 ∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3466) ∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+ ∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468) ∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001) ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860) Οτηερ Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637) Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905) ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ςεντανα ∆ΑΒ ςεντανα ιϖιεω ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ Ν % 2 20 1 1 2 1 2 4 1 3 39 6 2 6 9 2 1 81 5 13 94 3 100 85 0 100 50 100 50 100 100 33 69 33 50 50 67 0 0 69 40 62 61 100 ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ Προγεστερονε − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 15/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ3569 (ΠγΡ 636) (Α&Β) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ ∆ιλυτιον 1: 600 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΗΙΓΗ ΠΗ, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 25 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7 , 15 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Προγεστερονε − Μετηοδ 2 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα 790−2223 (1Ε2) (Α&Β) , 16 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 24 Ρυν 98 ΒΡΕΑΣΤ ΣΤΕΡΟΙ∆ ΗΟΡΜΟΝΕ ΡΕΧΕΠΤΟΡ Μοδυλε Προγεστερονε − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Κ1904 (ΠγΡ 1294 (β)) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ∆ιλυτιον 1: 1:50 Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6 ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Προγεστερονε − Μετηοδ 4 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΠΓΡ−312 (16) (Α) , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ Μετηοδ: ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1, ΠΗ: 6 ∆ιλυτιον 1: 200 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ∆ετεχτιον: Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 25 The Breast HER2 ICC Module Run 98 Merdol Ibrahim and Suzanne Parry Antigens Assessed: HER2 Tissue Sections circulated: Composite cell lines (see table below) Number of Registered Participants: 326 Specific Guideline Used in The Assessment of Slides: The immunohistochemical results were evaluated by UK NEQAS assessors scoring independently using an adapted method initially devised by the Clinical Trials Assay. Due to the nature of cell lines, overall percentage staining criteria can not be accurately applied when scoring cell lines. Communication with Leica Microsystems, with whom UK NEQAS ICC & ISH developed the cell lines, indicate that the expected level of membrane staining for a given cell line may range from 30-90% from the viable cell line population. For this reason when cutting sections, every 50th section is stained as a reference point to gauge the expected level of staining throughout the cell block/s. The table below demonstrates the staining patterns looked for in cell lines and in-house tissue sections during assessments. Score Assessment of Cell Line Staining Pattern Assessment of In-house tissue sections 3+ Strong complete cell membrane staining Strong complete cell membrane staining in >30% of tumour cells 2+ Weak to moderate complete cell membrane staining Weak to moderate complete cell membrane staining in >10% of tumour cells 1+ Faint barely perceptible incomplete membrane staining Faint barely perceptible incomplete membrane in >10% of cells staining negative No staining in the ‘0’ control cell line No staining in the ‘0’ control cell line. UK NEQAS Specific Scoring Algorithm: UK NEQAS ICC & ISH devised an EQA specific algorithm for scoring both cell lines and tissue sections, so as to provide participants additional technical feedback. As well as taking into account the expected range (30-90% see above) of cell line membrane staining, the acceptable staining levels of each of the cell lines are as follows: Table below illustrates the expected level of staining for each of the circulated breast carcinoma cell lines along with the UK NEQAS scoring criteria used in assessments ONLY. Cell line Score Acceptable level/s of staining during assessments Description of staining Pattern used by the assessors SK-BR-3 3+ 3+ only The 3+ cell line has a wide threshold of complete membrane staining showing strong staining. Only this level of membrane staining is deemed acceptable for this cell line. . MDA-MB-453 2+ MDA-MB-175 1+ 1+ or 0/1+ or 1+/0 i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable. ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable. MDA-MB-231 negative 0 or 0/1+ or 1+/0 0/1+ or 1+/0 = Cells are starting to show very weak membrane staining 2+ or 1+/2+ or 2+/3+ or i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing 2+/1+ or 3+/2+ more 1+ compared to 2+ (1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also showing 1+ staining (2+/1+). ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+). ‘U’/Uninterpretable Scores Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due to the reasons set out below. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates a borderline uninterpretable scores indicating that the staining is just about readable and further improvements are required. Cell Line FISH Scores: The NEQAS cell lines are also FISHed as part of the HER2 ISH module, and the table below shows the HER2 FISH ratio ranges provided by the UK NEQAS reference centres for Run 24 of the HER2 ISH assessments. HER2 gene:Ch17 ratio HER2 status by FISH* range Cell line Score SK-BR-3 3+ 3.26 - 4.40 Amplified MDA-MB-453 2+ 2.04 - 2.29 Borderline: Amplified to Amplified MDA-MB-175 1+ 1.08 - 1.29 Not amplified MDA-MB-231 negative 0.97 - 1.16 Not amplified © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 26 The Breast HER2 ICC Module Run 98 Cell Line Positioning: Cell lines are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is indicated on distribution of the slides HER2 HER2 immunohistochemistry has been routinely used as a predictive marker in breast cancer for more than 10 years. Patients with HER2 positive tumours generally have a poor overall prognosis. However, patients with metastatic disease showed an improved rate of survival when the humanized monoclonal antibody Trastuzumab (Herceptin) was given alone or added with chemotherapy treatment (Slamon et al., 1998). Herceptin, in the metastatic setting was made available in the UK in 2000 by the UK National Institute for Clinical Excellence (NICE). In 2005, Herceptin in the adjuvant setting was also shown to be effective in primary breast cancers by reducing the risk of recurrence and mortality (see articles by Wolff et al., (2006) and Walker et al., (2008) for further commentary and citations), and in 2006 NICE approved primary breast screening for HER2. In the UK alone this has resulted in approximately 40,000 breast cancers per year being tested for HER2. With so many more cases now being tested worldwide, it is imperative that correct protocols and methodologies are followed and adhered to. The UK NEQAS HER2 IHC module assesses the technical quality of staining achieved by laboratories and provides feedback to laboratories to help improve the analytical phase of patient diagnosis. appropriate invasive control material, to submit DCIS tissue showing differing levels of membrane staining as an acceptable alternative. Laboratories must indicate on their datasheet which component of the tumour they have scored otherwise the invasive component (if present) will be assessed. References 1. Slamon D, Leyland-Jones B, Shak S, et al. Addition of Herceptin (humanised anti-HER2 antibody) to first line chemotherapy for (HER2+/MBC) markedly increases anticancer activity: a randomised, multinational controlled phase III trial. Proc ASCO 1998;17:98a. 2. Piccart-Gebhart MJ, Procter M, Leyland-Jones B, et al: Trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast cancer. N Engl J Med 353:1659-1672, 2005 3. Bartlett JM, Ibrahim M, Jasani B, et al. External quality assurance of HER2 FISH testing: results of a UK NEQAS pilot scheme. J Clin Pathol 2007 60(7):816-819. 4. Walker RA, Bartlett JM, Dowsett M, Ellis IO, Hanby AM, Jasani B, Miller K, Pinder SE. HER2 testing in the UK: further update to recommendations. J Clin Pathol. 2008 61(7):818-824. 5. Wolff AC, Hammond MEH, Schwartz JN, et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer. J Clin Oncol 2007;25:1–28. Two recommended HER2 testing guidelines are: 1. The ASCO/ CAP guidelines by Wolff et al., (2006) and 2. UK updated guidelines by Walker et al., (2008). Both provide invaluable guidelines covering interpretation, tissue fixation and antibody validation. The article by Walker et. al., also provides guidelines on the minimum number of tests per year, (250 for HER2 IHC and 100 HER2 ISH) that labs should be testing in order to provide a robust HER2 IHC service. Participants who continue to have difficulty in producing acceptable staining results should be aware that the members of staff at UK NEQAS are always willing to assist any laboratory that is struggling to meet the required standard of HER2 immunostaining, and would be happy to receive request for assistance via e-mail in the first instance (see front of journal for contact details). In-house Control Tissue Recommendations Correct choice of in-house control tissue and good morphological preservation is paramount to gauge the sensitivity of the HER2 test, which can have an impact on clinical interpretation. UK NEQAS ICC & ISH therefore recommends the following: In-house control tissue (or cell lines) must include 3+,2+ and 1+/0 invasive breast cancer cases. However, it has become quite apparent that as patient tumour size and respective biopsies become smaller laboratories may be having difficulty finding appropriate invasive control material. It is therefore acceptable, if laboratories are having problems in finding © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 27 ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 1.Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+), σηοωινγ στρονγ µεµβρανε σταινινγ, ωηιχη ισ χοµπλετελψ χιρχυµφερεντιαλ ανδ µινιµαλ χψτοπλασµιχ σταινινγ. (Α) σταινεδ ωιτη ςεντανα 4Β5 ανδ (Β) ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ. Φιγ 2. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε ΣΚ−ΒΡ3 (3+). Βοτη σεχτιονσ σηοω χελλ µεµβρανε µορπηολογψ δαµαγε δυε το εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. (Α) σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ, ανδ (Β) υσινγ α ηοµε−βρεω µετηοδ ωιτη τηε ∆ακο πολψχλοναλ αντιβοδψ ον τηε ΒονδΜαξ ΕΡ2. Φιγ 3. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+), σηοωινγ χοµπλετε µεµβρανε σταινινγ ιν τηε µαϕοριτψ οφ χελλσ, ωιτη λεσσ ιντενσιϖε σταινινγ τηαν τηατ σεεν ωιτη τηε 3+ χελλ λινε. (Α) σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5 ανδ (Β) ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ. Φιγ 4. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+) σταινεδ υσινγ τηε Ηερχεπτ κιτ. Τηε σταινινγ ισ χοµπλετε ανδ µεµβρανουσ ιν τηε µαϕοριτψ οφ χελλσ ωιτη λοωερ ιντενσιτψ ωηεν χοµπαρεδ το τηε 3+ χελλ λινε (σηοων ιν Φιγ1). Φιγ 5. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−453 (2+). Σεχτιον (Α) σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5 σηοωσ χελλ µορπηολογψ δαµαγε µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σταινινγ ιν (Β) ισ τοο στρονγ ανδ µορε ρεπρεσεντατιϖε οφ α 3+. Σταινεδ υσινγ τηε Λειχα Οραχλε, ΕΡ1 25 µινσ. Φιγ 6. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+), σηοωινγ αχιναρ χλυµπσ ωιτη παρτιαλ µεµβρανε σταινινγ, ωηιχη ισ δισχερνιβλε φροµ τηε φυζζψ βρυση βορδερ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Ηερχεπτεστ κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:59 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 28 ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 7. Γολδ στανδαρδ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+) σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5 (Α) ανδ τηε Λειχα Οραχλε κιτσ (Β). Τηε αχιναρ χλυµπσ σηοω βοτη φινε ινχοµπλετε µεµβρανε ανδ χοαρσε λυµιναλ σταινινγ. Ιτ ισ ονλψ τηε φινε µεµβρανε σταινινγ τηατ ισ ασσεσσεδ. Φιγ 8. Υναχχεπταβλε λεϖελ οφ σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χελλ λινε Μ∆Α−ΜΒ−175 (1+). Σεχτιον (Α) σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Οραχλε κιτ σηοωσ τοο µανψ χοµπλετε µεµβρανεσ ανδ ισ µορε ρεπρεσεντατιϖε οφ 2+ σταινινγ (χοµπαρε το Φιγ7). (Β) σταινεδ υσινγ τηε ςεντανα 4Β5, σηοωσ χελλ µορπηολογψ δαµαγε µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Φιγ 9. Σταινινγ οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ νεγατιϖε ΜΒΑ−ΜΒ−231 (0) χελλ λινε. Σεχτιον (Α) σηοωσ τηε Λειχα Οραχλε σταινεδ γολδ στανδαρδ ωιτη νο µεµβρανε σταινινγ. Σεχτιον (Β) ηασ υναχχεπταβλε σταινινγ οφ τηε µεµβρανεσ ανδ χψτοπλασµ, αλσο σταινεδ υσινγ τηε Λειχα Οραχλε, ον τηε Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1, 25 µινσ. Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε 1+ χοντρολ σταινεδ ωιτη τηε Ηερχεπτεστ κιτ. Τηε σταινινγ ισ ωεακ ανδ παρτιαλλψ µεµβρανουσ. Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε 2+ χοντρολ σταινεδ ωιτη τηε Ηερχεπτεστ κιτ, σηοωινγ ωεακ το µοδερατε µεµβρανε σταινινγ. Φιγ 12. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε 3+ χοντρολ σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα 4Β5, σηοωινγ ιντενσε, χρισπ µεµβρανε σταινινγ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:59 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 29 Ρυν 98 ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ Ρυν 98 ΗΕΡ2 ον ΝΕΘΑΣ Χελλ Λινεσ ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ Ρυν 98 ΗΕΡ2 ον ΝΕΘΑΣ Χελλ Λινεσ ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ 60 140 120 50 100 Νο. οφ Ρετυρνσ Νο. οφ Ρετυρνσ 40 80 60 30 20 40 10 20 0 Αχχεπταβλε ΒορδερΛινε 0 Ιναππροπριατε Αχχεπταβλε = 138 (55%) παρτιχιπαντσ ΒορδερΛινε = 38 (15%) παρτιχιπαντσ Ιναππροπριατε = 75 (30%) παρτιχιπαντσ Αχχεπταβλε ΒορδερΛινε Ιναππροπριατε Αχχεπταβλε = 56 (78%) παρτιχιπαντσ ΒορδερΛινε = 11 (15%) παρτιχιπαντσ Ιναππροπριατε = 5 (7%) παρτιχιπαντσ Ρυν 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ ον ιν−ηουσε τισσυε σεχτιονσ ΑΛΛ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ Ρυν 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ ον ιν−ηουσε τισσυε σεχτιονσ ΥΚ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ 120 45 40 100 35 30 Νο. οφ Ρετυρνσ Νο. οφ Ρετυρνσ 80 60 40 25 20 15 10 20 5 0 Αχχεπταβλε ΒορδερΛινε Ιναππροπριατε Αχχεπταβλε = 107 (44%) παρτιχιπαντσ ΒορδερΛινε = 49 (20%) παρτιχιπαντσ Ιναππροπριατε = 85 (35%) παρτιχιπαντσ 0 Αχχεπταβλε ΒορδερΛινε Ιναππροπριατε Αχχεπταβλε = 42 (59%) παρτιχιπαντσ ΒορδερΛινε = 17 (24%) παρτιχιπαντσ Ιναππροπριατε = 12 (17%) παρτιχιπαντσ Φορ Ινηουσε ασσεσσορ µακε α χοµβινεδ δεχισιον ασ το τηε αχχεπταβιλιτψ βασεδ υπον τηε φολλοωινγ: α) Ιν−ηουσε χοντρολ τισσυε µυστ ινχλυδε 3+,2+ ανδ 1+/0 ινϖασιϖε βρεαστ χανχερ χασεσ (νοτ ∆ΧΙΣ). β) Τισσυε φιξατιον, πρεσερϖατιον οφ µορπηολογψ, αντιγεν ρετριεϖαλ, χουντερσταιν ετχ ισ αλσο βε τακεν ιντο χονσιδερατιον ωηεν σχορινγ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 30 Ρυν 98 ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ. Τηε περχενταγε (%) ρεφερσ το τηε προπορτιον οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ ∋Αχχεπταβλε∋ ορ ∋Βορδερλινε∋ σχορεσ. Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98 Αντιβοδψ ∆εταιλσ Βιοχαρε ΧΜΕ 342 Α,Β (ΕΠ1045Ψ) Χελλ Μαρθυε ΧΜΑ 601 (ΧΒ11) ∆ακο Α0485 Χ−ερΒ−2 (πολψ) ∆ακο ΗερχεπΤεστ Κ5204 (πολψ) ∆ακο ΗερχεπΤεστ Κ5207 (πολψ) ∆ακο Λινκ ΗερχεπΤεστ ΣΚ001 (πολψ) Λαβϖισιον / Νεοµαρκερσ ΡΜ−9103 (ΣΠ3) Λειχα Οραχλε ΗΕΡ2 Βονδ ΙΗΧ (ΧΒ11) Νεοµαρκερσ ΜΣ−730−Π Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΧΒ11 (ΧΒ11) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΧΒΕ356 (10Α7) Οτηερ ςεχτορ ΧΒ11 ςΠ−Χ380 ςεντανα Χονφιρµ 790/800−2996 (4Β5) ςεντανα πατηωαψ 760−2694 (ΧΒ11) ςεντανα Πατηωαψ 790−100 (4Β5) ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5) Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98 Ν 1 1 37 13 8 19 6 28 1 11 2 4 2 25 1 13 68 % 0 100 35 69 100 84 17 82 100 27 100 50 50 80 100 92 87 Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98 Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ ∆ακο ΠΤΛινκ Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 Μιχροωαϖε Οϖεν ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Οτηερ Πρεσσυρε Χοοκερ Στεαµερ ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ) Ωατερ βατη 68 ΟΧ Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ∆ακο ΗερΧεπ Τεστ (Κ5204) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) ∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007) ∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ ραββιτ Κ4008/9/10/11 ∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (Κ5207) ∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (ΣΚ001) ∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713) Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) Νονε ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ) Οτηερ ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι ∆ακο Αυτοσταινερ ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ Λαβςισιον Αυτοσταινερ Λειχα Βονδ Μαξ Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Νονε (Μανυαλ) Οτηερ Σηανδον Σεθυενζα ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ςεντανα ΝεξΕΣ Ν % 1 4 22 6 6 2 34 12 36 2 1 2 37 72 2 0 75 73 50 100 50 71 83 33 50 0 50 84 86 100 Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98 Ν % 26 4 8 32 4 8 3 4 2 3 1 1 22 9 2 16 6 2 35 14 1 1 36 69 75 75 78 25 13 67 100 0 0 100 100 95 78 0 75 67 100 91 79 100 0 56 Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98 ∆ετεχτιον Αυτοµατιον Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ ςΒΣ Βονδ Ενζψµε 1 Ν % 11 82 100 67 1 0 Ν % 1 59 1 2 1 7 2 5 20 2 1 1 15 1 1 19 1 9 88 2 1 0 78 0 0 0 71 50 40 50 50 0 0 53 100 0 63 100 89 85 100 0 Βρεαστ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Ρυν: 98 Ν % 36 11 9 3 5 3 7 12 1 1 1 2 1 21 1 6 3 9 9 4 88 75 82 22 33 20 33 100 83 0 0 100 0 100 62 0 67 0 33 89 75 86 Χηροµογεν Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΑΕΧ ∆ακο ∆ΑΒ Κ3468 ∆ακο ∆ΑΒ Λιθυιδ (Κ3466) ∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+ ∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468) ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆) Λαβςισιον ∆ΑΒ Οτηερ Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637) Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905) ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ςεντανα ∆ΑΒ ςεντανα ιϖιεω ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ Ζψµεδ ∆ΑΒ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 31 Ρυν 98 ΒΡΕΑΣΤ ΗΕΡ2 ΙΧΧ Μοδυλε ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Ιναππροπριατε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Λινκ ΗερχεπΤεστ ΣΚ001 (πολψ) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Ασ περ κιτ ΕΑΡ: Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο ΗερΧεπ Τεστ Αυτο∋ρ (ΣΚ001) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 2 Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Νοτ Αππλιχαβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα Πατηωαψ 790−2991 (4Β5) , 16 Μινσ, Αµβ ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, Αµβ ≡Χ. ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, Αµβ ≡Χ Πρεδιλυτεδ 98 ΗΕΡ2 ΙΗΧ − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ Αχχεπταβλε (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ Νοτ Αππλιχαβλε (χοντρολ σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα Οραχλε ΗΕΡ2 Βονδ ΙΗΧ (ΧΒ11) , 30 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ Μετηοδ: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, Τιµε 2: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ , 10 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 32 The HER2 IHC Gastric Pilot Module Run 98 Merdol Ibrahim, Suzanne Parry, Jane Starczynski, Jane Moorhead, Phillipe Taniere and Iris Nagelmeier Antigens Assessed: HER2 IHC Tissue Sections circulated: Composite slide consisting of: A. 2+ Intestinal Gastric carcinoma. Note: one block also had an area of 2+ membrane staining B. 3+ Intestinal Gastric carcinoma C. Negative Intestinal Gastric carcinoma D. 2+ Intestinal Gastric carcinoma Number of Participants Taking Part 128 Table: 1 Gastric HER2 ICC Membrane Scoring Guidlines by Hoffman et al., (2008) and Rüschoff et al., (2010) Surgical / resections (As used in this assessment) Biopsies 0 (negative) No staining in < 10% of tumour cells No staining in any of the tumour cells 1+ (negative) Faint barely perceptible incomplete membrane staining in >10% of cells staining Tumour cells with faint barely perceptible incomplete membrane staining, irrespective of percentage of tumour cells stained 2+ (equivocal*) Weak/ moderate complete, basolateral or lateral membrane reactivity in > 10% of tumour cells Tumour cells with weak/ moderate complete, basolateral or lateral membrane reactivity irrespective of % tumour cells stained 3+ (positive) Strong complete, basolateral or lateral membrane reactivity in > 10% of tumour cells Tumour cells with strong, basolateral or lateral membrane reactivity irrespective of percentage of tumour cells stained Score * Equivocal cases should be refluxed to ISH testing. Note: in the UK, NICE guidelines recommend that only 3+ cases are put forward for Trastuzumab treatment, see http://guidance.nice.org.uk/TA208 Validation of Distributed Samples IHC Validation of Distributed Samples The NEQAS tissue sections were quality controlled prior to sending out, using the Ventana pathway 4B5 as the ‘gold standard’. However, sections were also stained using the Dako Herceptest and Leica Oracle system: Important: The Leica Oracle HER2 IHC System is not currently supported for gastric HER2 IHC and any laboratory using the kit for gastric purposes should be aware that they are doing so ’off label usage’ and would need to fully validate the Leica Oracle system prior to diagnostic use. ISH Validation of Distributed Samples The tissue was also assessed for gene expression using both FISH (Abbott Vysis) and DDISH (Ventana), and the amplified Table 2: Section Label From slide Label End Staining Pattern with Ventana 4B5 HER2 status by ISH* A 2+ Non-Amplified (but see fig 1-4) B 3+ Amplified (but see fig 9 & 10) C 0/1+* Non-Amplified (see fig 11) D 2+/3+** Amplified (see fig 13) *Block-b showed incomplete membrane staining in some cases *Block-b showed 3+ membrane staining in some cases © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 33 The HER2 IHC Gastric Pilot Module Run 98 Assessment Procedure Assessment is carried out around a multi-header microscope with each slide being assessed by 4 independent assessors and a microscope lead. Each of the NEQAS samples (A,B,C,D) (as well as in-house samples where submitted) are individually assessed, with each assessor providing membrane interpretation (see table 3), and an individual score out of 5 (see table 4) based interpretability of membrane staining and technical feedback. The four assessors scores are then combined to give an overall score out of 20 and it’s interpretation (see table 4). Table 3: UK NEQAS Specific Membrane Scoring Criteria UK NEQAS ICC & ISH uses an EQA specific scoring criteria when scoring the tissue sections, so as to provide participants additional technical feedback, which is illustrated below. Expected membrane staining Scoring criteria used by UK NEQAS ICC & ISH 3+ i) 3+: as expected Ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+). 2+ i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 1+ compared to 2+ (1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also showing 1+ staining (2+/1+). ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+). 1+ i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable. ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable. Neg. 0/1+ or 1+/0 = Staining starting to show very weak membrane staining ‘U’ = Uninterpretable: Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due to the reasons set out below. U/x = Borderline interpretable. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates that the staining is just about readable and further improvements are required. Any other membrane score other that assigned for each of the expected scores are deemed as unacceptable Table 4: Numeric Scoring Criteria used to Calculate the Overall Pass Mark Individual Assessor Score Combined Assessor Scores 0 0 1&2 4-9 = Unacceptable 3 10-12 = Borderline 4&5 13-15 = Acceptable 16-20 = Acceptable/ Excellent Standard Overall Score Interpretation Slide not submitted for assessment Overall the samples are of unacceptable quality for clinical interpretation and technical improvements need to be made. Marks may have been deducted due to: False positive / negative membrane staining Excessive cytoplasmic staining Excessive morphological damage Excessive staining of normal glands Overall the samples are borderline interpretable indicating that technical improvements need to be made. Marks may have been deducted due to: Weaker / stronger than expected membrane staining Some cytoplasmic staining Morphological damage Overall the samples show acceptable membrane staining and are suitable for interpretation. Further comments are also provided on individual participant reports. Other factors which may lead to a low score include: excessive / insufficient haematoxylin staining ; Poor quality of in-house control tissue ; poor/inadequate choice of control tissue ; poor/inadequate fixation ; Excessive antigen retrieval etc. Introduction Immunohistochemical testing of HER2 status is now routinely used in breast cancer testing and is recognised as a prognostic and predictive marker, generally used alongside breast hormonal receptor markers ER/PR. Patients who are HER2 positive (IHC 3+ and IHC 2+/ISH+ ) have been shown to benefit from Herceptin (Trastuzumab) therapy and increased overall survival rate. More recently the Trastuzumab for Gastric Cancer (ToGA) study, which investigated Trastuzumab in HER2 positive advanced gastric cancer (Bang et al., 2010) showed overall median survival of nearly 3 months. Similar to breast cancer, the ToGA trial showed an increased benefit from Trastuzumab treatment for patients showing 3+ IHC and IHC2+/FISH+ expression. The initial development of the HER2 scoring criteria was developed as a precursor to the ToGA trial (Hoffman et al., 2008) with the study group modifying the breast HER2 IHC scoring algorithm to compensate for the incomplete membrane staining and greater tumour heterogeneity seen in gastric cancers. A different scoring system was also established for re-section and core biopsies as illustrated in table 1. A more recent article by Rüschoff et al., (2010) has validated the scoring procedure further with a detailed approach to ’stepwise’ HER2 IHC scoring in gastric cancers. The article also compared the Ventana 4B5 assay with the Herceptest and indicated “a tendency towards higher sensitivity for 4B5 detecting positive © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 34 The HER2 IHC Gastric Pilot Module HER2 amplification” but “There was no difference between both test platforms with respect to the ISH-negative cases with the one equivocal case testing negative at some sites and as positive at others”. Rüschoff and colleagues also used both fluorescent (Dako pharmDX or PathVysion Vysis) and chromogen (Ventana BDISH) to confirm their IHC findings. Run 98 Methodologies Of those participants who submitted methodology data (62), the main methodology employed was the Ventana 4B5 antibody with 69% (43/62) of participants using this assay, and showed an overall acceptable rate of 81% (35/43). The second most popular method was a home-brew method using the Dako polyclonal antibody (13%, n=8) which had a 100% Acceptable & Unacceptable Staining (Figs 1-8) unacceptable rate. The Dako polyclonal was noted to be used with a full range of retrieval methods, including water bath, The samples distributed consisted of a single slide of four microwave oven and pressure cooker. The third most gastric resection tissue samples denoted A-D arranged as common methodology was the Dako Herceptest (n=6) with a follows: pass rate of 17% (1/6). Sample A: 2+ Intestinal Gastric carcinoma (Fig 1) The methodologies employed and their pass rates are further Sample B: 3+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 2&5) illustrated in the technical parameter tables. It is important to Sample C: Negative intestinal Gastric carcinoma (Figs 3&7) and Sample D: 2+ Intestinal Gastric carcinoma (Figs 4&6). note that because of the small number of users for several differing methodologies it is not possible to say whether such Slides were assessed based on the resection/surgical criteria methods/antibodies are suitable for gastric IHC in the context shown in table 1. It was noted that sample ’D’ showed of the UK NEQAS gastric assessment. heterogeneous staining which was also seen on the ’Gold Standard’ stained slides. ’D’ showed 2+ and a focal area of 3+ Control Tissue and Recommendations staining. However, based on the 10% cut off value for the membrane scoring of gastric resection tumours, overall, the In-house control slides were also requested for this module, however, it was left open for laboratories to submit the control section was interpreted as HER2 2+. material of their choice. For this run 58/68 laboratories submitted an in-house control, of which 35/58 (60%)) Please refer to images and associated legends for further submitted gastric cancer control tissue, with the majority of information regarding the acceptable and unacceptable range these being composite control slides with 3+,2+ and 1+/0 of staining patterns that were submitted for assessment. membrane staining.12/58 (21%) of laboratories submitted breast tissue as their in-house controls, with 11/58 (19%) of laboratories not specifying the tissue that was submitted. Additional Comments a. The Ventana 4B5 did show some epithelial staining Gastric controls would be the preferred tissue choice as in(intestinal metaplasia) (not illustrated). Participants were not house controls for this module, but it is quite understandable scored down as the assessment team were aware that this is that laboratories may find it difficult to source good quality one of the staining characteristics of the Ventana 4B5 controls, therefore laboratories were not penalised if they had antibody and did not detract from the actual staining of the submitted breast carcinomas. Whether gastric or breast tissue is used, laboratories should still submit in-house controls gastric cancer showing 3+, 2+ and 1+/0 levels of membrane expression. It is b. The Leica Oracle HER2 IHC System is not currently also acceptable to submit a heterogeneous in-house gastric supported for gastric HER2 IHC and any laboratory using the tumour control with areas of 3+ and areas of 2+ membrane kit for gastric purposes should be aware that they are doing so expression as long as the participant indicates the areas of ’off label usage’ and would need to fully validate the Leica expected membrane staining. Oracle system prior to diagnostic use. Pass Rates Of the 68 participants that took part in this assessment, results from the NEQAS distributed samples showed an overall acceptable pass rate of 56%, with 29% of participants scoring a borderline pass and an unacceptable rate of 15%. The main reasons for unacceptable scores were mostly due to understaining of the 2+ tumour sections, excessive cytoplasmic staining, excessive counterstain, and false positive or nonspecific staining (see figs 1b,5b,6&7 ). Of the 68 participants submitting NEQAS slides, 48 also submitted in-house control material, of which 53% showed acceptable staining, 38 were borderline, and 10% received an unacceptable score. The main reasons for unacceptable scores for in-house material were due to excessive cytoplasmic staining and excessive counterstain. In some instances participants self-assessment was discordant with that of the NEQAS assessment panel, for example participant interpretation indicating a 2+ membrane score on one of the in-house tumours, was interpreted as 1+ by the NEQAS assessors, indicating the possibility of overcalling of membrane scores, in this case possibly leading to higher number of ISH being carried out. References: 1. Hofmann M, Stoss O, Shi D et al., Assessment of a HER2 scoring system for gastric cancer: results from a validation study. Histopathology. 2008 52(7):797-805. 2. Rüschoff J, Dietel M, Baretton G etc al., HER2 diagnostics in gastric cancer-guideline validation and development of standardized immunohistochemical testing. Virchows Arch. 2010 457(3):299-307. 3. Bang YJ, Van Cutsem E, Feyereislova A, Chung HC, Shen L, Sawaki A, Lordick F, Ohtsu A, Omuro Y, Satoh T, Aprile G, Kulikov E, Hill J, Lehle M, Rüschoff J, Kang YK; ToGA Trial Investigators. Trastuzumab in combination with chemotherapy versus chemotherapy alone for treatment of HER2-positive advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer (ToGA): a phase 3, open-label, randomised controlled trial. Lancet. 2010 376(9742):687 -97 Acknowledgments We would like to thank Dako, Ventana and Leica for agreeing to stain the UK NEQAS gastric HER2 ICC ‘Gold standard’ samples with their respective kits/assays. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 35 The HER2 IHC Gastric Pilot Module Run 98 Assessment Procedure Assessment is carried out around a multi-header microscope with each slide being assessed by 4 independent assessors and a microscope lead. Each of the NEQAS samples (A,B,C,D) (as well as in-house samples where submitted) are individually assessed, with each assessor providing membrane interpretation (see table 3), and an individual score out of 5 (see table 4) based interpretability of membrane staining and technical feedback. The four assessors scores are then combined to give a an overall score out of 20 it’s interpretation (see table 4). Table 1: UK NEQAS Specific Membrane Scoring Criteria UK NEQAS ICC & ISH uses an EQA specific scoring criteria when scoring the tissue sections, so as to provide participants additional technical feedback, which is illustrated below. Expected membrane staining Scoring criteria used by UK NEQAS ICC & ISH 3+ i) 3+: as expected Ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+). 2+ i) 1+/2+ or 2+/1+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 1+ compared to 2+ (1+/2+) or 2+ membrane staining is present but also showing 1+ staining (2+/1+). ii) 2+/3+ or 3+/2+: Staining is slightly weaker than expected with membrane showing more 2+ compared to 3+ (2+/3+) or 3+ membrane staining is present but also showing 2+ staining (3+/2+). 1+ i) 0/1+: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable. ii) 1+/0: Staining is more towards the weaker end of 1+ staining but still acceptable. Neg. 0/1+ or 1+/0 = Staining starting to show very weak membrane staining ‘U’ = Uninterpretable: Assessors may also give a score of 'U' which indicates that the cell lines / tissue sections were 'uninterpretable’ due to the reasons set out below. U/x = Borderline interpretable. A score of U/x e.g. U/3+ or U/2+ or U/1+ or U/0 indicates that the staining is just about readable and further improvements are required. Any other membrane score other that assigned for each of the expected scores are deemed as unacceptable Table 2: Numeric Scoring Criteria used to Calculate the Overall Pass Mark Individual Assessor Score Combined Assessor Scores 0 0 1&2 4-9 = Unacceptable 3 10-12 = Borderline 4&5 13-15 = Acceptable 16-20 = Acceptable/ Excellent Standard Overall Score Interpretation Slide not submitted for assessment Overall the samples are of unacceptable quality for clinical interpretation and technical improvements need to be made. Marks may have been deducted due to: False positive / negative membrane staining Excessive cytoplasmic staining Excessive morphological damage Excessive staining of normal glands Overall the samples are borderline interpretable indicating that technical improvements need to be made. Marks may have been deducted due to: Weaker / stronger than expected membrane staining Some cytoplasmic staining Morphological damage Overall the samples show acceptable membrane staining and are suitable for interpretation. Further comments are also provided on individual participant reports. Other factors which may lead to a low score include: excessive / insufficient haematoxylin staining ; Poor quality of in-house control tissue ; poor/inadequate choice of control tissue ; poor/inadequate fixation ; Excessive antigen retrieval etc. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 36 RUN 98 GASTRIC HER2 ICC Module Selected Images showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining Fig 1. (A) Expected level of staining of sample ‘A’; 2+ UK NEQAS gastric tumour section, stained with Ventana 4B5, on the Benchmark XT CC1 mild and Ultraview kit. (B) Very Weak staining of sample ‘A’; 2+ UK NEQAS gastric tumour section, stained using a ‘home-brew’ method using the Dako polyclonal antibody on the Leica Bond Max. Fig 2. (A,B) Expected level of staining of sample ‘B’; 3+ UK NEQAS gastric tumour section. (A,B) Both examples show complete membrane staining of high intensity. (A) stained with Ventana 4B5, CC1 mild Benchmark XT. (B) stained with Dako Hercept kit, Dako PT Link and autostainer. Fig 3. (A,B) Two examples of sample ‘C’ showing negative gastric tumours from UK NEQAS distributed slides. (A) from block 1 Shows no membrane staining whereas (B) from block-2 showed in some cases 0/1+ staining, which was also acceptable. Both sections stained with the Ventana 4B5 on the Benchmark XT, CC1 mild and Ultraview kit. Fig 4. (A,B) Expected level of staining of sample ‘D’ from the UK NEQAS distributed 2+ gastric case. The staining is complete, membranous with lower intensity when compared to the 3+ (shown in Fig 1). (A) stained with the Dako Herceptest, using the PT link and (B)stained with the Ventana 4B5, on the Benchmark XT CC1 mild and Ultraview kit. Fig 5. (A) Weaker than expected 3+ staining of sample ‘B’, stained using the Leica Oracle kit. (B) Excessive cytoplasmic staining in the 3+ distributed sample ‘B’, stained using the Ventana 4B5, on the Benchmark XT CC1 although stated as 8 mins retrieval Fig 6. Two examples of unacceptable staining in the 2+ NEQAS tumour (sample ‘D’). both sections are stained using a home brew method: (A) stained with the Dako polyclonal antibody shows excessive background staining. (B) stained with Neomarkers antibody illustrates a false negative result. © Copyright UK NEQAS ICC & ISH Not for publication without written permission. Printed at 13:33 on Thursday, 23 August, 2012 37 RUN 98 GASTRIC HER2 ICC Module Selected Images showing Optimal and Sub-optimal Immunostaining Fig 7. Two examples of unacceptable staining in the 1+/0 NEQAS tumour (sample ‘C’; block-2). Both sections are stained using a home brew method: (A) stained with Neomarkers antibody shows false positive (2+) membrane staining. (B) stained with the Dako polyclonal antibody shows excessive background staining. Fig 8. Excellent example of an ‘in house’ composite gastric HER2 control. (A) 3+: Intense, crisp membrane staining (B) and (C) 2+: weak to moderate membrane staining, and (D) negative tumour remains unstained. Sections stained with Ventana 4B5 pathway. Fig 9. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘A’; 2+ UK NEQAS gastric tumour section. The carcinoma is non-amplified for HER2, but contains multiple copies of HER2 and Ch17 with an average of 3-4 HER2 signals per cell. Fig 10. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘B’; 3+ UK NEQAS gastric tumour section. The carcinoma is highly amplified for HER2, as seen by the many large clusters of HER2 SISH signals. Fig 11. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘C’; negative UK NEQAS gastric tumour section. As expected, this tumour is non-amplified for the HER2, and shows HER2 and Ch17 signals visible as 1-2 copies per cell. Fig 12. Ventana DDISH staining carried out on sample ‘D’; 2+ UK NEQAS gastric tumour section. This carcinoma has a low level of amplification for HER2, with greater than 5 HER2 copies present per cell and on average only 2-3 Ch17 copies. © Copyright UK NEQAS ICC & ISH Not for publication without written permission. Printed at 13:33 on Thursday, 23 August, 2012 38 Run 98 GASTRIC HER2 ICC Module GRAPHICAL REPRESENTATION OF PASS RATES RUN 98Gn Gastric HER2 IHC on NEQAS Sections RUN 98Gh Gastric HER2 IHC on in-house Sections Individual Scores 4 = 1 (1%) 20 Individual Scores 3 = 0 (0%) 20 5 = 0 (0%) 4 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 16 5 = 0 (0%) 16 7 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 9 = 4 (6%) 12 10 = 3 (4%) 11 = 7 (10%) 12 = 10 (15%) 8 13 = 1 (1%) 7 = 0 (0%) no. of returns no. of returns 8 = 5 (7%) 8 = 6 (10%) 12 9 = 0 (0%) 10 = 2 (3%) 11= 1 (2%) 8 12 = 19 (33%) 14 = 3 (4%) 13 = 1 (2%) 15 = 4 (6%) 4 16 = 20 (29%) 14 = 2 (3%) 4 15 = 1 (2%) 17 = 6 (9%) 16 = 7 (12%) 18 = 4 (6%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 19 = 0 (0%) 20 = 0 (0%) 17 = 7 (12%) 0 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 18 = 8 (14%) 19 = 1 (2%) Scores Scores Summary Summary 16 - 20 = 30 (44%) 16 - 20 = 26 (45%) 13 - 15 = 8 (12%) 13 - 15 = 4 (7%) 10 - 12 = 20 (29%) 10 - 12 = 22 (38%) 0 - 9 = 10 (15%) 0 - 9 = 6 (10%) Median = 12.50 Median = 14.50 20 = 3 (5%) ANTIBODIES AND OTHER TECHNICAL PARAMETERS EMPLOYED BY PARTICIPANTS IN THE GASTRIC HER2 ICC MODULE The following tables record the number of participants (N) using each primary antibody and the percentage (%) of these participants achieving acceptable staining (a score >12/20) on UK NEQAS sections. Gastric HER2 ICC Run: 98 Primary Antibody Gastric HER2 ICC Run: 98 N % Dako A0485 C-erB-2 (poly) 8 0 Dako HercepTest K5207 (poly) 3 33 Automation Gastric HER2 IHC Dako Autostainer N 1 Dako Autostainer Link 48 4 0 Dako Autostainer plus 5 20 Dako Autostainer Plus Link 1 0 Leica Bond Max 3 0 % 0 Dako Link HercepTest SK001 (poly) 3 0 Labvision / Neomarkers RM-9103 (SP 2 0 Neomarkers MS-730-P 1 0 1 0 Novocastra NCL-L-CBE356 (10A7) 1 0 Ventana Benchmark ULTRA 13 77 Ventana Benchmark XT 34 74 Vector CB11 VP-C380 1 0 13 85 Ventana Pathway 790-100 (4B5) 3 100 Ventana Pathway 790-2991 (4B5) 27 78 Ventana Confirm 790/800-2996 (4B5) Ventana Benchmark © Copyright NEQAS Immunocytochemistry Not for publication without written permission. Printed at 13:34 on Thursday, 23 August, 2012 39 Run 98 Gastric HER2 ICC Run: 98 Gastric HER2 IHC Heat Mediated Retrieval Dako PTLink N 5 Lab vision PT Module 2 Leica BondMax ER1 3 Microwave Oven 1 Other 3 Ventana Benk CC1 (Extended) 1 Ventana Benk CC1 (Mild) 11 Ventana Benk CC1 (Standard) 1 Ventana Benk CC1# (8mins) 1 Ventana Benk CC2 (mild) 1 Ventana Benk CC2 (Standard) 1 Ventana Benk ULTRA CC1 (Exten.) 1 Ventana Benk XT CC1 (Mild) 16 Ventana Benk XT CC1 (Standard) 2 Water bath 95-98 OC 2 Gastric HER2 ICC Run: 98 Gastric HER2 IHC Detection 0 0 0 0 33 100 64 100 0 100 100 100 81 50 50 AS PER KIT N 2 % 0 Dako EnVision FLEX+ ( K8002/12) 1 0 Dako Envision HRP/DAB ( K5007) 3 0 Dako HerCep Test Auto'r (K5207) 3 33 Dako HerCep Test Auto'r (SK001) 2 0 Leica Bond Polymer Refine (DS9800) 2 0 Other 2 0 Ventana iView system (760-091) 4 25 Ventana OptiView Kit (760-700) 2 50 Ventana UltraView Kit (760-500) 36 81 Gastric HER2 ICC Run: 98 Chromogen Gastric HER2 IHC N 1 N % 100 AS PER KIT 7 14 14 50 DAKO DAB+ 2 0 Dako EnVision Plus kits 2 50 Dako FLEX DAB 1 0 Dako REAL EnVision K5007 DAB 2 0 Other 4 25 VBS Bond Polymer Refine kit (DS9800) 1 0 Ventana iview 3 33 38 79 AS PER KIT NOT APPLICABLE Gastric HER2 ICC Run: 98 % Gastric HER2 IHC Enzyme Retrieval GASTRIC HER2 ICC Module Ventana Protease 1 (760-2018) 1 % 0 Ventana Ultraview DAB BEST METHODS A selection from just a few of the best methods employed by participants Gastric HER2 IHC - Method 1 Participant scored 18/20 (UK NEQAS Slide) and 18/20 (In House slide) using this method. Primary Antibody: Ventana Pathway 790-2991 (4B5) , 16 Mins, 37 ºC Prediluted Ventana Benchmark XT Automation: Main Buffer: Ventana UltraView DAB Ventana reaction buffer (950-300) HMAR: Ventana Benk XT CC1 (Mild) Method: EAR: Chromogen: Ventana Ultraview DAB, 37 ºC., Time 1: 8 Mins Detection: Ventana UltraView Kit (760-500) , 8 Mins, 37 ºC Prediluted © Copyright NEQAS Immunocytochemistry Not for publication without written permission. Printed at 13:34 on Thursday, 23 August, 2012 40 Run 98 GASTRIC HER2 ICC Module Gastric HER2 IHC - Method 2 Participant scored 18/20 (UK NEQAS Slide) and 19/20 (In House slide) using this method. Primary Antibody: Ventana Pathway 790-100 (4B5) Automation: Ventana Benchmark XT Method: Main Buffer: Ventana UltraView DAB AS PER KIT HMAR: EAR: Chromogen: AS PER KIT Detection: Gastric HER2 IHC - Method 3 Participant scored 17/20 (UK NEQAS Slide) and 18/20 (In House slide) using this method. Primary Antibody: Ventana Pathway 790-2991 (4B5) , 16 Mins, 37 ºC Prediluted Automation: Ventana Benchmark ULTRA Method: AS PER KIT Ventana reaction buffer (950-300), PH: 7.4 Main Buffer: HMAR: Ventana Benk ULTRA CC1 (Mild) EAR: NOT APPLICABLE Chromogen: Ventana Ultraview DAB Detection: Ventana UltraView Kit (760-500) © Copyright NEQAS Immunocytochemistry Not for publication without written permission. Printed at 13:34 on Thursday, 23 August, 2012 41 The Lymphoma Module Run 98 David Blythe and David Fish Gold Standard Second Antibody Antigens Assessed: CD30 BCl6 Tissue Sections circulated: Hodgkin's Lymphoma & Lymph Node Reactive Tonsil & Lymph Node Number of Registered Participants: 240 Introduction Gold Standard: CD30 Malignant cells in Hodgkin lymphoma are termed Hodgkin (mono-nuclear) or Reed-Sternberg (multi-nuclear) cells, although they can also be referred to as Hodgkin ReedSternberg (HRS) cells. The origin of HRS cells became clear when techniques were established to isolate single HRS cells from biopsy specimens and analyse them for rearranged immunoglobulin genes by single cell PCR. It is now known that these cells represent clonal populations of transformed germinal centre B-cells in both classical. Hodgkin lymphoma (CHL) and nodular lymphocyte predominant lymphoma (NLPHL), although in rare cases they can be derived from T-cells. In summary, in CHL, the HRS cells are positive with CD30, often positive with CD15 (in approximately 80% of cases) and generally negative for B-cell antigens such as CD20 or CD79a (approximately 30% of CHL cases will show some staining with these markers). In NLPHL, the HRS cells (also known as L&H cells or popcorn cells) are negative for both CD30 and CD15 and are generally positive for B-cell antigens. CD30 staining is found in CHLs, anaplastic large cell lymphomas, germ cell tumours and in a varying proportion of activated T- and B-cells. The staining pattern of CD30 in CHL is very similar to that of CD15 but without the granulocyte positivity. Some plasma cells will also stain with this antibody. Second Antigen: BCL-6 The Bcl-6 (B-cell CLL/lymphoma 6, zinc finger protein 51) protooncoprotein is a zinc-finger protein (95KD) transcription factor required for for germinal centre formation. bcl-6 is involved in the differentiation of normal germinal center B cells. As a immuniohistochjemical marker Bcl-6 is used alongside a panel of other lymphoma markers to determine lymphomas of B cell origin. BCL6 is used to stain follicular, diffuse large B cell and Burkitt's lymphoma. BCL-6 is also positive in lymphocyte predominant Hodgkin's disease. Features of optimal immunostaining Moderate-strong nuclear staining of all germinal centre B-cells in the distributed tonsil and lymph node Clean background Features of sub-optimal immunostaining • Weak, uneven, partially missing staining of relevant cells • Poor / diffuse nuclear localisation. References 1. Zutter M, Hockenbery D, Silverman GA, Korsmeyer SJ. Immunolocalization of the bcl-2 protein within hematopoietic neoplasms. Features of optimal immunostaining Blood 1991, 78: In a CHL there should be: 1062-1068 • Membrane staining (granular) of most HRS cells 2. Ngan B-Y, Chen-Levy Z, Weiss LM et al. Expression in nonHodgkin’s lymphoma of the bcl-2 protein is associated with the t(14;18) • Golgi staining of some HRS cells. chromosomal translocation. New Engl J Med 1988, 318: 1638-1644 3. D C Brown, K C Gatter, D Y Mason. Proliferation in non-Hodgkin's Features of sub-optimal immunostaining • Most low scoring slides were marked down because the HRS lymphoma: a comparison of Ki-67 staining on fine needle aspiration and cryostat sections. J Clin Pathol 1990;43:325-328 cells were either negative or very palely stained. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 42 LY ΡΥΝ 98 Α Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 1. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκινσ λψµπηοµα σεχτιον. Τηε στρονγ µεµβρανε ανδ παρανυχλεαρ σταινινγ ωιτη ωεακερ χψτοπλαµσιχ σταινινγ οφ τηε Ηοδγκινσ χελλσ ισ σεεν το βεττερ αδϖανταγε ιν τηε ηιγη ποωερ ινσερτ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Βερ−Η2 αντιβοδψ, 1:10, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ ΦΛΕΞ δετεχτιον κιτ. Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκινσ λψµπηοµα σεχτιον. Τηε ηιγη ποωερ ινσερτ σηοωσ τηε ιντενσε µεµβρανουσ σταινινγ οφ τηε Ηοδγκινσ ανδ Ρεεδ−Στερνβεργ χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 1Γ12 αντιβοδψ, 1:400, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 3. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκινσ λψµπηοµα σεχτιον. (Χοµπαρε το Φιγσ1&2). Τηε σταινινγ ισ ωεακ ανδ νοτ αλλ τηε χελλσ εξπεχτεδ το σταιν αρε δεµονστρατεδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Βερ−Η2 αντιβοδψ, 1:50, πρε−τρεατεδ ωιτη τηε δεχλοακινγ χηαµβερ ανδ σταινεδ ον τηε Μεναρινι Ιντελλιπατη ωιτη τηε Ξ−Χελλ Πολψµερ κιτ. Φιγ 4. Συβ−οπτιµαλ Χ∆30 σταινινγ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκινσ λψµπηοµα σεχτιον. Αλτηουγη τηε εξπεχτεδ χελλσ αρε δεµονστρατεδ, τηε σεχτιονσ σηοωσ νον−σπεχιφιχ ιναππροπριατε ενδοτηελιαλ χελλ σταινινγ. Σεχτιονσ σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 15Β3 αντιβοδψ, 1:20, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ ιςιεω κιτ. Φιγ 5. Ποορ δεµονστρατιον οφ Χ∆30 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ Ηοδγκινσ λψµπηοµα (Α,Β). Σταινινγ οφ τηε εξπεχτεδ χελλσ ισ διφφυσε ανδ διφφιχυλτ το ιντερπρετ δυε το τηε εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ σταινινγ (σηοων µορε χλεαρλψ ατ ηιγη ποωερ, πανελ Β). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Βερ−Η2 αντιβοδψ, 1:30, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε χοντρολ σταινεδ φορ Χ∆30, δεµονστρατινγ τηε ιντενσε µεµβρανουσ σταινινγ ανδ δοτ−λικε ρεαχτιονσ σεεν ιν τηε Ηοδγκινσ λψµπηοµα. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα Βερ−Η2 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ ιςιεω κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 17:16 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 43 Α Μοδυλε ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 7. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ρεαχτιϖε τονσιλ. Τηε σεχτιον σηοωσ στρονγ, διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ ιν ϖιρτυαλλψ αλλ τηε γερµιναλ χεντρε Β−χελλσ ανδ α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα ΛΝ22 ΡΤΥ αντιβοδψ, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 8. Γοοδ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ρεαχτιϖε τονσιλ σεχτιον, σηοωινγ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ ιν ϖιρτυαλλψ αλλ τηε γερµιναλ χεντρε Β−χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΛΝ22 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 9. Ποορ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ρεαχτιϖε τονσιλ. Τηε γερµιναλ χεντρε Β−χελλσ ονλψ σηοω ϖερψ ωεακ εθυιϖοχαλ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Βιοχαρε ΛΝ22 αντιβοδψ, πρε−τρεατεδ ιν τηε ωατερ βατη (98°Χ), ανδ σταινεδ ον τηε Μεναρινι Ιντελλιπατη ωιτη τηε ∆ακο ΡΕΑΛ κιτ. Φιγ 10. Οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ φολλιχυλαρ λψµπηοµα σεχτιον(Α,Β). ςιρτυαλλψ αλλ τηε νεοπλαστιχ χελλσ σηοω µοδερατε ορ στρονγ, διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ. Σηοων µορε χλεαρλψ ιν τηε ηιγη ποωερ πανελ (Β). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα ΛΝ22 ΡΤΥ αντιβοδψ, υσινγ τηε Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 11. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ ΒΧλ6 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ φολλιχυλαρ λψµπηοµα σεχτιον(Α,Β). Τηε σταινινγ ισ ποορλψ λοχαλισεδ ωιτη εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ. Τηισ ισ µοστ λικελψ χαυσεδ βψ εξχεσσιϖε αντιγεν ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα ΓΙ191Ε/Α8 αντιβοδψ, 1:2000, πρε−τρεατεδ ιν τηε ΠΤ Μοδυλε (26 µινσ) ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ. Φιγ 12. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε τονσιλ χοντρολ σταινεδ ωιτη ΒΧλ6. Τηε γερµιναλ Β−χελλσ σηοω στρονγ ανδ διστινχτ νυχλεαρ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα ΛΝ22 αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 17:16 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 44 ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε Ρυν 98 ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ R 60 R ! Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 60 4 = 0 (0%) 4 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 50 5 = 0 (0%) 50 6 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 8 = 1 (0%) 40 9 = 0 (0%) 10 = 2 (1%) 11 = 1 (0%) 30 12 = 12 (6%) 13 = 10 (5%) 20 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 7 = 0 (0%) 8 = 5 (2%) 40 9 = 5 (2%) 10 = 1 (0%) 11 = 3 (1%) 30 12 = 24 (11%) 13 = 25 (12%) 20 14 = 17 (8%) 14 = 33 (16%) 15 = 28 (13%) 15 = 19 (9%) 16 = 54 (25%) 10 16 = 58 (27%) 10 17 = 32 (15%) 17 = 21 (10%) 18 = 32 (15%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 18 = 8 (4%) 0 19 = 18 (8%) 4 5 6 7 8 9 20 = 5 (2%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 141 (67%) 16 − 20 = 96 (45%) 13 − 15 = 55 (26%) 13 − 15 = 77 (36%) 10 − 12 = 15 (7%) 10 − 12 = 28 (13%) 0 − 9 = 1 (0%) 0 − 9 = 10 (5%) Μεδιαν = 14.50 Μεδιαν = 14.00 ΡΥΝ 98Ν ΒΧΛ6 ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ 40 19 = 6 (3%) 20 = 3 (1%) ΡΥΝ 98Π ΒΧΛ6 ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 35 4 = 1 (1%) 4 = 1 (1%) 5 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 35 6 = 0 (0%) 30 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 7 = 2 (1%) 8 = 10 (5%) 9 = 8 (4%) 25 10 = 4 (2%) 11 = 17 (9%) 20 12 = 31 (16%) 13 = 17 (9%) 15 8 = 12 (6%) 25 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 30 9 = 7 (4%) 10 = 7 (4%) 20 11 = 14 (7%) 12 = 23 (12%) 15 13 = 22 (11%) 14 = 22 (11%) 14 = 18 (9%) 15 = 13 (7%) 10 10 15 = 26 (14%) 16 = 33 (17%) 16 = 39 (20%) 17 = 16 (8%) 5 17 = 14 (7%) 5 18 = 6 (3%) 18 = 8 (4%) 0 19 = 7 (4%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 20 = 2 (1%) 0 19 = 4 (2%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 20 = 1 (1%) Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 72 (37%) 16 − 20 = 58 (30%) 13 − 15 = 48 (25%) 13 − 15 = 70 (36%) 10 − 12 = 52 (27%) 10 − 12 = 44 (23%) 0 − 9 = 21 (11%) 0 − 9 = 20 (10%) Μεδιαν = 13.00 Μεδιαν = 13.50 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 45 ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε Ρυν 98 ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΛΨΜΠΗΟΜΑ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ. Λψµπηοµα Ρυν: 98 Λψµπηοµα Ρυν: 98 Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆30 Πριµαρψ Αντιβοδψ : ΒΧΛ6 Αντιβοδψ ∆εταιλσ Α.Μεναρινι ΜΠ−346 (κι−1) ΒιοΓενεξ ΑΜ 327−5/10Μ (Βερ−Η2) Χελλ Μαρθυε 130Μ (Βερ−Η2) ∆ακο ΙΡ/ΙΣ602 (Βερ−Η2) ∆ακο Μ0751 (Βερ−Η2) ∆ακο Ν1558 (Βερ−Η2) λαβϖν/Τηερµο ΜΣ−1857−Π (ΗΡΣ4) λαβϖν/Τηερµο ΜΣ−361−Σ (ΒΕΡ−Η2) Λειχα/Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0153 (1Γ12) Λειχα/Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0790 (ϑΧΜ182) Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆30 (1Γ12) Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆30−365 (15Β3) Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆30 (1Γ12) Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆30−591 (ϑΧΜ182) Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−Χ∆30 (1Γ12) Οτηερ ςεντανα 790 2926 (Βερ−Η2) Ζψµεδ 18 0185 (Βερ−Η2) Λψµπηοµα Ρυν: 98 H%&' (%)*&'%) +%',*%-&. Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ ∆ακο Πασχαλ ∆ακο ΠΤΛινκ Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 Μιχροωαϖε Οϖεν Οτηερ Πρεσσυρε Χοοκερ Στεαµερ ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) Ωατερ βατη 68 ΟΧ Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ Ν % 1 1 3 11 107 3 1 1 7 6 3 5 11 13 7 4 27 1 100 0 100 100 96 100 0 100 100 100 67 60 82 100 100 75 89 0 4 0 34 3 2 18 1 60 5 5 4 1 3 1 11 4 1 6 8 4 13 1 3 % 50 0 38 67 50 78 100 82 0 60 75 0 0 0 55 50 100 50 38 75 77 100 33 Ν 4 1 38 4 2 16 22 46 6 5 6 0 5 3 8 4 2 7 3 9 21 0 1 Ν ∆ακο Βχλ−6 Μ7211 (ΠΓ−Β6Π) µµ Λειχα ΡΤΥ ΠΑ0204 (ΛΝ22) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΒΧΛ−6 (Π1Φ6) µµ Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΒΧΛ−6−564 (ΛΝ22) µµ Οτηερ ςεχτορ ΒΧΛ−6 (Π1Φ6 ) µµ ςεντανα ΒΧΛ−6 (ΓΙ191Ε/Α8) µµ Λψµπηοµα Ρυν: 98 E/012% (%)*&'%) +%',*%-&. % 75 100 97 100 100 100 95 98 67 100 83 0 80 33 88 75 100 100 100 67 95 0 0 ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ % 85 1 2 4 55 21 1 22 Λαβϖισιον Βχλ−6 Αβ−1 (Π1Φ6) µµ C"#$ ΒΧΛ6 Ν Αντιβοδψ ∆εταιλσ 45 0 100 100 87 62 0 64 C"#$ ΒΧΛ6 Ν % Ν % 0 53 0 57 4 72 100 94 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 46 ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε Ρυν 98 3456 Λψµπηοµα Ρυν: 98 ΒΧΛ6 Λψµπηοµα Ρυν: 98 Χηροµογεν D78798:;< Ν Α Μενερινι Πολψµερ (ΜΠ−ΞΧΠ) ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ) ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) ∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007) ∆ακο Ενϖισιον+ ΗΡΠ µουσε Κ4004/5/6/7 ∆ακο ρβ−α−µο Ιγ (Ε0354) ∆ακο ΡΕΑΛ ΗΡΠ/∆ΑΒ (Κ5001 ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΛ 125 ΗΛϑ) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΛΠ ΗΡΠ (ΤΣ 125 Η∆) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ Λειχα Βονδ Ιντενσε Ρ ∆ετεχτιον (∆Σ9263) Λειχα Βονδ Πολψµερ ∆εφινε (∆Σ9713) Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ) Οτηερ ςεχτορ ΙµµΠΡΕΣΣ Υνιϖερσαλ (ΜΠ−7500) ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) 2 17 1 0 6 18 4 2 1 2 0 0 1 0 1 61 3 1 1 6 1 9 7 37 % Ν 0 59 100 0 50 50 0 0 100 50 0 0 0 0 100 79 67 0 0 67 0 67 100 49 1 15 1 1 5 25 3 2 1 4 1 1 0 1 0 72 4 2 1 7 1 10 8 42 Λψµπηοµα Ρυν: 98 ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ ∆ακο Αυτοσταινερ ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ ∆ακο ΤεχηΜατε 500 Λαβςισιον Αυτοσταινερ Λειχα Βονδ Μαξ Λειχα Βονδ Ξ Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ Νονε (Μανυαλ) Οτηερ Σηανδον Σεθυενζα ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ 0 100 100 100 100 96 100 100 100 50 100 0 0 100 0 97 100 100 100 86 100 70 100 90 Α. Μεναρινι Λιθυιδ Σταβλε ∆ΑΒ κιτ ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΑΕΧ ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430) ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ) ∆ΑΚΟ ∆ΑΒ+ ∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468) ∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001) ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Κ5001 ∆ΑΒ Λαβςισιον (ΤΑ−125−Η∆) Λαβςισιον ∆ΑΒ µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860) Οτηερ Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637) Σιγµα ∆ΑΒ (∆5905) ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ςεντανα ∆ΑΒ ςεντανα ιϖιεω ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ςισιον ΒιοΣψστεµσ Βονδ Ξ ∆ΑΒ Ν % Ν % 2 26 0 0 1 1 2 1 1 23 6 2 1 0 3 7 0 1 64 6 5 37 4 0 62 0 0 100 0 50 100 0 48 17 50 0 0 67 86 0 100 78 50 60 51 75 2 29 1 1 0 2 3 1 1 26 3 2 0 1 3 8 1 1 67 3 9 48 1 50 97 0 100 0 100 100 0 100 96 100 50 0 100 100 100 0 100 99 67 78 88 100 3456 ΒΧΛ6 Αυτοµατιον % 3456 ΒΧΛ6 Ν % Ν % 1 1 4 27 5 4 1 3 55 0 26 4 2 2 0 3 17 36 100 0 0 37 60 25 100 33 80 0 81 25 50 50 0 67 53 58 2 0 4 29 6 6 0 4 59 1 24 5 3 2 1 3 18 44 50 0 75 97 100 100 0 75 97 100 100 80 100 50 100 100 83 86 _`ab c`bdefa g hijk almnkmok pnlqriks Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ VDWX Z [78\;] ^ Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ0751 (Βερ−Η2) , 20 Μινσ, 23 ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ M=>?@AB MFGI JKNN=OB PMQSB ∆ιλυτιον 1: 40 Οτηερ Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ΕΑΡ: Χηροµογεν: T=>=U>G@IB ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 23 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 20 Μινσ, 23 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 47 ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε Ρυν 98 tuvw x yz{|}~ Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ0751 (Βερ−Η2) , 30 Μινσ, ρτ ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ιλυτιον 1: 50 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Φλεξ Ταργετ Ρετριεϖαλ Σολυτιον Ηιγη πΗ ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, ρτ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, ρτ ≡Χ Πρεδιλυτεδ tuvw x yz{|}~ v Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα 790 2926 (Βερ−Η2) , 92 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6 ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.), Βυφφερ: Υλτρα ΧΧ1 (950−224), ΠΗ: 9 ΕΑΡ: Χηροµογεν: tuvw x yz{|}~ ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 36 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ, Τιµε 2: 4 Μινσ ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 36 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα 790 2926 (Βερ−Η2) , 16 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Οτηερ ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.4 Οτηερ, ΠΗ: 8 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: Οτηερ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ¡¢£¤¥¦§¨ ©¤ª«¬£¥¨ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ t x yz{|}~ Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΒΧΛ−6−564 (ΛΝ22) µµ , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ−ΙΙΙ ∆ιλυτιον 1: 100 ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 48 ΛΨΜΠΗΟΜΑ Μοδυλε Ρυν 98 ®¯° ± ²³´µ¶· ¸ Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Βχλ−6 Μ7211 (ΠΓ−Β6Π) µµ , 15 Μινσ, 20 ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ Μετηοδ: ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590), ΠΗ: 7 ΗΜΑΡ: Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2, ΠΗ: 9 ∆ιλυτιον 1: 40 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ®¯° ± ²³´µ¶· Ì Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 11/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΒΧΛ−6−564 (ΛΝ22) µµ , 30 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ¹º»¼½¾¿ ¹ÀÁ ÃÄÅźƿ ǹÈÉ¿ ∆ιλυτιον 1: 1:50 ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.4 ∆ακο ΠΤΛινκ, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ʺ»ºË»Á½Â¿ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 15 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ ®¯° ± ²³´µ¶· Í Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα ΡΤΥ ΠΑ0204 (ΛΝ22) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ ¹º»¼½¾¿ ¹ÀÁ ÃÄÅźƿ ǹÈÉ¿ ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2, Βυφφερ: 0 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ ʺ»ºË»Á½Â¿ Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:09 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 49 The Neuropathology Module Run 98 Neil Bilbe, Robert Fincham and Steve McQuaid Antigens Assessed: Tissue Sections circulated: Gold Standard Second Antibody Synaptophysin Tau Germocysitc Oligodendroglioma Alzheimer Brain Tumour Number of Registered Participants: 66 Summary Graphs - Pass Rate Tables Best Method - Selected Images © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 50 ÎÏÐÑÐÒÓ Μοδυλε ΝΕΥΡΟΠΑ ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ ÔÕÖ õØ ÙÚÛÕÜÝÞ ßàÜáâãÛäÝÛÕáâ áå ãæâÝÚÛáÚçæãÕâ Õâ Ûçàèé êëìíî ÖàäÜáïæãÛÕï ÛçààâÛÝâÝýàâïçÜÝäô åÕöäÕÞ ÝäæöÝïôÖäáñâßØîàïÛ ó Õáâ ãÛÝÕâàß÷ÕÛç ÛçàêáøáïÝãÛäÝ ×ùúõ× ÝâÛÕöáßæðõû×üð ñãÕâÖ Ûçà ÔÕÖ ×Ø ÙÚÛÕÜÝÞ ßàÜáâãÛäÝÛÕáâ áå ãæâÝÚÛáÚçæãÕâ Õâ Ûçàèé êëìíî ÖàäÜáïæãÛÕï ð ÝñÛáãÛÝÕâàä Ýâß Ôòëó ôÕÛØ Φιγ 3. Τωο εξαµπλεσ οφ συβ−οπτιµαλ σψναπτοπηψσιν δεµονστρατιον ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ γερµοχψστιχ ολιγοδενδογλιοµα τυµουρ. Βοτη σεχτιονσ σηοω ωεακ σταινινγ, ανδ τηε ιµαγε ιν Φιγ 4. Ποορ δεµονστρατιον οφ σψναπτοπηψσιν ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ γερµοχψστιχ ολιγοδενδογλιοµα τυµουρ, σηοωινγ ωεακ σταινινγ οφ τηε φιβριλλαρψ ελεµεντσ ανδ εξχεσσιϖε ιναππροπριατε βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νεοµαρκερσ ΣΠ11 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. ολιγοδενδογλιοµα σεχτιον. Τηε σταινινγ ισ ιντενσε ανδ πυνχτατε, ωιτη α ϖαριαβλε διστριβυτιον ιν ς Τ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ. ÚÝâàÞý ÝÞãáÕÞ ñãÛäÝÛàã àþïàããÕøàïáñâÛàäãÛÝÕ âàß÷ÕÛç áâæÜàß ÝâÛÕöáßæðýáâß ÝâÛÕöáßæðââáØÿíÚäàpãÛÝÕaÛäàÝÛÜàâÛ ÛçàýàâïçÜÝäô óØ Ýþ ëõØ (Β)σταινεδ ωιτη ςεντανα ΡΤΥ ΣΠ11 ÔÕÖ üØ ÷ÕÛç ÛçàêáøáïÝãÛäÝ ×ùúõ× ÝâÛÕöáßæðõû×üð ñãÕâÖ Ûçàýáâß www ë× Ýâß àåÕâà ôÕÛØ Γοοδ εξαµπλε οφ σψναπτοπηψσιν δεµονστρατεδ ον αν ιν ηουσε χοντρολ. Τηε µεδυλλοβλαστοµα σηοωσ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ολιγοδενδογλιοµα τυµουρ σεχτιον, σηοωινγ στρονγ, χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη Νοϖοχαστρα 27Γ12 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ Φιγ 6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε χοντρολ φορ σψναπτοπηψσιν, σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα 27Γ12 αντιβοδψ, υσινγ τηε ςεντανα Βενχηµαρκ Τ ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ. ó ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:32 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 51 ΝΕΥΡΟΠΑTY Μοδυλε ΡΥΝ 98 Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ Φιγ 7. O Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A ρσ βραιν. Τηε σεχτιον σηοωσ στρονγ διστινχτ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα Ταυ−2 αντιβοδψ, υσινγ τηε Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 ανδ Ρεφινε κιτ. Φιγ 8. O Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A ρσ βραιν, σηοωινγ ωελλ λοχαλισεδ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ ανδ προχεσσεσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο πολψχλοναλ αντιβοδψ, 1:3200, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ωιτη τηε αλκαλινε πηοσπηατασε κιτ. Φιγ 9. Συβ−οπτιµαλ σταινινγ οφ Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A ρσ βραιν. Αλτηουγη τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ ανδ προχεσσεσ αρε δεµονστρατεδ τηε σταινινγ ισ ωεακ (χοµπαρε ωιτη Φιγ 1). Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Τηερµο Σχιεντιφιχ ΑΤ8 αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 10. Ποορ δεµονστρατιον οφ Ταυ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ A ρσ βραιν. Τηε σεχτιον σηοωσ εξχεσσιϖε νον−σπεχιφιχ ανδ βαχκγρουνδ σταινινγ µακινγ τηε σλιδε υν−ιντερπρεταβλε. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ΥΣ Βιολογιχαλσ αντιβοδψ, 1:100, πρε−τρεατεδ 1µιν ιν τηε πρεσσυρε χοοκερ, ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ Λειχα Ποωερϖισιον κιτ. Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ Ταυ δεµονστρατεδ ον αν ιν ηουσε χοντρολ. Τηε A ρσ βραιν σεχτιον σηοωσ στρονγ διστινχτ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Αυτογεν Βιοχλεαρ αντιβοδψ, 1:800, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ σταινεδ υσινγ τηε ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ κιτ. Φιγ 12. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοντρολ φορ Ταυ, σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ιν τηε νευροφιβριλλαρψ τανγλεσ ανδ προχεσσεσ οφ τηε A ρσ βραιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα Ταυ−2 αντιβοδψ, υσινγ τηε ΒονδΜαξ ΕΡ2 ανδ Ρεφινε κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:32 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 52 ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ ΡΥΝ 98Γ Σψναπτοπηψσιν ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ 16 14 ΡΥΝ 98Η Σψναπτοπηψσιν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 4 = 0 (0%) 4 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 8 = 0 (0%) 8 = 0 (0%) 9 = 1 (2%) 10 10 = 0 (0%) 11 = 3 (5%) 8 12 = 3 (5%) 6 6 = 0 (0%) 16 7 = 0 (0%) 13 = 6 (9%) νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 12 Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 20 9 = 0 (0%) 12 10 = 1 (2%) 11 = 1 (2%) 12 = 0 (0%) 8 13 = 1 (2%) 14 = 4 (6%) 4 14 = 3 (5%) 15 = 6 (9%) 15 = 9 (14%) 4 16 = 16 (25%) 2 16 = 20 (32%) 17 = 8 (13%) 17 = 17 (27%) 18 = 12 (19%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 18 = 6 (10%) 0 19 = 5 (8%) 4 5 6 7 8 9 20 = 0 (0%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 41 (64%) 16 − 20 = 48 (76%) 13 − 15 = 16 (25%) 13 − 15 = 13 (21%) 10 − 12 = 6 (9%) 10 − 12 = 2 (3%) 0 − 9 = 1 (2%) 0 − 9 = 0 (0%) Μεδιαν = 14.50 Μεδιαν = 15.50 R !"#$% !% &'() )#*"$!%+ 16 19 = 4 (6%) 20 = 1 (2%) ΡΥΝ 98Κ Ταυ Προτειν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 20 4 = 1 (2%) 4 = 0 (0%) 5 = 1 (2%) 5 = 0 (0%) 14 6 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 16 7 = 0 (0%) 7 = 1 (2%) 8 = 0 (0%) 8 = 1 (2%) 9 = 1 (2%) 10 10 = 0 (0%) 11 = 0 (0%) 8 12 = 4 (8%) 13 = 2 (4%) 6 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 12 9 = 1 (2%) 10 = 0 (0%) 12 11 = 2 (4%) 12 = 0 (0%) 13 = 0 (0%) 8 14 = 3 (6%) 14 = 1 (2%) 16 = 16 (33%) 2 0 15 = 12 (26%) 15 = 8 (17%) 4 17 = 12 (25%) 17 = 3 (6%) 18 = 1 (2%) 18 = 3 (6%) 19 = 1 (2%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 16 = 20 (43%) 4 20 = 0 (0%) 0 19 = 0 (0%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 20 = 1 (2%) Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 30 (63%) 16 − 20 = 27 (57%) 13 − 15 = 11 (23%) 13 − 15 = 15 (32%) 10 − 12 = 4 (8%) 10 − 12 = 2 (4%) 0 − 9 = 3 (6%) 0 − 9 = 3 (6%) Μεδιαν = 14.00 Μεδιαν = 14.50 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 53 ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ. Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 Πριµαρψ Αντιβοδψ : Σψναπτοπηψσιν Πριµαρψ Αντιβοδψ : Ταυ Προτειν Αντιβοδψ ∆εταιλσ ΒιοΓενεξ ΑΜ 6 (χλονε ΣΝΠ ) Βιογενεξ ΜΥ 363 ΥΧ Χελλ Μαρθυε 336Α−74/75/776/77/78/70 (Πολψ) ∆ακο Α0010 (πολψχλοναλ) ∆ΑΚΟ ΦΛΕΞ ΙΡ776 (ΣΨ38) ∆ακο Μ0776 (χλονε ΣΨ38 ) Λαβ ςισιον ΡΜ 9111 ΣΟ ΝεοΜαρκερσ ΣΠ11 Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0299 (ρβ πολψ) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΣΨΝΑΠ−299 (27Γ12) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΣΨΝΑΠ−299 (27Γ12) Οτηερ Τηερµο Σχι/Πιερχε ΠΑ5−16417 (Πολψ) ςεχτορ ςΠ−ΡΜ09 (ΣΠ11) ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 790−4407 (ΣΠ−11) Ζψµεδ 18−0130 Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 Ηεατ Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ Βιοχαρε ∆εχλοακινγ Χηαµβερ ∆ακο ΠΤΛινκ Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 Μιχροωαϖε Οϖεν ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Οτηερ Πρεσσυρε Χοοκερ ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ Ν % 1 2 2 1 2 19 1 2 1 11 8 3 1 1 8 1 100 100 100 100 100 89 100 100 100 91 100 33 100 100 88 0 Σψναπτοπηψσιν Αντιβοδψ ∆εταιλσ ∆ακο Α0024 (ρβ πολψ) Ιννογεν.Αυτογεν Βιοχλεαρ ΒΡ−003 (ΑΤ8) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΤΑΥ 2 (Ταυ−2) Οτηερ Σιγµα Τ5530 (Ταυ−2) Σιγµα Τ6402 (ΑΤ8) Τηερµο Σχιεν. ΜΝ1020 ΠΗΦ−ταυ (ΑΤ8) ΥΣ Βιολογιχαλ Τ1029 (2Β2.100) Ταυ Προτειν Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 1 13 4 2 4 11 4 0 1 1 1 0 4 1 1 3 3 1 4 5 0 % 100 92 75 100 50 100 75 0 100 100 100 0 100 0 100 67 100 100 100 100 0 Ν 0 2 4 1 4 6 4 12 0 2 0 1 0 0 0 0 1 0 0 1 1 % 0 100 100 100 75 100 50 92 0 50 0 100 0 0 0 0 0 0 0 100 100 ∆ακο Προτεινασε Κ (κ1492) ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ ςεντανα Προτεασε ςεντανα Προτεασε 1 (760−2018) % 17 2 9 5 2 3 1 5 1 Ιν Ηουσε προδυχεδ Ενζψµε Μεδιατεδ Ρετριεϖαλ Ν Ν 94 100 100 80 50 67 100 80 0 Σψναπτοπηψσιν Ταυ Προτειν Ν % Ν % 1 21 0 0 0 95 0 0 0 13 1 1 0 92 0 100 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 54 ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 Σψναπτοπηψσι ν Χηροµογεν ∆ετεχτιον Ν ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ) ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) ∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) Νονε ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Νοϖοχαστρα Νοϖολινκ Π∆Σ (ΡΕ7−140/150/280/290−Κ) Οτηερ Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ ςεχτορ Ελιτε Υνιϖερσαλ ΑΒΧ (ΠΚ−6200) ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) 7 1 0 3 8 1 1 17 0 1 1 0 2 0 1 3 2 16 Σψναπτοπηψσιν Ταυ Προτειν Ταυ Προτειν % Ν 100 100 0 67 100 100 100 82 0 100 100 0 50 0 100 67 100 94 6 1 1 3 2 4 1 15 1 0 0 1 2 1 1 1 0 7 % 100 100 100 100 100 100 0 93 100 0 0 100 100 0 0 100 0 71 ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ∆ΑΒ (Θ∆430) ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ) ∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468) ∆ακο ∆ΑΒ+ ΡΕΑΛ ∆ετεχτιον (Κ5001) ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ Λαβςισιον ∆ΑΒ µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860) Οτηερ Σιγµα ∆ΑΒ (∆4168) Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637) ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ςεντανα ∆ΑΒ ςεντανα ιϖιεω ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ Ν % Ν % 10 1 0 2 0 1 8 1 1 0 1 0 1 17 2 2 17 90 100 0 50 0 100 88 100 100 0 100 0 100 82 50 100 100 9 0 1 0 1 1 4 3 1 1 2 1 1 15 0 2 7 100 0 100 0 100 100 75 100 0 100 50 100 0 93 0 50 71 Νευροπατηολογψ Ρυν: 98 Σψναπτοπηψσιν Αυτοµατιον ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι ∆ακο Αυτοσταινερ ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ Λαβςισιον Αυτοσταινερ Λειχα Βονδ Μαξ Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ Νονε (Μανυαλ) Οτηερ Σηανδον Σεθυενζα ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Ταυ Προτειν Ν % Ν % 1 0 6 1 5 1 13 8 1 3 2 0 2 9 12 100 0 100 100 80 100 85 88 100 67 100 0 50 89 100 1 2 7 0 2 1 10 7 1 8 0 1 1 3 5 100 100 86 0 50 0 90 100 100 88 0 100 100 33 80 ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Γολδ Στανδαρδ Αντιβοδψ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 790−4407 (ΣΠ−11) , 40 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 12 Μινσ, Τιµε 2: 12 Μινσ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 2 Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα Βονδ ΡΤΥ ΠΑ0299 (ρβ πολψ) Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ Μετηοδ: Ινδιρεχτ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ∆ετεχτιον: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 55 ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεχτορ ςΠ−ΡΜ09 (ΣΠ11) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ ∆ιλυτιον 1: 1/10 Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6 ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: Ενςισιον ταργετ ρετριεϖαλ σλν ηιγη πΗ, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ, ΡΟΟΜ ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, ΡΟΟΜ ≡Χ Πρεδιλυτεδ Σψναπτοπηψσιν − Μετηοδ 4 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΣΨΝΑΠ−299 (27Γ12) , 60 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6 ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ∆ιλυτιον 1: 1/25 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ, 37 ≡Χ., Τιµε 1: 8 Μινσ, Τιµε 2: 8 Μινσ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Σεχονδαρψ Αντιβοδψ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ Ταυ Προτειν − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Τηερµο Σχιεν. ΜΝ1020 ΠΗΦ−ταυ (ΑΤ8) , 50 Μινσ, 25 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ιλυτιον 1: 800 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 25 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 30 Μινσ, 25 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Ταυ Προτειν − Μετηοδ 2 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Α0024 (ρβ πολψ) , 48 Μινσ, 21 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) ∆ιλυτιον 1: 2000 Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 56 ΝΕΥΡΟΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Ταυ Προτειν − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Σιγµα Τ5530 (Ταυ−2) , 15 Μινσ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μετηοδ: ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 ∆ιλυτιον 1: 4000 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), Τιµε 1: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 10 Μινσ Πρεδιλυτεδ Ταυ Προτειν − Μετηοδ 4 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Α0024 (ρβ πολψ) , 20 Μινσ, 21 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ιλυτιον 1: 800 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ ΗΜΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, 21 ≡Χ., Τιµε 1: 5 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ ∆ετεχτιον: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ , 20 Μινσ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:11 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 57 C,Τ-.-/, ΡΥΝ 98 Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ F01 \3 ]Q;08=V 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q093 [E7 7^=8QV7 :E5U: :;<591 F01 23 4556 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q09S :E5U091 U7VV V5N=V0:76 λοχαλισεδ µεµβρανε σταινινγ ιν τηε τυµουρ χελλσ ανδ α γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερ−σταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:100, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ, αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. µεµβρανε σταινινγ οφ τυµουρ χελλσ ανδ τηε αππροπριατε ιντενσιτψ οφ νυχλεαρ χουντερσταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα Χονφιρµ ΡΠ2/18 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, ον τηε ςεντανα W79NE8=<X Z[S ??\ µιλδ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ. F01 _3 4556 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q09 `:091 ;E7 =VX=V097 F01 B3 M`bc5Q;08=V 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q093 [E7 :;=09091 0: U7=X πηοσπηατασε µετηοδ. Τηε σταινινγ ισ στρονγ ανδ ωελλ λοχαλισεδ ιν τηε µεµβρανεσ οφ τηε τυµουρ χελλσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:10, νο πρε−τρεατµεντ ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ ΑΠΑΑΠ δετεχτιον κιτ. ωιτη σοµε χελλσ εξπεχτεδ το βε ποσιτιϖε νοτ δεµονστρατεδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Νοϖοχαστρα Z\deff =9;0b56PS \g\hhS 95 Q<7cτρεατµεντ ανδ υσινγ τηε ς79;=9= W79NE8=<X ZΤ ανδ ιςιεω κιτ. F01 D3 i55< 67859:;<=;059 5> ?@BD 59 ;E7 GH IJKLM NP;5:Q09 jLSWkS :E5U091 09=QQ<5Q<0=;7 Φιγ 6. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε χοντρολ φορ Χ∆BD jVP8QE 9567 FILkjLSWk3[E7 878b<=97 σταινινγ ισ στρονγ, ανδ τηερε ισ α γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερ−σταιν ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:1000, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα IJZJM =96 0ςιεω κιτ. ανδ εξχεσσιϖε βαχκγρουνδ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο 2Β11+Π∆7/26 αντιβοδψ, 1:180, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ (ηιγη πΗ βυφφερ), αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:38 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 58 lmΤnonqm ΡΥΝ 98 Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ rst uv xyzs{|} ~{z|zs |}zs z zys v |{y} σηοωσ γοοδ χψτοπλασµιχ σταινινγ οφ µεσοτηελιαλ χελλσ ωιτη α χλεαν βαχκγρουνδ ανδ α γοοδ λεϖελ οφ νυχλεαρ χουντερ−σταιν. Σεχτιον σταινεδ ωιτη ∆ακο ΡΤΥ αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ανδ Φλεξ δετεχτιον κιτ. Φιγ 8. Γοοδ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν (Α,Β). Τηε στρονγ ωελλ λοχαλισεδ χψτοπλασµιχ σταινινγ στανδσ ουτ νιχελψ αγαινστ τηε χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ ωιτη τηε Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ. Φιγ 9. Ποορ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν (Α,Β). Τηε σταινινγ ισ ϖερψ ωεακ, µακινγ ιντερπρετατιον ϖερψ διφφιχυλτv zs z|s~ sz z |z| |zs~ 1:100, πρε−τρεατεδ ιν τηε µιχροωαϖε ανδ υσινγ τηε ∆ακο αυτοσταινερ ωιτη τηε ΑΠΑΑΠ δετεχτιον κιτ. Φιγ 10. Συβ−οπτιµαλ δεµονστρατιον οφ Χαλρετενιν ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ χψτοσπιν. Αλτηουγη τηε εξπεχτεδ µεσοτηελιαλ χελλσ αρε σταινινγ, τηε σεχτιον αλσο σηοωσ νον−σπεχιφιχ ιναππροπριατε σταινινγ οφ οτηερ χελλ τψπεσ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα πρεδιλυτεδ αντιβοδψ, ωιτη νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςz|| {| Τ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 11. Γοοδ εξαµπλε οφ αν ιν ηουσε χοντρολ φορ Χαλρετενιν (Α,Β) (πλευραλ φλυιδ χψτοσπιν) (Α,Β), σηοωινγ στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ανδ α χλεαν βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ςεντανα πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, νο πρε−τρεατµεντ ον τηε ςz|| |~ sςιεω κιτ. Φιγ 12. Εξχελλεντ εξαµπλε οφ α χελλ βλοχκ ιν ηουσε χοντρολ φροµ α πλευραλ φλυιδ οφ α µεσοτηελιοµα δεµονστρατεδ ωιτη Χαλρετενιν. Τηε στρονγ χψτοπλασµιχ σταινινγ ισ σηοων το βεττερ |~|z|t s z st y szv zs z|s~ sz z |z| |zs~ πρε−τρεατµεντ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ |~ xyzsςιεω κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 16:38 ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 59 Ρυν 98 ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ ¡¢ £¤ ¥¦§¨ © ª¥« ¬ ¢®¯«° °±²³´¬µ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 4 = 0 (0%) 28 4 = 0 (0%) 32 5 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 24 6 = 0 (0%) 28 7 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 8 = 2 (3%) 20 8 = 0 (0%) 24 9 = 0 (0%) 10 = 1 (1%) 11 = 3 (4%) 16 12 = 5 (7%) 13 = 6 (8%) 12 14 = 8 (11%) νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ ¡¢ £¤° ¥¦§¨ © ª¥« ¬ ´¶·¬¸µ± °±²³´¬µ 9 = 2 (3%) 20 10 = 0 (0%) 11 = 2 (3%) 16 12 = 4 (6%) 13 = 8 (11%) 12 14 = 6 (8%) 15 = 7 (10%) 8 15 = 5 (7%) 8 16 = 26 (36%) 16 = 29 (41%) 17 = 11 (15%) 4 17 = 9 (13%) 4 18 = 1 (1%) 18 = 2 (3%) 19 = 2 (3%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 19 = 1 (1%) 0 20 = 0 (0%) 4 5 6 7 8 9 Σχορεσ Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 40 (56%) 16 − 20 = 44 (62%) 13 − 15 = 21 (29%) 13 − 15 = 19 (27%) 10 − 12 = 9 (13%) 10 − 12 = 6 (8%) 0 − 9 = 2 (3%) 0 − 9 = 2 (3%) Μεδιαν = 14.00 Μεδιαν = 15.00 ΡΥΝ 98Τ Χαλρετινιν ον ΝΕΘΑΣ Σεχτιονσ 12 ΡΥΝ 98Υ Χαλρετινιν ον ιν−ηουσε Σεχτιονσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 28 4 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 24 7 = 1 (1%) 7 = 0 (0%) 9 = 0 (0%) 10 = 1 (1%) 11 = 1 (1%) 6 12 = 7 (10%) 13 = 7 (10%) 8 = 2 (3%) 20 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 8 = 3 (4%) 8 9 = 1 (1%) 10 = 0 (0%) 16 11 = 2 (3%) 12 = 3 (4%) 12 13 = 2 (3%) 14 = 8 (11%) 4 15 = 8 (11%) 14 = 3 (4%) 8 15 = 2 (3%) 16 = 11 (15%) 2 17 = 10 (14%) 16 = 27 (39%) 17 = 12 (17%) 4 18 = 7 (10%) 0 19 = 4 (6%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 20 = 4 (6%) Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 4 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 10 20 = 3 (4%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 18 = 7 (10%) 0 19 = 2 (3%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 20 = 7 (10%) Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 36 (50%) 16 − 20 = 55 (79%) 13 − 15 = 23 (32%) 13 − 15 = 7 (10%) 10 − 12 = 9 (13%) 10 − 12 = 5 (7%) 0 − 9 = 4 (6%) 0 − 9 = 3 (4%) Μεδιαν = 14.00 Μεδιαν = 14.50 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 60 Ρυν 98 ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΧΨΤΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ. Χψτολογψ Ρυν: 98 Χψτολογψ Ρυν: 98 ¹º»¼½º¾ ¿ÀÁ»ÂÃľ Å ÆÇÈÉ Ê ËÆ¿ Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χαλρετινιν Αντιβοδψ ∆εταιλσ ∆ακο Μ00742 (χλονε ΥΧΗΛ1) Χ∆45ΡΟ Ν % 1 100 ÌÍÎÏÐÑÒÓ ÔÕÎÖÏ×Ø Ν % Χελλ Μαρθυε − ΧΜΧ759 χαλρετινιν 1 100 55 87 Χελλ Μαρθυε 232Α−78 2 50 ∆ακο Μ0833 (χλονε Π∆7/26) Χ∆45ΡΒ 1 100 ∆ακο ΙΡ627 1 100 ∆ακο Ν1514 1 100 ∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν 15 87 ∆ακο ΡΤΥ ΦΛΕΞ ΛΙΝΚ ΙΡ751 (2Β11 + Π∆7/26) 1 100 Ινϖιτρογεν 18−0211 4 75 Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−ΛΧΑ (Ξ16/99) 3 33 Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΧΑΛΡΕΤ (5Α5) 9 78 Λειχα/Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−ΛΧΑ−ΡΠ (ΡΠ2/18 + 2/22) 1 100 Νοϖοχαστρα/Λειχα ΝΧΛ−Λ−ΧΑΛΡΕΤ−566 6 50 Λειχα/Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−ΛΧΑ−ΡΠ (ΡΠ2/18 + 2/22) 1 100 Νοϖοχαστρα/Λειχα ΡΤΥ−Χαλρετινιν (5Α5) 2 50 Οτηερ 1 0 Οτηερ 2 50 ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 760−2505 (ΡΠ2/18) 7 86 ςεχτορ ςΠ−Χ306 χαλρετινιν 4 75 ςεντανα 250 2700 Χαλρετινιν 4 75 ςεντανα 790−4467 7 100 15 100 ∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) Ζψµεδ 18 0211 Χαλρετινιν Χψτολογψ Ρυν: 98 Χψτολογψ Ρυν: 98 ¹º»¼½º¾ ¿ÀÁ»ÂÃľ Å ÆÇÈÉ Ê ËÆ¿ Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χαλρετινιν Αντιγεν Ρετριεϖαλ Ν % Αντιγεν Ρετριεϖαλ Ν % ΨΕΣ 15 21 ΨΕΣ 16 22 ΝΟ 57 79 ΝΟ 56 78 Βρεακδοων οφ παρτιχιπαντσ ρεπορτινγ ΨΕΣ Ν Βρεακδοων οφ παρτιχιπαντσ ρεπορτινγ ΨΕΣ Ν Ηεατ Μεδιατεδ 0 Ηεατ Μεδιατεδ 0 Ενζψµε 0 Ενζψµε Βοτη Νοτ Σπεχιφιεδ 15 0 Βοτη Νοτ Σπεχιφιεδ Χψτολογψ Ρυν: 98 Χψτολογψ Ρυν: 98 ÙÚ½Á ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚÝ½Þ ÙÚ½Á ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚÝ½Þ Χψτολογψ Ρυν: 98 ßÀà¾¼Ú ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚÝ½Þ 0 16 0 Χψτολογψ Ρυν: 98 ßÀà¾¼Ú ÛÚÄ»½ÁÚÄ ÜÚÁº»ÚÝ½Þ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 61 Ρυν 98 Χψτολογψ Ρυν: 98 Χψτολογψ Ρυν: 98 Χαλρετινιν áâãä å æáç Ν % Ν % ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ 2 50 3 100 èéêëìíìî ïï ðêñòóìô õö÷ øùúûüýþÿB 2 50 2 100 ÷D ê ÿíééêí ÿü õ þúúúúB 2 100 2 100 ÷D ê ÿíééêí ÿü õ þúúB ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε 10 90 9 89 ÷D ê ÿí ééêí ð óêì þøúúø 2 50 3 100 ÷D ê ÿí ééêí ð ôDé þøúúú 1 0 0 0 ÷D ê ÿý õ þúúB 1 0 1 100 Dééêí LñôDééêí ð ð õï ÷B 1 100 1 100 ìéD èêí ðêñòóìô ÷ìéíì õ÷ïùB 0 0 1 100 ìéD èêí ðêñòóìô ìéíì õ÷ïúúB 20 70 19 79 0 0 1 100 ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ 1 100 1 100 Οτηερ 3 100 3 33 ðêPìô ééêí ÷ðè ð 1 100 1 0 ìíDíD ééìP òìó õúûúB 8 100 9 89 ìíDíD VééìP þé õúûúúB 2 100 1 100 ìíDíD LñôDéìP þé õúûúúB 12 100 13 85 Νονε Χαλρετινιν áâãä å æáç ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ Ν % 4 100 Ν % 4 100 èéêëìíìî ÷ýè õö÷øùúB 1 0 1 100 èéêëìíìî é é ÷ýè õþùûþB 1 100 1 100 ÷ýþV ÷ýè 1 1 100 ÷D ê ÷ýè é é õþùøB 1 100 Χηροµογεν ÷D ê ÿü ÷ýè 0 2 100 11 91 ÷D ê ÿý ÿíééêí þúú ÷ýè 0 0 1 100 ÷D ê ÿý þúú ýñ Dñéíì !ê!DDì 1 0 1 100 Οτηερ 4 100 2 ïéSóD ÷ýè õ÷øB 1 1 100 ïéSóD ÷ýè õ÷ùB èï èêí ðêñòóìô ìéíì é õ÷ïúúB 0 2 100 21 67 ìíDíD ÷ýè 3 100 ìíDíD é éìP 5 100 ìíDíD LñôD éìP ÷ýè ééêí èéêïòìó èêí ü ÷ýè 16 94 0 0 10 Χαλρετινιν 2 50 81 3 100 7 86 14 86 1 100 áâãä å æáç Ν % Ν èéêëìíìî ëìíê"ü úúúé % 1 100 1 100 ΒιοΓενεξ Οπτιµαξ 1 0 1 100 ÷D ê ýêDéíìô 2 0 1 100 ÷D ê ýêDéíìô éí ø 9 100 8 88 ÷D ê ýêDéíìô ñ 2 100 3 100 ÷D ê ýêDéíìô ðñ éí 1 0 2 100 Dééêí ýêDéíìô 1 100 1 100 15 60 17 88 Λειχα Βονδ−ΙΙΙ 8 88 7 71 Nêíì õ"DíDñB 4 75 3 33 ìíDíD èìí!óDô 4 100 5 60 ìíDíD èìí!óDô Lý 5 100 4 75 18 94 17 94 1 100 1 100 ìéD èêí "Dî ìíDíD èìí!óDô ü ìíDíD Nìîÿï ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 0 21 Χψτολογψ Ρυν: 98 Αυτοµατιον 90 62 Ρυν 98 ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε 1234 5246783 9 :;<= 3>?@=?A= E@>FG;=H Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ C#$% & 'C( ) *+,-./ 0 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ Μετηοδ: ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ∆ετεχτιον: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ∆ιλυτιον 1: 1/500 C#$% & 'C( ) *+,-./ 0 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) , 20 Μινσ, 22 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 MIJKOQR ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ MTUW XYZZI[R ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ \M]^R ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΦΛΕΞ ΤΡΣ Ηιγη πΗ ∆ιλυτιον 1: 400 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 22 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ _IJI`JUOWR ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 20 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ C#$% & 'C( ) *+,-./ 0 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 15/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα ΧΟΝΦΙΡΜ 760−2505 (ΡΠ2/18) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ MIJKOQR ςεντανα ιςιεω Κιτ MTUW XYZZI[R ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300), ΠΗ: 7.6 \M]^R ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ), Βυφφερ: ΧΧ1 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα ιϖιεω, Τιµε 1: 8 Μινσ _IJI`JUOWR ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) , 8 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ C#$% & 'C( ) *+,-./ 0 Παρτιχιπαντ σχορεδ 16/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ0701 (χλονεσ 2Β11+Π∆7/26) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ∆ιλυτιον 1: 1000 Αυτοµατιον: ςεντανα ΝεξΕΣ MIJKOQR ςεντανα ιςιεω Κιτ MTUW XYZZI[R ςεντανα απκ Ωαση (250−042) \M]^R ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα ιϖιεω _IJI`JUOWR ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 63 The Cytology Module Run 98 Neil Bilbe and Suzanne Parry Gold Standard Second Antibody Antigens Assessed: CD45 Calretenin Tissue Sections circulated: Effusion containing lymphocytes, Effusion containing malignant cells macrophages, erythrocytes and mes- mesothelial cells and lymphocytes othelial cells and erythrocytes Number of Registered Participants: 73 Summary Graphs - Pass Rate Tables Best Method - Selected Images © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 64 Ρυν 98 ΧΨΤΟΛΟΓΨ Μοδυλε ΒΕΣΤ ΜΕΤΗΟ∆Σ − Σεχονδαρψ Αντιβοδψ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ Χαλρετινιν − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο ΙΡ627 , 20 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.7 ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) , 10 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ Χαλρετινιν − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Μ7245 Χαλρετινιν , 40 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ∆ετεχτιον: ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) Χαλρετινιν − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα 790−4467 , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: ςεντανα ΝεξΕΣ Μετηοδ: ςεντανα ιςιεω Κιτ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα ιϖιεω ∆ετεχτιον: ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) Χαλρετινιν − Μετηοδ 1 Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Ινϖιτρογεν 18−0211 , 30 Μινσ, 38 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Μετηοδ: ςεντανα ιςιεω Κιτ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ∆ιλυτιον 1: 50 ΗΜΑΡ: ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα ιϖιεω ∆ετεχτιον: ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:08 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 65 The Alimentary Tract Module: GIST Run 98 Suzanne Parry and Mark Pitt Gold Standard Second Antibody Antigens Assessed: CD117 DOG1 Tissue Sections circulated: GIST, Appendix & Desmoid GIST, Appendix & Desmoid Number of Registered Participants: 103 Gold Standard - CD117 CD117 (c-kit) is a transmembrane tyrosine kinase growth factor receptor involved in cell differentiation and is expressed by melanocytes, mast cells and interstitial cells of Cajal. CD117 is also expressed in gastrointestinal stromal tumors (GIST). Until recently, patients with GIST faced a limited choice of treatment regimes, which included radiotherapy and surgery, with limited success. However, Glivec (imatinib), which was originally developed for chronic myeloid leukemia (CML), has proved effective in the targeted treatment of GISTs, by directly inhibiting the action of CD117. Features of sub-optimal immunostaining (see Figs 8B & 11) Weak and Patchy Staining of the tumour cells of the GIST Note: Mast cells are not stained with DOG-1 References 1. Cordless et al., Biology of Gastrointestinal Stromal Tumours. J Clin Oncol 2004, 22(18): 3813-3825. 2. Blay et al., Consensus meeting for the management of gastrointestinal stromal tumors. Report of the GIST Consensus Conference of 20-21 March 2004, under the auspices of ESMO. Ann Oncol 2005 6: 566-578. 3. Parfitt JR, Rodriguez-Justo M, Feakins R, Novelli MR (2008) Tissue Distribution Gastrointestinal Kaposi's sarcoma: CD117 expression and the Circulated tissue comprised of GIST, appendix and a desmoid potential for misdiagnosis as gastrointestinal stromal tumour. tumour, which participants requested to stain the samples using Histopathology 2008, 52: 816-23. their normal protocol, whether with or without heat mediated 4. West RB, Corless CL, Chen X et al. The novel marker, DOG1, is expressed ubiquitously in gastrointestinal stromal tumors irrespective antigen retrieval. of KIT or PDGFRA mutation status. Am. J. Pathol. 2004; 65; 107– 113. 5. Espinosa I, Lee CH, Kim MK et al. A novel monoclonal antibody Features of optimal immunostaining (see Fig2 1, 3-6) against DOG1 is a sensitive and specific marker for gastrointestinal Good localisation of CD117 to cells of the GIST stromal tumors. Am. J. Surg. Pathol. 2008; 32; 210– 218. Good localisation of CD117 to mast cells 6. Novelli M, Rossi S, Rodriguez-Justo M, Taniere P, Seddon B, Good localisation of CD117 to interstitial cells of Cajal Toffolatti L, Sartor C, Hogendoorn PC, Sciot R, Van Glabbeke M, Verweij J, Blay JY, Hohenberger P, Flanagan A, Dei Tos AP. DOG1 No staining of desmoid tumour and CD117 are the antibodies of choice in the diagnosis of gastrointestinal stromal tumours. Histopathology 2010, 57(2):259Features of sub-optimal immunostaining (see Figs 2A & B) 270. Weak and Patchy Staining of the tumour cells of the GIST 7. Parfitt JR, Rodriguez-Justo M, Feakins R, Novelli MR. Little or no staining of the Mast Cells Gastrointestinal Kaposi’s sarcoma: CD117 expression and the Excessive background / non specific staining potential for misdiagnosis as gastrointestinal stromal tumour. Histopathology 2008; 52; 816–823. Second Antibody - DOG1 “Discovered on GIST 1” (DOG1) antibody was initially described in 20044 and has now started to be recognized as a more specific marker of GISTs than CD117 4,5,6 . A recent study has shown DOG1 sensitivity of 99% and found to be strong and easier to interpret than CD1176 . The groups also showed that seven CD117 negative GIST cases were found to be DOG1 positive, and six of the tumours had PDGFRA mutations. Furthermore, DOG1 is not expressed in Kaposi sarcomas of the GI tract which have been shown to stain for CD1177. In more cases, combined CD117 and DOG1 immunohistochemistry has been suggested as a sufficient panel to confirm diagnosis, with CD117 and DOG1 negative cases tested further with a panel of antibodies including SMA, desmin, S100 and molecular analysis, should be considered6 . Tissue Distribution Circulated tissue were from sequential sections used for the CD117 distribution as show above and comprised of GIST, appendix and a desmoid tumour. Features of optimal immunostaining (see Figs 7,8A,9,10 & 12) Good localisation of DOG1 to cells of the GIST Good localisation of DOG1 to interstitial cells of Cajal No staining of desmoid tumour © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 66 ΡΥΝ 98 abcdefΤΑΡg ΤΡΑΧΤ hΑijkbklg Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ |x} ~ qwxus zrvwuwxrv r 117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ πρεδοµιναντλψ µεµβρανουσ ανδ χψτοπλασµιχ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ ~oo{ ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ , ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 2. Γοοδ δεµονστρατιον οφ µαστ χελλσ ωιτη Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ αππενδιξ σεχτιον αφτερ ηεατ ρετριεϖαλ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ 1:300, ον τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ , ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 3. Γοοδ δεµονστρατιον οφ τηε (Α) χελλσ οφ Χαϕαλ ιν τηε µυσχυλαρισ προπρια οφ τηε αππενδιξ, ανδ τηε εξπεχτεδ δεµονστρατιον οφ (Β) µαστ χελλσ ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ δεσµοιδ σεχτιον σταινεδ ωιτη Χ∆117. Τηε σταινινγ ισ στρονγ ανδ διστινχτ ανδ τηε βαχκγρουνδ ρεµαινσ υνσταινεδ ανδ χλεαν. Φιγ 4. Τωο εξαµπλεσ οφ ποορλψ δεµονστρατεδ Χ∆117 ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΓΙΣΤ σεχτιον (Χοµπαρε ωιτη Φιγ 2.). Τηε σταινινγ ιν (Α) ισ ωεακ, ανδ (Β) σηοωσ υνεϖεν σταινινγ. Βοτη σεχτιονσ ωερε σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ ~poo uvz ~po{ uvz vr qwuwvw rv τηε ςvwuvu vu Τ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. |x} n rr zrvwuwxrv r 117 ον τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ αππενδιξ. Αλτηουγη τηε Φιγ 6. Εξχελλεντ δεµονστρατιον οφ Χ∆117 φροµ παρτιχιπαντσ ιν−ηουσε ΓΙΣΤ χοντρολ σεχτιον. Σταινεδ ωιτη ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ ~poo{ ον τηε ςvwuvu vu Τ ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω δετεχτιον κιτ. µαστ χελλσ αρε σταινινγ ασ εξπεχτεδ, τηε νον−σπεχιφιχ βαχκγρουνδ σταινινγ ισ εξχεσσιϖε. Φαλσε ποσιτιϖε σταινινγ ωασ αλσο σεεν ιν τηε δεσµοιδ τυµουρ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε ∆ακο Αmnop qrst uvwxyrzt{ ~no{ υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ Λινκ{ uwrwuxv uvz | xw ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. ¡¢£ ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 67 ¤¥¦§¨©ΤΑΡª ΡΥΝ 98 ΤΡΑΧΤ «Α¬®¥®¯ª Μοδυλε Σελεχτεδ Ιµαγεσ σηοωινγ Οπτιµαλ ανδ Συβ−οπτιµαλ Ιµµυνοσταινινγ °±² ɴƺ»±¼½¾ ¿À¼¹Á»ý»±¹Á ¹Ä ÅÆÇ¸È ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον, σηοωινγ °±² ³´ µ¶·¸¹º»±¼½¾ ¿À¼¹Á»ý»±¹Á ¹Ä ÅÆÇ¸È ιν τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ διστριβυτεδ ΓΙΣΤ σεχτιον ιντενσε ωελλ λοχαλισεδ χψτοπλασµιχ ανδ µεµβρανουσ σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. (Χοµπαρε ωιτη Φιγ 7). Αλτηουγη τηε τυµουρ ισ ποσιτιϖε ασ εξπεχτεδ, τηε σταινινγ ισ ωεακ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, υσινγ τηε ςεντανα ΥΛΤΡΑ, ΧΧ1 µιλδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 9. Γοοδ δεµονστρατιον οφ τηε χελλσ οφ Χαϕαλ ιν τηε µυσχυλαρισ προπρια οφ τηε ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ °±² Èд ÑÒºÀË»À¿ ÅÆÇ¸È ÀÒºÃÀ±¹Á ±Á »ÌÀ ÓÔ ÕÑÖ×µ ØÙÙ ¿±Â»Ã±·¶»À¿ ¿À¼¹±¿ ÂÀË»±¹Á´ ÏÌÀ ½ººÀÁ¿±Ò ÂÀË»±¹Á »½±ÁÀ¿ Ú±»Ì ÅÆǸȴ ÏÌÀ ¼¹¹»Ì ¼¶Â˾À ÃÀ¼½±Á ¶Á»½±ÁÀ¿ ½Á¿ ˾À½Á´ Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 δεσµοιδ ανδ µαστ χελλσ ρεµαιν υνσταινεδ ωιτη µινιµαλ βαχκγρουνδ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:40, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. στανδαρδ ανδ Υλτραϖιεω κιτ. Φιγ 11´ µ¶·¸¹º»±¼½¾ ¿À¼¹Á»ý»±¹Á ¹Ä ÅÆÇ¸È ±Á »ÌÀ ÓÔ ÕÑÖ×µ ØÙÙ ¿±Â»Ã±·¶»À¿ ¿À¼¹±¿ »¶¼¹¶Ã (Χοµπαρε ωιτη Φιγ 10). Τηε σεχτιον σηοωσ ιναππροπριατε φαλσε ποσιτιϖε σταινινγ. Σεχτιον σταινεδ ωιτη τηε Λειχα Κ9 αντιβοδψ, 1:200, υσινγ τηε ∆ακο ΠΤ ΛινκÜ ½¶»¹Â»½±ÁÀà ½Á¿ °ÝÑΠͱ»´ Φιγ 12. Εξχελλεντ εξαµπλε οφ αν ιν−ηουσε χοντρολ σεχτιον, σηοωινγ γοοδ δεµονστρατιον οφ α ÅÆǸÈÛ ΓΙΣΤ αλονγ ωιτη χελλσ οφ Χαϕαλ ιν τηε αδϕαχεντ νορµαλ τισσυε. Σταινεδ ωιτη ςεντανα ΣΠ31 πρε−διλυτεδ αντιβοδψ, υσινγ τηε ςÀÁ»½Á½ ÊÀÁË̼½ÃÍ ÎÏ, ΧΧ1 εξτενδεδ ανδ ιςιεω δετεχτιον κιτ. ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Þßàáâãä åâ æçèéê ον Τυεσδαψ, 31 ϑυλψ, 2012 68 ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ΓΡΑΠΗΙΧΑΛ ΡΕΠΡΕΣΕΝΤΑΤΙΟΝ ΟΦ ΠΑΣΣ ΡΑΤΕΣ ëìí îïð ñòóóô õö í÷øùú úûüýþõöÿ 35 ëìí îïR ñòóóô õö þö õÿû úûüýþõöÿ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 35 4 = 0 (0%) 4 = 1 (1%) 5 = 0 (0%) 30 5 = 0 (0%) 30 6 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 7 = 1 (1%) 7 = 0 (0%) 25 8 = 2 (2%) 9 = 3 (3%) 20 10 = 2 (2%) 11 = 2 (2%) 12 = 6 (6%) 15 13 = 9 (9%) νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 25 14 = 7 (7%) 10 8 = 0 (0%) 9 = 0 (0%) 20 10 = 4 (4%) 11 = 0 (0%) 12 = 4 (4%) 15 13 = 6 (6%) 14 = 9 (9%) 10 15 = 11 (11%) 15 = 9 (9%) 16 = 31 (31%) 5 16 = 31 (31%) 5 17 = 18 (18%) 17 = 10 (10%) 18 = 5 (5%) 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 18 = 12 (12%) 0 19 = 3 (3%) 4 5 6 7 8 9 20 = 0 (0%) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 57 (57%) 16 − 20 = 67 (67%) 13 − 15 = 27 (27%) 13 − 15 = 24 (24%) 10 − 12 = 10 (10%) 10 − 12 = 8 (8%) 0 − 9 = 6 (6%) 0 − 9 = 1 (1%) Μεδιαν = 13.00 Μεδιαν = 15.00 ëìí îïð òó õö í÷øùú úûüýþõöÿ 40 19 = 7 (7%) 20 = 7 (7%) ëìí îïR òó õö þö õÿû úûüýþõöÿ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 40 4 = 0 (0%) 4 = 1 (1%) 5 = 0 (0%) 5 = 0 (0%) 35 35 6 = 0 (0%) 6 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 7 = 0 (0%) 30 8 = 1 (1%) 9 = 0 (0%) 25 10 = 0 (0%) 11 = 2 (3%) 20 12 = 5 (7%) 13 = 1 (1%) 15 νο. οφ ρετυρνσ νο. οφ ρετυρνσ 30 8 = 1 (1%) 9 = 0 (0%) 25 10 = 0 (0%) 11 = 1 (1%) 20 12 = 3 (4%) 13 = 4 (5%) 15 14 = 4 (5%) 14 = 6 (8%) 15 = 4 (5%) 10 15 = 10 (14%) 10 16 = 36 (49%) 16 = 36 (49%) 17 = 9 (12%) 5 17 = 5 (7%) 5 18 = 1 (1%) 18 = 3 (4%) 0 19 = 3 (4%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Σχορεσ 20 = 4 (5%) 0 19 = 4 (5%) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 20 = 4 (5%) Σχορεσ Συµµαρψ Συµµαρψ 16 − 20 = 55 (74%) 16 − 20 = 50 (68%) 13 − 15 = 11 (15%) 13 − 15 = 18 (24%) 10 − 12 = 7 (9%) 10 − 12 = 4 (5%) 0 − 9 = 1 (1%) 0 − 9 = 2 (3%) Μεδιαν = 15.00 Μεδιαν = 14.50 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 69 ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ΑΝΤΙΒΟ∆ΙΕΣ ΑΝ∆ ΟΤΗΕΡ ΤΕΧΗΝΙΧΑΛ ΠΑΡΑΜΕΤΕΡΣ ΕΜΠΛΟΨΕ∆ ΒΨ ΠΑΡΤΙΧΙΠΑΝΤΣ ΙΝ ΤΗΕ ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ ΜΟ∆ΥΛΕ Τηε φολλοωινγ ταβλεσ ρεχορδ τηε νυµβερ οφ παρτιχιπαντσ (Ν) υσινγ εαχη πριµαρψ αντιβοδψ ανδ τηε περχενταγε (%) οφ τηεσε παρτιχιπαντσ αχηιεϖινγ αχχεπταβλε σταινινγ (α σχορε >12/20) ον ΥΚ ΝΕΘΑΣ σεχτιονσ. Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 Πριµαρψ Αντιβοδψ : Χ∆117 Πριµαρψ Αντιβοδψ : ∆ΟΓ1 Αντιβοδψ ∆εταιλσ Χελλ Μαρθυε 117Ρ/Σ−ξξ (ΨΡ145) ∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) ∆ιαγνοστιχ Βιοσψστεµσ (ΡΠ63) Επιτοµιχσ ΑΧ−0029 (ΕΠ10) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Χ∆117 (Τ595) Νοϖοχαστρα ΝΧΛ−Λ−Χ∆117 (Τ595) Νοϖοχαστρα ΡΤΥ−Χ∆117 (Τ595) ςεντανα 790−2939 (ρβ πολψ) ςεντανα 790−2951 (9.7) Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 H ∆ακο ΠΤΛινκ Λαβ ϖισιον ΠΤ Μοδυλε Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ1 Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 Μιχροωαϖε Οϖεν ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Οτηερ Πρεσσυρε Χοοκερ ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ1# (8µινσ) ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (µιλδ) ςεντανα Βενκ ΧΧ2 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Εξτεν.) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΥΛΤΡΑ ΧΧ1 (Σταν.) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Εξτενδεδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Μιλδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1# (8µινσ) Ωατερ βατη 95−98 ΟΧ Ν % 2 86 1 1 1 3 1 1 4 100 90 0 100 100 0 0 0 75 C Αντιβοδψ ∆εταιλσ Αβχαµ ΤΜΕΜ16Α (αβ53212) Χελλ Μαρθυε 244Ρ−17/18 (ΣΠ31) Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) Λειχα ΠΑ0219 (Κ9) Μεναρινι ΜΠ−385−ΧΜ01/1 Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3310 (ρβ πολψ) Σπρινγ Βιοσχιενχεσ Μ3311 (ΣΠ31) ςεντανα (ΣΠ31) 760−4590 D 15 3 3 6 9 15 1 7 3 2 10 4 1 0 0 1 2 2 1 6 7 1 0 % 93 67 67 100 78 93 0 14 67 100 100 100 0 0 0 100 100 100 100 100 100 100 0 Ν Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 12 0 1 6 5 17 0 0 3 2 4 6 0 1 1 1 3 2 1 2 6 0 1 % 92 0 100 100 80 100 0 0 100 100 50 83 0 100 0 100 33 100 100 100 100 0 100 ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ % 1 1 2 54 7 1 1 1 5 Χελλ Μαρθυε 244Ρ−14/15/16 (ΣΠ31) E Ν Ν 100 100 100 89 100 100 100 100 80 C D Ν % Ν % 1 42 100 81 1 30 100 90 ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 70 ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 Χηροµογεν ! "#$ Ν ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 420−ΨΙΚΕ) ΒιοΓενεξ ΣΣ Πολψµερ (Θ∆ 430−ΞΑΚΕ) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ ( Κ8000/10) ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) ∆ακο Ενϖισιον ΗΡΠ/∆ΑΒ ( Κ5007) Λαβςισιον Υλτραςισιον ΟΝΕ Πολψµερ ( ΤΛ−012/5−Η∆ϑ/Τ Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) ΜεναΠατη Ξ−Χελλ Πλυσ (ΜΠ−ΞΧΠ) Νονε ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Οτηερ Ποωερ ςισιον ∆ΠςΒ999 ΗΡΠ ςεχτορ Ελιτε ΑΒΧ Κιτ (ΠΚ−7200) ςεντανα ιςιεω σψστεµ (760−091) ςεντανα Οπτιςιεω Κιτ (760−700) ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) 6 0 1 2 10 1 1 30 1 1 1 2 1 1 4 4 29 % Ν 83 0 100 100 80 100 0 83 0 100 0 100 0 0 100 100 90 9 1 0 0 8 1 0 23 1 0 1 2 1 0 3 4 20 % ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ ΒιοΓενεξ Λιθυιδ ∆ΑΒ (ΗΚ153−5Κ) ΒιοΓενεξ λιθυιδ ∆ΒΑ (ΗΚ−124−7Κ) ∆ακο ∆ΑΒ+ Λιθυιδ (Κ3468) ∆ακο Ενςισιον Πλυσ κιτσ ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ ∆ακο ΡΕΑΛ Ενςισιον Κ5007 ∆ΑΒ Λαβςισιον ∆ΑΒ µεναπατη ξχελλ κιτ ∆ΑΒ (ΜΠ−860) Οτηερ Σιγµα ∆ΑΒ (∆5637) ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ςεντανα ∆ΑΒ ςεντανα ιϖιεω ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ 89 100 0 0 88 100 0 100 100 0 0 50 100 0 67 100 85 Ν % Ν % 16 1 0 1 2 12 1 1 1 3 1 24 1 4 32 75 100 0 0 50 92 100 0 0 100 0 92 100 100 88 11 0 1 0 2 8 1 0 1 3 1 21 1 3 21 82 0 100 0 100 88 100 0 100 100 100 100 100 67 81 Αλιµενταρψ Τραχτ Πατηολογψ Ρυν: 98 Αυτοµατιον ΒιοΓενεξ ΓενοΜΞ 6000ι ∆ακο Αυτοσταινερ ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ακο Αυτοσταινερ πλυσ ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ Λαβςισιον Αυτοσταινερ Λειχα Βονδ Μαξ Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μεναρινι − Ιντελλιπατη ΦΛΞ Νονε (Μανυαλ) Οτηερ ςεντανα Βενχηµαρκ ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ Ν % Ν % 1 3 11 1 4 2 25 10 1 1 1 3 8 28 100 100 91 100 75 0 80 90 0 0 100 100 88 89 1 1 7 1 4 0 21 8 1 1 1 1 8 19 100 100 86 100 100 0 95 100 100 100 0 100 75 84 B>?@ A>@FGI? J KLNO ?PQSOQTO USPVWLOX Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ 7889 : ; <#= 8 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) , 30 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Λινκ 48 ∆ιλυτιον 1: 600 M%&'()* ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ M+,- ./00%1* ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ 2M34* ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΤΑΡΓΕΤ ΡΕΤΡΙΕςΑΛ ΣΟΛΥΤΙΟΝ, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ΑΣ ΠΕΡ ΚΙΤ, ΡΤ ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ 5%&%6&,(-* ∆ακο Ενςισιον ΦΛΕΞ+ ( Κ8002/12) , 20 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ 7889 : ; <#= Y Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 19/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Επιτοµιχσ ΑΧ−0029 (ΕΠ10) , 25 Μινσ, 22 ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ M%&'()* ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ M+,- ./00%1* Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) 2M34* Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ∆ιλυτιον 1: 100 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 22 ≡Χ., Τιµε 2: 10 Μινσ 5%&%6&,(-* Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 71 ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 Z[\\] ^ _`abcd e Παρτιχιπαντ σχορεδ 18/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 20/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ∆ακο Α4502 (ρβ πολψ) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Αυτοµατιον: ∆ακο Αυτοσταινερ Πλυσ Λινκ ∆ιλυτιον 1: 200 Μετηοδ: ∆ακο ΦΛΕΞ+ κιτ Μαιν Βυφφερ: ∆ακο ΦΛΕΞ ωαση βυφφερ, ΠΗ: 7.6 ΗΜΑΡ: ∆ακο ΠΤΛινκ, Βυφφερ: ΗΙΓΗ ΠΗ ΤΡΣ, ΠΗ: 9 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ∆ακο ΦΛΕΞ ∆ΑΒ, 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 10 Μινσ ∆ετεχτιον: Νονε Z[\\] ^ _`abcd y Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 18/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Χελλ Μαρθυε 117Ρ/Σ−ξξ (ΨΡ145) , 30 Μινσ, 20 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ fghijkl ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ fmno pqrrgsl Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) tfuvl Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ1 ΕΑΡ: ΝΟΤ ΑΠΠΛΙΧΑΒΛΕ Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 20 ≡Χ., Τιµε 1: 10 Μινσ, Τιµε 2: 5 Μινσ wghgxhnjol Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 20 ≡Χ |}~ }~ ~ Α σελεχτιον φροµ ϕυστ α φεω οφ τηε βεστ µετηοδσ εµπλοψεδ βψ παρτιχιπαντσ [z{\ ^ _`abcd \ Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) , 32 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΞΤ fghijkl ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ fmno pqrrgsl ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) tfuvl ςεντανα Βενκ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ∆ιλυτιον 1: 1/40 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ wghgxhnjol ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) Πρεδιλυτεδ [z{\ ^ _`abcd Παρτιχιπαντ σχορεδ 20/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 16/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα ΠΑ0219 (Κ9) , 25 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ Μαξ fghijkl ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ fmno pqrrgsl Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) tfuvl Λειχα ΒονδΜαξ ΕΡ2 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800), 22 ≡Χ., Τιµε 2: 10 Μινσ wghgxhnjol Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 15 Μινσ, 22 ≡Χ Πρεδιλυτεδ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 72 ΑΛΙΜΕΝΤΑΡΨ ΤΡΑΧΤ ΠΑΤΗΟΛΟΓΨ Μοδυλε Ρυν 98 ∆ΟΓ1 − Μετηοδ 3 Παρτιχιπαντ σχορεδ 17/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 17/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: Λειχα ΝΧΛ−Λ−∆ΟΓ−1 (Κ9) , 15 Μινσ, 37 ≡Χ Αυτοµατιον: Λειχα Βονδ−ΙΙΙ Μετηοδ: ςΒΣ ΒονδΜΑξ Ρεφινε ΚΙΤ Μαιν Βυφφερ: Βονδ Ωαση Βυφφερ (ΑΡ9590) ΗΜΑΡ: Λειχα Βονδ ΙΙΙ ΕΡ2 ∆ιλυτιον 1: 100 ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςΒΣ Βονδ Πολψµερ Ρεφινε κιτ (∆Σ9800) ∆ετεχτιον: Λειχα Βονδ Πολψµερ Ρεφινε (∆Σ9800) , 8 Μινσ, ΡΤ ≡Χ Πρεδιλυτεδ ∆ΟΓ1 − Μετηοδ 4 Παρτιχιπαντ σχορεδ 19/20 (ΥΚ ΝΕΘΑΣ Σλιδε) ανδ 15/20 (Ιν Ηουσε σλιδε) υσινγ τηισ µετηοδ. Πριµαρψ Αντιβοδψ: ςεντανα (ΣΠ31) 760−4590 , 32 Μινσ Αυτοµατιον: ςεντανα Βενχηµαρκ ΥΛΤΡΑ Μετηοδ: ςεντανα Υλτραςιεω ∆ΑΒ Μαιν Βυφφερ: ςεντανα ρεαχτιον βυφφερ (950−300) ΗΜΑΡ: ςεντανα Βενκ ΞΤ ΧΧ1 (Στανδαρδ) ΕΑΡ: Χηροµογεν: ςεντανα Υλτραϖιεω ∆ΑΒ ∆ετεχτιον: ςεντανα Υλτραςιεω Κιτ (760−500) ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:06 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 73 74 The HER2 ISH Module - Interpretive Run 27 Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and 9 Reference Centres Gene Assessed: HER2 Sections circulated: Composite block containing 4 breast tissue sections (see below) Number of Registered Participants: 176 The Summary Box below gives details of the HER2 phenotype and genotype of the cell lines circulated for these assessments, which comprised of formalin fixed and paraffin processed sections from a composite block of four human breast carcinomas. Tissue Section HER2 status by IHC1 HER2 status by FISH2 A 3+ Amplified B 3+ Amplified C 1+ Not amplified D 1+ Not amplified AN IMPORTANT NOTE ABOUT THE TYPES OF PREPARATIONS WHICH ARE ASSESSED IN THIS MODULE Although this module has been up until this time entitled HER2 FISH, the organizers would like to make it clear that the submission of results from slides stained using chromogenic in-situ hybridisation (CISH) and silver in-situhybridisation (SISH) are equally acceptable, and are welcomed. Copy number data produced from slides stained using this approach will be assessed in a similar way to that produced by single colour FISH users i.e. against the copy number data produced by the reference centres. Tissue Section Positioning: Tissue sections are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is indicated on distribution of the slides Slide Label A B C D Introduction Recommendations After successful conclusion of the pilot phase we are pleased to announce that this is now a full UK NEQAS module. The results of the first pilot and a three year follow-up have now been published[1,2]. Furthermore, the scheme has allowed multiple ‘ring studies’ to be undertaken and have allowed new methodologies, for example the Ventana silver ISH (SISH)[3], Kreatech FISH probes[4] and the Ventana Dual ISH (BDISH)[5] to be analysed. With the growing importance of colourimetric assays, both chromogenic and silver based in situ detection systems, the scheme has changed from a FISH to an ISH based scheme, where all molecular in situ assays for HER2 gene copy/amplification determination are included. This move reflects an on-going development in chromogenic assay systems which it is envisaged will lead to a wider uptake of these assays within the diagnostic community. For UK laboratories carrying out diagnostic HER2 ISH testing participation is therefore mandatory under Clinical Pathology Accreditation (UK), and National Quality Assurance Advisory Panel (NQAAP) regulations. It should also be emphasised that the scheme remains very-much open to non-UK laboratories as an aid to monitoring and improving performance. Diagnostic testing recommendations for HER2 ISH was originally published by Walker et at [6] but a more recent publication covering recommendations for both breast and gastric in-situ hybridisation methods is now available[7]. Assessment of Slides (rationale behind the adopted scoring system) Cell lines were selected to cover diagnostic intervals for the HER2 FISH test, where gene amplification is recognised if the ratio of HER2 signals to Chromosome 17 signals exceeds 2.0. Previous evidence suggests that inter-observer error in scoring FISH signals can be controlled within 10% for both HER2 and other solid tissue analyses (Bartlett et al., 2001, Bartlett, 2005 for review). This results in a small population of cases (<2.0% of cases, unpublished observations; FISH used as frontline test) where the result reported lies within a 10% range of the diagnostic interval, i.e. between 1.80 and 2.20. Whilst this compares favourably with the approximately 15% of cases reported as borderline by immunohistochemistry it highlights the need to rigorously control scoring approaches. Data suggest that allowing variation to increase by 5% (to 15%) would double the number of equivocal cases (to 4%) and allowing an increase © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 75 The HER2 ISH Module - Interpretive Run 27 How the scoring system works Schematic representation of the scoring system; the example illustrated uses the Reference Centre set of HER2/Ch17 ratios obtained for the SK-BR3 (3+ Amplified) cell line at run 4. In this case the lowest ratio obtained by a Reference Centre was 3.19, and the highest 4.10; participants submitting ratios within this range were judged to have achieved an appropriate result (score = 3). The lower cut-off for acceptable ratios (score = 2) was calculated as 3.19 minus 10% of 3.19, that is 2.87; and the upper cut-off was calculated as 4.10 plus 10% of 4.10, that is 4.51. Participants who submitted ratios out-with these 10% cut-offs were judged to have achieved an inappropriate and received a score of 1. Except in the case of the MDA-MB-453 cell line, misdiagnosis (amplified reported as non-amplified, and visa versa) resulted in a score of 0. Superscript notation and abbreviation used in figure: * = does not apply to results obtained for MDA-MB-453 (2+ Borderline: Amplified to Non-Amplified) cell line; RC = Reference Centre. to 20% variation at the diagnostic interval would lead to a fourfold increase in equivocal cases (Bartlett unpublished observations). These observations underpin the approach taken in assessing participants results. For each tissue section, participants scored 3 points if the result reported fell within the range observed by the reference laboratories. These reference laboratory results already reflect the acceptable observer variation of 10% for inter-observer variation in scoring discussed above since they are collated from seven different laboratories, each of which presents two scores (up to 14 observations per cell line per assessment). Thus results must fall within this range to be regarded as appropriate. For each tissue section, participants scored 2 points if results lay within a further 10% of the range of results observed by the reference centres. These results reflect a band approximating to the 20% variation described above. Such results reflect acceptable performance with the potential for improvement. For results, which lay out with this second band of variation one point was given, representing inappropriate performance. For such specimens it is important to note that despite the correct diagnosis being given in many cases, a degree of variation >20% from the accepted result is indicative of a high degree of potential for error in diagnosis. In cases where results were not only deviating to this degree from the accepted result but were also misdiagnosed (e.g. where a non-amplified case is reported as amplified) a score of 0 was recorded in recognition of the negative impact this has on the laboratories likely performance on diagnostic samples. 2. Bartlett JM, Ibrahim M, Jasani B, Morgan JM, Ellis I, Kay E, Connolly Y, Campbell F, O'Grady A, Barnett S, Miller K. (2009) External quality assurance of HER2 FISH and ISH testing: three years of the UK national external quality assurance scheme. Am J Clin Pathol; 131:106-11. 3. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, Wencyk P, Ellis I, Kay E, Connolly Y, O'Grady A, Di Palma S, Starczynski J, Morgan JM, Jasani B, Miller K. (2009) Chromogenic in situ hybridization: a multicenter study comparing silver in situ hybridization with FISH. Am J Clin Pathol; 132: 514-520. 4. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, Thomas J, Wencyk P, Ellis I, Kay E, Connolly Y, O'Grady A, Barnett S, Starczynski J, Cunningham P, Miller K. (2010) A UK NEQAS ICC and ISH multicentre study using the Kreatech Poseidon HER2 FISH probe: intersite variation can be rigorously controlled using FISH. Histopathology; 56:297-304. 5. Bartlett JM, Campbell FM, Ibrahim M, O'Grady A, Kay E, Faulkes C, Collins N, Starczynski J, Morgan JM, Jasani B, Miller K. (2011) A UK NEQAS ISH multicenter ring study using the Ventana HER2 dual-color ISH assay. Am J Clin Pathol; 135:157-162. 6. Walker RA, Bartlett JM, Dowsett M, Ellis IO, Hanby AM, Jasani B, M i l l e r K, Pinder SE. (2008) HER2 testing in the UK: further update to recommendations. J Clin Pathol;61818-824. 7. Bartlett JM, Starczynski J, Atkey N, Kay E, O'Grady A, Gandy M, Ibrahim M, Jasani B, Ellis IO, Pinder SE, Walker RA. (2011) HER2 testing in the UK: recommendations for breast and gastric in-situ hybridisation methods. J Clin Pathol; 64: 649-653. References 1. Bartlett JMS, Ibrahim M, Jasani B, et al. (2007) External quality assurance of HER2 FISH testing: Results of a UK NEQAS pilot scheme. J Clin Pathol; 60:816 -819 © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 76 ΙΣΗ Μοδυλε Ρυν 27 ¡¢£¢¤¥¡¦ § ¨¦ ©¥ª Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 40 4 = 1 (1%) 4 = 1 (2%) 5 = 0 (0%) 35 5 = 0 (0%) 12 6 = 1 (1%) 6 = 0 (0%) 7 = 3 (2%) 30 7 = 1 (2%) 10 νο. οφ ρετυρνσ 8 = 14 (11%) νο. οφ ρετυρνσ Ινδιϖιδυαλ Σχορεσ 14 9 = 11 (9%) 25 10 = 29 (24%) 11 = 24 (20%) 20 12 = 40 (33%) 15 Συµµαρψ 10 8 = 3 (7%) 9 = 5 (12%) 10 = 10 (24%) 8 11 = 9 (21%) 12 = 13 (31%) 6 Συµµαρψ 4 12 − 12 = 40 (33%) 12 − 12 = 13 (31%) 9 − 11 = 64 (52%) 5 9 − 11 = 24 (57%) 2 4 − 8 = 19 (15%) 4 − 8 = 5 (12%) Μεδιαν = 11.00 0 4 5 6 7 8 9 10 11 Μεδιαν = 11.00 0 12 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Σχορεσ Σχορεσ «¬¡©® ¯¤©ª¬® ¡¢£¢¤¥¡¦ ¨ª ¬ £¬¥¡°¬ ©± ¡¢£¢¤¥¡¦ 100 100 90 100 100 90 83 81 80 78 80 70 58 60 60 50 50 50 42 40 40 33 30 30 25 19 20 9 10 0 1 0 1 0 Χοπψ Νο.: ςεντανα Ινφορµ Χοπψ Νο.: Ζψµεδ / Ινϖιτρογεν: σποτ−λιγητ % Πασσ Ρατε 70 % οφ Παρτιχιπαντσ 100 3 20 7 4 3 2 Ρατιο: Κρεατεχη Προβεσ Ρατιο: Λειχα ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ ΤΑ9217 Ρατιο: Οτηερ 5 10 4 0 Ρατιο: ∆ακο ∆υοΧΙΣΗ Ρατιο: ∆ακο Πηαρµ ∆ξ Ρατιο: Πατηϖψσιον ςψσισ Κιτ Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα Ινφορµ ΣΙΣΗ Ινφορµ ∆υαλ ∆υαλ ΙΣΗ ΙΣΗ 780−4422 (Β∆ΙΣΗ) (∆∆ΙΣΗ) Ρατιο: Ζψτοϖισιον ΖψτοΛιγητ «¬¡©® ¯¤©ª¬® § ²¨¦ ©¥ª ¨ª ¬ £¬¥¡°¬ ©± ¡¢£¢¤¥¡¦ 100 100 100 100 100 100 89 90 90 80 70 70 67 60 60 50 50 50 50 43 40 40 30 30 24 20 20 12 10 0 Χοπψ Νο.: Ζψµεδ / Ινϖιτρογεν: σποτ−λιγητ 7 5 2 0 2 2 10 2 0 Ρατιο: ∆ακο Πηαρµ ∆ξ Ρατιο: Κρεατεχη Προβεσ Ρατιο: Λειχα ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ ΤΑ9217 Ρατιο: Πατηϖψσιον ςψσισ Κιτ Ρατιο: ςεντανα ∆υαλ ΙΣΗ (Β∆ΙΣΗ) Ρατιο: ςεντανα Ινφορµ ∆υαλ ΙΣΗ 780−4422 (∆∆ΙΣΗ) Ρατιο: ςεντανα Ινφορµ ΣΙΣΗ Ρατιο: Ζψτοϖισιον ΖψτοΛιγητ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 77 % Πασσ Ρατε % οφ Παρτιχιπαντσ 80 ΙΣΗ Μοδυλε Ρυν 27 ³´µ ¶· ¸¹º»¼½ ¾¿ÀÁ¼Â¹½ à ÄÁÁ ÅÆǺÈÉÈÀÆÊºË Ì µÍ¿Ì¹Ç ¼Î ÅÆǺÈÉÈÀÆÊºË 100 100 90 100 100 90 83 81 80 78 80 70 70 58 60 60 53 50 50 40 50 40 33 30 25 30 24 20 20 12 10 0 % Πασσ Ρατε Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ 100 1 0 1 0 Χοπψ Νο.: ςεντανα Ινφορµ Χοπψ Νο.: Ζψµεδ / Ινϖιτρογεν: σποτ−λιγητ 4 9 5 4 3 Ρατιο: Κρεατεχη Προβεσ Ρατιο: Λειχα ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ ΤΑ9217 Ρατιο: Οτηερ 6 10 5 0 Ρατιο: ∆ακο ∆υοΧΙΣΗ Ρατιο: ∆ακο Πηαρµ ∆ξ Ρατιο: Πατηϖψσιον ςψσισ Κιτ Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα Ρατιο: ςεντανα Ινφορµ ΣΙΣΗ ∆υαλ ΙΣΗ Ινφορµ ∆υαλ (Β∆ΙΣΗ) ΙΣΗ 780−4422 (∆∆ΙΣΗ) Ρατιο: Ζψτοϖισιον ΖψτοΛιγητ ³´µ ¶· ¸¹º»¼½ ¾¿ÀÁ¼Â¹½ à ´Ï ÐÆÌË ¼ÊÁ Ì µÍ¿Ì¹Ç ¼Î ÅÆǺÈÉÈÀÆÊºË 100 100 100 100 100 100 89 90 90 80 70 70 67 60 60 50 50 50 50 40 40 30 30 18 20 10 0 20 10 1 0 2 Χοπψ Νο.: Ζψµεδ / Ινϖιτρογεν: σποτ−λιγητ Ρατιο: ∆ακο Πηαρµ ∆ξ 5 1 10 3 1 1 0 Ρατιο: Κρεατεχη Προβεσ Ρατιο: Λειχα ΗΕΡ2 ΦΙΣΗ ΤΑ9217 Ρατιο: Πατηϖψσιον ςψσισ Κιτ Ρατιο: ςεντανα ∆υαλ ΙΣΗ (Β∆ΙΣΗ) Ρατιο: ςεντανα Ινφορµ ∆υαλ ΙΣΗ 780−4422 (∆∆ΙΣΗ) Ρατιο: ςεντανα Ινφορµ ΣΙΣΗ Ρατιο: Ζψτοϖισιον ΖψτοΛιγητ ♥ Χοπψριγητ ΥΚ ΝΕΘΑΣ ΙΧΧ & ΙΣΗ Νοτ φορ πυβλιχατιον ωιτηουτ ωριττεν περµισσιον. Πριντεδ ατ 13:07 ον Τηυρσδαψ, 23 Αυγυστ, 2012 78 % Πασσ Ρατε Νυµβερ οφ Παρτιχιπαντσ 80 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Merdol Ibrahim, Suzanne Parry and 9 Reference Centres Gene Assessed: HER2 ISH Sections circulated: Composite slide consisting of 4 breast tumours with differing levels of HER2 expression (see table below) Number of Participants Taking Part 105 (45 Chromogenic & 60 Fluorescent) The Summary Box below gives details of the HER2 phenotype and genotype of the cell lines circulated for these assessments, which comprised of formalin fixed and paraffin processed sections from a composite block of four human breast carcinomas. Tissue Section HER2 status by IHC1 HER2 status by FISH2 A 3+ Amplified B 3+ Amplified C 1+ Not amplified D 1+ Not amplified Tissue Section Positioning: Tissue sections are positioned on microscope slides, as illustrated below. Any variation in this pattern is indicated on distribution of the slides Slide Label A B C D CEP17 and HER 2 copy numbers (e.g. Ventana/Roche SISH), then the assessors regard this as a single result, and as such, Chromogen ISH (CISH / SISH / BDISH / DDISH etc.) was combined comments are placed in a single results column. assessed around a multi-header microscope with each slide being assessed by 4 independent assessors each providing Results Summary overall scores out of 5 for the slide as a whole (not the individual tissue samples) . The scores are added together to give a score CISH Results out of 20, along with an overall pass rate comment. Selected images showing the acceptable and unacceptable levels of staining for the different methods are illustrated in Fluorescent ISH (FISH) was assessed by a single assessor figures 5-35. from one of the UK NEQAS reference centres and given a score out of 20 for the slide as a whole (not the individual tissue Overall the CISH staining appeared to be of better quality this samples), along with an overall pass rate comment. time round with an increase in acceptable scores. Participants showed an overall acceptable rate of 60% (27/45), which was A summary of the assessment scoring criteria and it’s up by 23% from the previous assessment, accompanied by a interpretation is shown on the next page decrease in borderline results to 20% compared to 37% from the previous assessment. And the unacceptable rates fell by 7% Each of the UK NEQAS tissues (A,B,C,D) (as well as in-house this time round to 20% compared to 27% from the previous samples where submitted) are individually assessed for the assessment. (See Fig 1). The main CISH method of choice was quality of ISH staining for each NEQAS tissue section (or the Ventana Dual ISH with 29/45 (64%) participants using this control tissue if in-house samples were submitted) and scored kit (See Figure 2). according to the criteria shown in the table below. Assessors do not count the HER2/CEP17 signals. The The improvement in pass rates was also reflected in the inaccuracy of signal enumeration is assessed in the 'interpretive' house control material submitted by participants, with the data section of the HER2 ISH module. showing an overall increase in acceptable rate of 52% compared to 21% from the previous assessment. In parallel, Important: If two separate slides are submitted with separate there was a decrease in unacceptable rates to 16% for this run Assessment Procedure © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 79 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Table below shows a summary of the assessment scoring criteria and interpretation. Individual Assessor Score Combined Assessor Scores & Results 0 0 1&2 4-9 = Unacceptable 3 10-12 = Borderline 4&5 13-15 = Acceptable 16-20 = Acceptable (Gold standard) Score Interpretation Slide not submitted for assessment The cell line/s and/or in-house tissue is unacceptable for interpretation with at least 3 out of the 4 assessors indicating that there are hybridisation issues, which could be due to: Excessive / Weak Nuclear staining Poor probe hybridisation Missing Her2 copy no. / CEP 17 Excessive background staining Please also see assessor comments on your report The cell line/s and/or in-house tissue is borderline interpretable with 2 out of the 4 assessors indicating that improvements can be made with respect for example: Excessive / Weak Nuclear staining Level of probe hybridisation Excessive background staining Please also see assessor comments on your report The cell line/s and/or in-house tissue show a good/very good standard of staining and are suitable for interpretive analyses. compared to 42% from the previous run. Of the 16% of participants who also submitted a ‘kit control’ 57% of these achieved an acceptable rate and the rest (43%) were all borderline. compared to 22% in the previous run. The next most popular method was the Dako Pharm DX showing an acceptable rate of 67%, which was a great improvement on the acceptable rate of 14% for the previous run. However, the number of labs using this method is still quite low (n=6). The data shows an encouraging overall improvement, however, it is still apparent that many participants still need Comparing CISH and FISH Methods to optimise their methodology to allow for more accurate Both CISH and FISH results improved significantly during clinical interpretation. this assessment and we hope that this was due to the recommendations provided (see below). However, it is still Note that although percentage pass rates are shown, the advisable not to over-compare these results until further data number of participants using certain methods are overall is gathered from forthcoming assessments. quite low, n=1 for some methods. IMPORTANT Selected images showing the acceptable and unacceptable Recommendations for Returning FISH Slides levels of staining for the different methods are illustrated in for NEQAS Assessments FISH Results figures 25-35. a. Section should be mounted using a fluorescence antifade Overall FISH pass rates showed a marked increase of 70% mounting media, which prevents loss/quenching of (42/60) compared to 51% from the previous assessment, fluorescence e.g. Vectashield (Vector labs), Dako with a drop in the unacceptable rate from 25% to 20%. InFluorescence Mounting Medium (Dako), Fluoromount house control material showed a similar pass rate to the (SIGMA/Aldrich, VWR). Note: The Abbott Vysis kit already previous run; 68% to 69% during this assessment. This is contains DAPI in phenylenediamine dihydrochloride, much the same for the unacceptable in-house scores, which which is an anti fading reagent, but we have found that increased slightly to 11% from 10%, as seen in the previous some laboratories also used the above mentioned assessment. Only 12% of participants submitted a kit control, mounting media. and of these there was an increased unacceptable rate of b. Seal the coverslip edges onto the slide using clear varnish 29% compared to the previous run of only 8%. (see Figure or another sealing agent, which will stop the slide from 3). drying out. c. Send back FISH slides as soon as you have finished your The FISH methodologies used and respective pass rates are own interpretation. illustrated in Figure 4. Of the methods submitted the d. There is no need to send back slides packed in ice/dry Pathvysion Vysis kit remains the method of choice, used by ice. Please return in the slide mailer that is provided. 68% of participants. This time round the Vysis kit showed a slightly higher acceptable rate of 63% compared to the previous assessment of 57%. However, the unacceptable rate still needs improving, and actually increased to 29% © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 80 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Fig. 1 Chromogen ISH Overall Pass Rates Fig. 2 Chromogen ISH: Pass Rate Related to Methods 45 Participants submitted slides for the CISH technical assessments of which 31 (69%) submitted an in-house control and 7 (16%) submitted a kit control (e.g. xenograft or cell line controls within kits). © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 81 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Fig. 3 Fluorescent ISH Overall Pass Rates Fig. 4 Fluorescent ISH Pass Rate Related to Methods There were 60 submissions for NEQAS cell line FISH slides, of which 35 (58%) submitted an in-house control and 7 (12%) submitted kit control slides . © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 82 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 How to Use this Report to Compare NEQAS Cell Line ‘Technical’ & ‘Interpretive’ Results: Once you have your results for both the ‘Interpretive’ and ‘Technical’ HER2 ISH modules, use both results to troubleshoot whether there are interpretive and/or technical issues with your ISH methodology. The table below shows a brief troubleshooting guide, which we hope will assistant you further. UK NEQAS ICC & ISH recommends that laboratories should continually monitor their performance to make sure that both technical and interpretive results are frequently audited. Interpretive & Technical Troubleshooting Guide Interpretive Result Appropriate or Acceptable Unacceptable Technical Result (pre-pilot module) Acceptable Acceptable Appropriate or Acceptable Borderline Unacceptable Borderline Appropriate or Acceptable Unacceptable Unacceptable Unacceptable The cell lines show a good standard of staining and have been interpreted correctly The cell lines show a good standard of staining BUT there appears to be issues with interpretation i.e. HER2 copy number and/or CEP17 overestimated/underestimated. Recommend that scoring/counting criteria is reviewed The cell lines are of borderline acceptability for staining quality. Recommend that technical method (kit/assay) is further optimised. The technical staining can be improved as this may be effecting interpretation. Recommend that technical method (kit/assay) is optimised (or where relevant a standardised kit is used as per instructions) as interpretation may be effected by the borderline quality of staining. The cell lines are unacceptable for interpretation and caution should be taken when interpreting from these slides. Recommend that technical method (kit/assay) is optimised (or where relevant a standardised kit is used as per instructions) as interpretation, although appears correct, may lead to incorrect interpretation of clinical cases The cell lines are unacceptable for technical staining and interpretation. Reporting from such cases is very likely to lead to incorrect interpretation of clinical cases. If there is persistent underperformance: - seek assistance from kit/assay manufacturer - seek assistance from UK NEQAS or colleagues - re-validate protocol (retrospectively and prospectively) - review scoring criteria - send clinical cases to a reference centre to confirm your results © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 83 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides Ventana DDISH & BDISH Fig 5. Excellent standard of staining in the UK NEQAS amplified section A. The distinct HER2 signals (black) and Ch17 signals (red) are clearly demonstrated. The HER2 copy no. signals appear as large and small clusters (DDISH). Fig 6. Excellent standard of staining in the UK NEQAS amplified section B, showing distinct HER2 signals (black) and Ch17 signals (red). The HER2 copy no. signals appear as large and small clusters (DDISH). Fig 9. Unacceptable staining pattern seen in the UK NEQAS amplified section A. Although the nuclei appear to demonstrate the expected level of amplification, the Ch17 signal is very weak and unreadable. The slide is therefore unquantifiable (BDISH). Fig 12. Excellent standard of staining of an in-house SKBR3 cell line control. The amplified cells show strong small and large clusters of HER2 copy no. The Ch17 signals are also clearly demonstrated (DDISH). Fig 7. Excellent standard of staining in the UK NEQAS non-amplified section C. The HER2 and Ch17 signals are strong and clear, with the expected level of copies per nuclei being demonstrated (DDISH). Fig 10. Unacceptable staining pattern seen in the UK NEQAS non-amplified section C. The HER2 signal is very weak and therefore unreadable (BDISH). Fig 13. Excellent standard of staining of a non-amplified in-house control, showing strong distinguishable and countable HER2 and Ch17 signals (DDISH). Fig 8. Excellent standard of staining in the UK NEQAS non-amplified section D, showing strong and clear HER2 and Ch17 signals at the expected level of copies per cell (DDISH). Fig 11. Borderline pass staining in the UK NEQAS amplified section B. Although the HER2 and Ch17 signals are clear and visible, there is a slight leaching of the Ch17 probe and excessive dust deposit (DDISH). Fig 14. Excellent standard of staining of the Ventana Xenograft amplified control. The signals are clearly demonstrated with HER2 copy no.’s appearing as large and small clusters (DDISH). Fig 15. Excellent standard of staining of the Ventana Xenograft nonamplified control. The HER2 and Ch17 signals are strong with the expected level of signals seen as 1-2 copies per cell (BDISH). © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 84 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Selected CHROMOGEN Based Images From Assessed slides Ventana Inform SISH Fig 16.Acceptable HER2 copy no. demonstrated in the UK NEQAS amplified section B. The signals are strong and appear as large clusters. Fig 17.Acceptable CEP17 in the UK NEQAS amplified section B, showing strong, distinct probe signals (same lab as Fig 12) Fig 18. Acceptable copy no. demonstrated in the UK NEQAS nonamplified section D. The signals are strong and discrete at the expected level of 1-2 copies per cell. Fig 19.Acceptable CEP17 in the UK NEQAS amplified section D. The nuclei show strong and distinct probe signals (same lab as Fig 14) Dako Duo CISH Fig 20.Borderline pass staining in the UK NEQAS amplified section B. Although the HER2 (red) and Ch17 (blue) signals are visible, there is too much background staining and the cell borders are not very well defined, making it difficult to single out cells. Fig 21.Acceptable pass staining in the UK NEQAS non-amplified section D. Both the HER2 (red) and Ch17 (blue) signals are visible at the expected level of 1-2 copies per cell. Fig 22.Unaccepatable staining pattern seen in the UK NEQAS non-amplified section D. The HER2 signals are difficult to read due to leaching of the probe and excessive background staining. Some of the cells are also displaying inappropriate ‘bubbling’ artefact. Invitrogen Spotlight Fig 23. Unacceptable staining pattern seen in the UK NEQAS nonamplified section C, showing an unreadable HER2 copy no. and nuclear morphology damage. Fig 24.Unaccepatable staining pattern seen in the UK NEQAS non -amplified section D. The HER2 copy no. is unreadable with background staining obscuring the signals. © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 85 The HER2 ISH Module - Technical (pilot) Run 27 Selected FLUORESENCE Based Images From Assessed slides Fig 25. Excellent staining in the UK NEQAS amplified section B. The Her2 (red) and Cep17 (green) signals are strong and clearly demonstrated, with the expected level of probes per cell. The background is also very clean (Rembrandt probes). Fig 26. Excellent staining in the UK NEQAS amplified section B. The Her2 (red) and Cep17 (green) signals show the expected level of probes per cell, with clean background (Vysis kit). Fig 29. Acceptable staining in the UK NEQAS amplified section B. Both the HER2 (green) and Cep17 (red) signals are clearly demonstrated. (Zytovision Zytolight kit). Fig 30. Acceptable staining in the UK NEQAS non-amplified section D. Allthough the DAPI is slightly weak (compare to fig 24), the HER2 (green) and Cep17 (red) signals are clearly seen. (Zytovision Zytolight kit). Fig 33. Unacceptable staining in the UK NEQAS amplified section B. Although the nuclei appear to demonstrate the expected level of amplification, there is no Cep17 signal, and therefore unquantifiable. Fig 27. Excellent staining in the UK NEQAS non-amplified section C. The HER2 and Ch17 signals are strong and clear, with the expected level of copies per nuclei being demonstrated (Kreatech probes). Fig 31. Borderline pass staining in the UK NEQAS amplified section A. The HER2 signals are weak, and the section appears to have insufficient pre-treatment (Kreatech probes). Fig 34. Unacceptable staining in the UK NEQAS amplified section A. The HER2 signal is weak and there is excessive background. The slide appears to have insufficient pretreatment (Vysis kit). Fig 28. Excellent standard of staining in the UK NEQAS non-amplified section D, showing strong and clear HER2 and Ch17 signals at the expected level of copies per cell (Vysis kit). Fig 32. Borderline pass staining in the UK NEQAS non-amplified section D. Although the signals are clearly demonstrated, there is morphology damage and the cell borders are not very well defined, making it difficult to single out cells (Vysis kit). Fig 35.Unacceptable staining in the UK NEQAS non-amplified section C. There is morphology damage and the cell borders are not very well defined, making it difficult to single out cells ((Zytovision Zytolight kit). © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 86 END © UK NEQAS ICC & ISH. No part of this document can be copied or used without prior written consent 87
© Copyright 2024 Paperzz