Sommaire
Posters Walk ......................................................... 7
Recherche clinique ........................................................... 9
Impact des antifongiques sur la résistance des principales espèces de Candida en
réanimation – Evolution et tendances sur 10 ans ...................................................... 11 Influence du site d’insertion du cordon ombilical dans l’achèvement du potentiel de
croissance des nouveau-nés issus de grossesses uniques au CHU de Grenoble. ............. 12 Apport du scanner cardiaque dans les procédures d’implantations percutanées de valve
aortique .............................................................................................................. 13 Profils morphologique et neuropsychologique des patients suspects de maladie
d’Alzheimer ......................................................................................................... 14 Etude EEG des mécanismes de la stimulation cérébrale profonde chez les TOCs sévères . 15 Transplantation d’îlots de Langerhans au sein du réseau GRAGIL : données à 5 ans ....... 16 Recherche fondamentale ............................................... 17
Etude de la réaction inflammatoire dans un modèle murin d’intoxication par un pesticide
organophosphoré. ................................................................................................ 19 Effets de l'érythropoïétine carbamylée (CEPO) sur l'expression de l'aquaporine 4 dans un
modèle d'œdème cérébral après traumatisme crânien chez le rat. ............................... 20 MicroARNs et toxoplasmose chronique : induction spécifique de miR-146a et miR-155
dans le cerveau de l'hôte1...................................................................................... 21 Nouveaux composés bis-indoliques de synthèse actifs vis-à-vis de Francisella tularensis
subspecies holarctica ............................................................................................ 22 EG-VEGF (Endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor) controls placental
hematopoietic differentiation during early pregnancy ................................................. 23 Glycopolypeptide-based nanocarriers targeting CD44 for lung cancer treatment ............ 24
Recherche translationnelle ............................................ 25
Peut-on améliorer son équilibre unipédique grâce à l’utilisation du biofeedback auditif
de l’application Smartphone iBalance ? .................................................................... 26 Analysis of Chronic Lung Allograft Dysfunction (CLAD) after Lung Transplantation by
proteomic approaches of bronchoalveolar lavage and plasma fluids ............................. 27 A safe bacterial micro-syringe for in vivo antigen delivery and immunotherapy ............. 28 Analyse des pressions à l'interface moignon-emboiture chez les patients amputés
fémoraux ............................................................................................................ 29 Prédicteurs neuroanatomiques de la réponse à la psychoéducation chez les patients
bipolaires euthymiques : étude en IRM morphologique .............................................. 30 Page|1
Erythrocyte dysfunctions in Myeloproliferative Neoplasms Ph- ..................................... 31 Les résumés ........................................................... 32
Monitoring the immunomodulatory effects of pegylated interferon a-2a therapy in patients
with chronic HBV infection, an immunological sub-study of ANRS HB06 PEGAN TRIAL .... 33 Evaluation de l’impact des antifongiques sur le pronostic à trente jours des patients
sévères en réanimation ......................................................................................... 34 Prévention des troubles musculo-squelettiques par la pratique d’activités physiques
adaptées en milieu professionnel – Application au secteur de la viticulture.................... 35 Caractérisation fonctionnelle et moléculaire de mutations rares CGDX- – Mise en évidence
de régions de NOX2 essentielles pour la synthèse du cytochrome b558 .......................... 36 Implication du noyau sous thalamique de patients parkinsoniens dans l'inhibition proactive
et réactive........................................................................................................... 37 Prevalence of focal fibrosis and right ventricular systolic dysfunction by Magnetic
Resonance Imaging (MRI) in nonischemic dilated cardiomyopathy. .............................. 38 Analyse de la survie des patients avalanchés en arrêt cardiaque dans les Alpes du Nord. 39 Auto-antibodies to vascular endothelial cadherin in humans: association with autoimmune
diseases.............................................................................................................. 40 Role of endoplasmic reticulum stress in the deleterious cardiovascular consequences of
chronic intermittent hypoxia. Beneficial effects of exercise. ........................................ 41 An Understanding of Metabolic Adaptation in Non-Small Cell Lung Cancer .................... 42 Optimized generation of functional neutrophils and macrophages from patient-specific
induced pluripotent stem cells – Ex vivo models of X-linked, AR22- and AR47- Chronic
Granulomatous Diseases ....................................................................................... 43 Impact of follicular Prokineticin 1 quantification on subsequent embryo transfer decisions
in conventional in vitro fertilization ......................................................................... 44 Kinin catabolism and disease severity in hereditary angioedema with F12 mutation ....... 45 Résultats à long terme de 14 méniscectomies partielles (méniscoplasties) dans
les lésions méniscales sur ménisque latéral discoïde. ................................................. 46 Description of BAL Proteome in Lung Transplant Recipients: Optimization of Sample
Analysis and Comparison with Healthy Volunteers ..................................................... 47 Autogreffe ostéochondrale en mosaïque des condyles fémoraux: résultats à 9 ans de
recul moyen de 24 patients. .................................................................................. 48 OPTIC CLINIC : Utilisation de l’Imagerie optique pour les applications cliniques ............. 49 Identification du gène DNAH1 dans les anomalies flagellaires multiples responsables
d’une infertilité masculine primaire. ........................................................................ 50 Improvements of Sample Preparation Strategies for the Research of Protein Biomarkers
in Plasma ............................................................................................................ 51 Une géographie de la santé des travailleurs ? Intégration de données relatives à la santé
au travail au moyen d’un Système d’Information Géographique (SIG).......................... 52 Page|2
Développement d’un programme en Activités Physiques Adaptées au domicile suivi
sur le NET ........................................................................................................... 53 COB223: un inhibiteur chimique de l’angiogenèse et de la tumorigenèse ciblant la voie
MAPK. ................................................................................................................ 54 Etude de la connectivité fonctionnelle et structurelle des régions cérébrales fronto-limbique
dans le trouble bipolaire : ...................................................................................... 55 Validation de la protéine kinase CK2 et des facteurs uPA/PAI-1 comme biomarqueurs
dans les cancers du sein: facteurs pronostiques indépendants ou associés ? ................. 56 Vasoréactivité de la choroïde et de la tête du nerf optique en hypoxie, hyperoxie
chez les sujets sains ............................................................................................. 57 Pharmacogenetic study and longitudinal therapeutic drug monitoring of voriconazole
in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation patients ..................................... 58 Radiothérapie par photoactivation de nanoparticules et effet Mössbauer ....................... 59 Recherche par technique FISH des translocations du gène RET dans les adénocarcinomes
pulmonaires métastatiques .................................................................................... 60 Role of HIF-1 in the cardiac remodeling and inotropic effects of chronic intermittent
hypoxia .............................................................................................................. 61 modifications au cours du temps des valeurs de perfusion et de vasorecativite cerebrale
apres un avc ischemique ....................................................................................... 62 Determinants and impact of poor adherence to hbv second generation analogs in real life
in france: the multicentric adhepb study .................................................................. 63 APRIL, un facteur du microenvironnement promoteur du lymphome B diffus a grandes
cellules ............................................................................................................... 64 Development of multifunctional particles for diagnostic & targeted delivery in cancer
therapeutics ........................................................................................................ 65 Iontophoresis of treprostinil enhances ulcer healing in a mouse model of systemic
sclerosis. ............................................................................................................ 66 DNA binding of the p21 oncogene repressor ZBTB2 is inhibited by cytosine
hydroxymethylation .............................................................................................. 67 Identification des transcrits de fusion ALK et ROS1 dans le cancer du poumon au moyen
de techniques basées sur la PCR............................................................................ 68 Augmentation de la sécrétion de MMP et la néosynthèse d’IL1-β via l’augmentation de
l’activité Nox4/p22 dans les chondrocytes primaire humains ....................................... 69 Deciphering the resistance mechanisms to EGFR Tyrosine Kinase Inhibitors in Non-Small
Cell Lung Cancer: a quantitative proteomic approach ................................................ 70 Microdélétion de TCF12 chez un patient présentant une cranio-sténose coronale associée
à un retard mental secondaire à un remaniement chromosomique maternel complexe. . 71 Difficulté d’interprétation de biomarqueurs d’exposition professionnelle : exemple des
Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques ................................................................ 72 Epidemiology of Invasive Aspergillosis (IA) during Induction Therapy in Adults with Acute
Lymphoblastic Leukemia (ALL): A GRAALL-2005 Study .............................................. 73 Page|3
Recherche de molécules bioactives : criblage d’un venin de scorpion sur la mobilité
spermatique chez l’homme .................................................................................... 74 Evaluation du signal de fluxmétrie laser Doppler rétinien et de la tête du nerf optique chez
le rat sain ........................................................................................................... 75 iTRAQ strategy to quantify phosphorylation level of biologically active human factor IX
used for the treatment of hemophilia B ................................................................... 76 Mécanismes physiopathologiques et prévention des effets délétères de l’hypoxie
intermittente chronique sur le développement tumoral .............................................. 77 Caractérisation du profil de pousse spontanée des progéniteurs érythroïdes et
mégacaryocytaires de patients TE et MFI en fonction de leur statut moléculaire CALR .... 78 Zinc regulates endothelial cell motility and endothelin-1 secretion through HIF-1α
activation. ........................................................................................................... 79 Role of EG-VEGF (endocrine gland derived endothelial growth factor) in the human fetal
membranes. ........................................................................................................ 80 Dysfonction diaphragmatique lors du sevrage ventilatoire en cas de neuromyopathie
de réanimation : incidence et devenir. ..................................................................... 81 SWAN-iCare : prise en charge des plaies de pied diabétique par Pression Négative et
monitoring à distance de la cicatrisation. ................................................................. 82 MeCP2 Is Critical for Maintaining Mature Adult Neuronal Networks and Global Brain
Anatomy ............................................................................................................. 83 Standardized delivery can be associated with resistance to bevacizumab ...................... 84 Interaction NADPH oxydase et glycolyse dans le neutrophile stimulé : rôle de la 6phosphofructokinase 2 .......................................................................................... 85 Modified informed consent documents do not improve patients understanding in
biomedical research while decreasing the rate of final enrolment, the LISYCOM study.
A randomized control multicenter study performed in real conditions ........................... 86 Modélisation des expositions aux mélanges d’hydrocarbures aromatiques polycycliques
pour une meilleure estimation des risques sanitaires ................................................ 87 Is soluble VE-cadherin a biomarker of targeted herapies? First study with Sunitinib ....... 88 Première étude fonctionnelle de mutations d’ECEL1, un nouveau gene d’arthrogrypose
distale ................................................................................................................ 89 Nouvelle stratégie préventive anti-HIV: vers le développement d'un microbicide
prometteur .......................................................................................................... 90 Suivi de l’oxygénation profonde de tissus in vivo à l’aide de l’imagerie optique :
résultats précliniques sur rats ................................................................................ 91 Evaluation pilote de l’algorithme d’insulinothérapie en boucle semi-fermée Diabeloop en
période prandiale (étude SP6-0) ............................................................................. 92 La GEO-ZAPE des pathologies professionnelles ......................................................... 93 Evaluation du statut nutritionnel, lors du diagnostic, des patients traités pour un cancer
des voies aéro-digestives supérieures (VADS) .......................................................... 94 Page|4
Contribution à l’étude anatomique des kystes congénitaux dérivés du proentéron :
corrélations anatomo-radio-chirurgicales ................................................................. 95 Reprise du sport après ostéotomies de valgisation dans la gonarthrose médiale sur genu
varum : A propos d’une série de 83 patients. ........................................................... 96 Three Dimension Fluoroscopy-Based Navigation For Dorsal Percutaneous Instrumentation
In Traumatic Vertebral Fractures. ........................................................................... 97 Anticipation certaine et incertaine de la douleur viscérale dans la maladie de Crohn - étude
IRMf ................................................................................................................... 98 Effet neuroprotecteur du mannitol sur l'oxygénation cérébrale dans un modèle de
traumatisme crânien diffus .................................................................................... 99 Prédiction du besoin transfusionnel chez le patient traumatisé hémodynamiquement
stable par la mesure du lactate capillaire au déchocage. ...........................................100 Apport de la technique des oscillations forcées dans l’évaluation ex-vivo de poumons de
porc reperfusés ...................................................................................................101 CX-4945, un nouvel agent anticancéreux ciblant la protéine kinase CK2.
Evaluation préclinique de son activité dans le cancer du rein......................................102 Activité fonctionnelle de C1 Inhibiteur plasmatique : contrôle de la kininoformation ......103 Maladie de Crohn et Neurostimulation Vagale Etude pilote .........................................104 Peut-on prédire le besoin d’une opération différée au début du traitement non opératoire
des traumatismes sévères du foie ? ......................................................................105 Cancers bronchiques oligométastatiques : une survie proche des maladies localement
avancées ...........................................................................................................106 Azole antifungals: therapeutic drug monitoring and/or bioassay? ...............................107 EG-VEGF and its receptors are deregulated in complete hydatiform moles: Potential
role in placental tumor development. .....................................................................108 Intérêt de l’élastographie quantitative pour caractériser les nodules thyroïdiens : peut-on
diminuer le nombre de cytoponctions de nodule bénin ?............................................109 Résumés ED CSV & EDISCE
sélectionnés pour communications orales ........................ 111
La résection tumorale guidée par l’imagerie en fluorescence proche infrarouge
des cancers des VADS dans un modèle animal orthotopique, améliore le taux
de survie sans rechute .........................................................................................112 Etude de la réaction inflammatoire dans un modèle murin d’intoxication par un pesticide
organophosphoré. ...............................................................................................113 99m
Tc-cAbVCAM1-5 imaging is a sensitive and reproducible tool for the detection of
inflamed atherosclerotic lesions in mouse ...............................................................114 Impact des antifongiques sur la résistance des principales espèces de Candida en
réanimation – Evolution et tendances sur 10 ans .....................................................115 Page|5
Journée de la Recherche Médicale 2014
Posters Wal k Page|7
Journée de la Recherche Médicale 2014
Recherche Cl inique (RC 01 à RC 06) Page|9
RC01
Journée de la Recherche Médicale 2014
Impact des antifongiques sur la résistance des
principales espèces de Candida en réanimation
– Evolution et tendances sur 10 ans
, Maubon D,2,3, Cornet M2,3, Fournier P 2,3, Pelloux H 2,3, Schwebel C2,3,
Chapuis C2,3, Foroni L2,3, Timsit JF1,2,3
1 Institut Albert Bonniot – Inserm U823 / Université Joseph Fourier, Equipe 11 , F-38706 La Tronche
2 Centre Hospitalier Universitaire, F-38043 Grenoble
3 Université Grenoble Alpes, F-38041 Grenoble
Bailly S
1,2,3
Introduction : Les levures du genre Candida représentent la cause la plus fréquente d’infection fongique
humaine et l’incidence des infections à Candida augmente depuis plusieurs années. Cette tendance est
d’autant plus importante chez les patients critiques en réanimation qui sont à haut risque d’infection
opportuniste à Candida. Depuis 2003, de nouvelles molécules antifongiques ont été introduites, notamment
les échinocandines qui présentent un spectre d’action plus large pour les Candida incluant les espèces C.
glabrata et C. krusei. Les pratiques de prescription des antifongiques incluant les échinocandines ont été
évaluées en 2010 avec un faible recul et ont mis en évidence un lien entre la prescription d’antifongique et
l’évolution des CMI.
Objectif : L’objectif de cette étude est d’évaluer l’effet de la prescription d’antifongiques sur la sensibilité
des espèces Candida au service de réanimation médicale de Grenoble sur une période de 10 ans (2004 –
2013).
Méthode : la consommation d’antifongique a été déterminée en nombre de doses journalières pour 1000
jours d’hospitalisation. La distribution des espèces Candida sur une période de 10 ans (2004 – 2013) et les
CMI des antifongiques sur la période 2007 – 2013 a été déterminée. Une analyse des séries
chronologiques a été effectuée pour estimer les relations entre la consommation d’antifongiques, la
distribution des Candida spp. et les changements de CMI dans le temps.
Résultats : Sur 30498 échantillons de
4512 patients, 2410 étaient positifs à
Candida. Candida albicans reste
l’espèce majoritaire (53.1%) suivie de
Candida glabrata (16.2%) et Candida
parapsilosis
(7.9%).
Candida
parapsilosis suit une augmentation
significative de 5.8% en 2004 à 8.4%
en 2013 en prenant en compte les
fluctuations temporelles (p=0.02).
L’utilisation
de
la
caspofungine
augmente significativement entre 2004
(17.9 DDDs/1000HD) et 2013 (58.8
DDDs/1000HD) (p=0.001). Entre 2007
Figure1 : Consommation mensuelle de caspofungine et
et 2013, l’augmentation de la
CMI de la caspofungine observée et prédite pour C.
consommation de caspofungine est
significativement
corrélée
à
l’augmentation de la CMI de C. parapsilosis (p=0.04), C. glabrata (p=0.0005) et C. albicans (p=0.04). La
consommation d’amphotéricine B est significativement corrélée à une augmentation de la CMI de C.
glabrata (p=0.046) et montre une tendance non significative à l’augmentation de la CMI de C. albicans
(p=0.058). Les consommations de voriconazole et de fluconazole ne montrent pas de corrélation avec une
hausse de la CMI dans un délai de 6 mois.
Conclusion :
Cette étude confirme l’association observée entre la consommation d’antifongique, notamment la
caspofungine et l’augmentation de la CMI au sein des espèces Candida observées.
Fournier P, Schwebel C, Maubon D, Vesin A, Lebeau B, Foroni L, et al. Antifungal use influences Candida species
distribution and susceptibility in the intensive care unit. J Antimicrob Chemother. 2011; 66(12): 2880-6.
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RC02
Journée de la Recherche Médicale 2014
Influence du site d’insertion du cordon ombilical
dans l’achèvement du potentiel de croissance
des nouveau-nés issus de grossesses uniques
au CHU de Grenoble.
Sophie Brouillet1,2,3,*, Anaïs Dufour1,*, Fabien Prot1, Jean-Jacques Feige2,3,
Véronique Equy1, Nadia Alfaidy2,3, and Pascale Hoffmann1,2,3
sbrouillet@chu-grenoble.fr
* Sophie Brouillet et Anais Dufour ont participé équitablement à ce travail.
Gynécologie-Obstétrique et centre d’Assistance Médicale à la Procréation, CHU de Grenoble, France.
2
Université Joseph Fourier (UJF), Grenoble 1, France.
3
Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1036 (INSERM U1036), laboratoire Biologie
du Cancer et de l’Infection (BCI), Commissariat à l’Energie Atomique (CEA), Grenoble cedex 9, France.
1
Intérêt et cadre de la recherche — La prise en charge pré- et post-natale du retard de
croissance intra-utérin (RCIU) représente encore un des challenges principaux en
périnatalogie. Théoriquement, le retard de croissance intra-utérin (RCIU) touche tous les
fœtus qui n'atteignent pas leur plein potentiel génétique de croissance. L'identification des
enfants présentant une anomalie de croissance intra-utérine reste problématique, en raison
de l'aspect multifactoriel (facteurs génétiques, maternels, et/ou obstétricaux) de la croissance
fœtale d'une part, et de la définition statistique de cette anomalie d'autre part (généralement
<10ème percentile ou sévère < 3ème percentile).
Objectif scientifique — Le but de l’étude était d’étudier l’association entre le site d’insertion
du cordon ombilical sur le disque placentaire et l’achèvement du potentiel de croissance des
nouveau-nés issus de grossesses uniques.
Méthodes — Une étude de cohorte rétrospective portant sur 528 naissances à terme issues
de grossesses uniques entre août et décembre 2006 au CHU de Grenoble a été réalisée. Les
naissances ont été réparties en deux groupes : « insertion normale du cordon ombilical » avec
une localisation <3 cm du centre du disque placentaire, et « insertion excentrée du cordon
ombilical » pour une localisation ≥ 3 cm du centre du disque placentaire. Le critère de
jugement principal a été l’estimation de la croissance fœtale par le module AUDIPOG. Cette
modélisation permet de déterminer la limite individuelle de poids en dessous de laquelle
chaque nouveau né doit être considéré comme ayant subi une "Restriction de Croissance
Fœtale en Poids" (RsCP). Les critères pris en compte pour cette modélisation sont l'âge
gestationnel, le sexe, le poids, la taille, et le rang de naissance de l'enfant ainsi que l’âge, la
taille et le poids de la mère. Les critères de jugements secondaires ont été le poids à la
naissance, le tabagisme maternel, et les pathologies de la grossesse. Les analyses statistiques
ont été réalisées avec le test du Chi-2 et le test t de Student.
Résultats — Sur les 528 naissances, 343 placentas présentaient une insertion normale et
185 placentas possédaient une insertion excentrée du cordon ombilical. Il y avait une
augmentation significative de la RsCP dans le groupe « insertion excentrée du cordon
ombilical » en comparaison au groupe « insertion normale du cordon ombilical », avec 8.1%
versus 1.5 % de RsCP respectivement (p<0.001). De plus, le poids de naissance était diminué
(avec 3195±460 grammes versus 3433±376 grammes, p<0.001) et le tabagisme maternel
était augmenté d’un facteur 2 (avec 20.2% versus 9.9%, p=0.0012) dans le groupe
« insertion excentrée du cordon ombilical » en comparaison au groupe « insertion normale du
cordon ombilical ». Aucune différence dans l’incidence des pathologies de la grossesse n’a été
mise en évidence.
Conclusion — Nos résultats montrent une augmentation significative de l’incidence de la
RsCP des nouveau-nés issus d’une grossesse unique lorsque le cordon ombilical présente une
insertion excentrée sur le placenta. Ces données confirment la nécessité de l’examen du
placenta à la naissance pour documenter le diagnostic étiologique du RCIU et soulève l’intérêt
d’une surveillance accrue de la croissance fœtale lors de la mise en évidence d’une insertion
anormale du cordon pendant la grossesse par échographie Doppler.
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RC03
Journée de la Recherche Médicale 2014
Apport du scanner cardiaque dans
les procédures d’implantations percutanées
de valve aortique
Charlotte Casset, MD,* † Adrien Jankowski MD, *‡ Bernard Bertrand MD,*† Mathieu Rodiere MD,* ‡
Gilbert Ferretti, MD, PhD,*‡ Olivier Chavanon MD, PhD,*† Daniel Fagret MD, PhD,*‡† Jean Philippe
Baguet MD, PhD,*† Gérald Vanzetto MD, PhD,*† Gilles Barone-Rochette MD, PhD,*†
* Clinique Universitaire de Cardiologie ,Grenoble, France
† INSERM U1039, Radiopharmaceutiques Biocliniques, Grenoble, France
‡Clinique Universitaire de Radiologie et Imagerie Médicale, Grenoble, France
Introduction
L’implantation de valve aortique par voie percutanée (TAVI) est maintenant le gold standard
dans la prise en charge des patients porteurs d’un rétrécissement aortique serré (RAS) à haut
risque chirurgical. Le scanner cardiaque (CT) semble apporter des informations
complémentaires à l’échographie dans le choix de la taille de la prothèse aortique.
Matériel et méthodes
Cette étude prospective, monocentrique, a inclus des patients porteurs d’un RAS ayant
bénéficié d’un TAVI de mai 2011 à avril 2013. Deux stratégies de « sizing » de prothèse ont
été comparées : la première basée sur l’échocardiographie trans-thoracique et transoesophagienne (groupe échographie), la deuxième s’appuyant en plus sur les résultats du CT
(groupe CT). Le critère principal de jugement était composite comprenant la survenue de
décès, d’insuffisance aortique sévère (IAS), de complication vasculaire et d’accident vasculaire
cérébral au cours du suivi.
Résultats
Vingt-sept patients ont été inclus dans le groupe CT et 43 dans le groupe échographie.
Aucune différence sur les caractéristiques de bases des populations n’a été identifiée. Sur un
suivi moyen de 1 an, 18 patients ont présenté le critère primaire (35% des patients groupe
échographie vs.11% groupe CT p=0.04) avec une prévalence d’IAS plus haute dans le groupe
échographie (16 vs. 0% p=0,03). L’analyse Kaplan-Meier révèle une association péjorative à
la non réalisation du CT (Chi2 = 6,78 p = 0,01). L’analyse de Cox en univariée et multivariée
identifie la réalisation d’un CT (hasard ratio [HR]:0.22, 95% ; intervalle de confiance (IC) 0,06
to 0,809 ; p<0.02), et un antécédent de syncope (HR:3,9 ; 95% IC:1,37 to 11 p<0.01)
comme les seuls prédicteurs indépendants du critère primaire.
Conclusion
L’utilisation du CT dans la stratégie de sizing du TAVI permet de réduire la survenue
d’évènements cardio-vasculaires à long terme.
Mots clés : Valve aortique percutanée, sténose aortique sévère, scanner cardiaque,
insuffisance aortique
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RC04
Journée de la Recherche Médicale 2014
Profils morphologique et neuropsychologique
des patients suspects de maladie d’Alzheimer
Chapuis Pierre1, M Sauvée2, M Medici3, A Serra2, E Banciu1,
A Moreau-Gaudry3, O Moreaud2, A Krainik1,4
8 allée du Château, 38240 Meylan
pchapuis@chu-grenoble.fr
1
Clinique universitaire de neuroradiologie et IRM, CHU de Grenoble, responsable : Pr.A Krainik
2
Service de neurologie, CHU de Grenoble, 3Centre d’Innovation technologique 803, CHU de
Grenoble, 4INSERM U 836, CHU de Grenoble
Intérêt et cadre de la recherche
Outre une atrophie hippocampique1, les patients suspects de troubles cognitifs légers (MCI-a)
ou de maladie d’Alzheimer (MA) peuvent présenter des anomalies pariétales2,3,4,5. Parmi ces
patients, une meilleure caractérisation structurale et neuropsychologique pourrait permettre
d’identifier des sous-groupes.
Objectifs scientifiques
- Identifier des sous groupes morphologiques de patients suspects de MA ou de MCI-a
- Caractériser les profils neuropsychologiques de chaque sous-groupe.
Méthodes
145 patients suspects de MA (critères NIA-AA)6,7, quel que soit le stade de la démence, ou
MCI-a, ont bénéficié d’une IRM morphologique. Tous les examens ont été relus, en aveugle, à
2 reprises, par 3 radiologies et 2 neurologues. La microangiopathie (score de Fazekas
simplifié : 0-3), l’atrophie hippocampique (score de Scheltens : 0-4), l’atrophie pariétale
(score de Koedam : 0-3), et le gradient d’atrophie fronto-pariétal (GAFP : -2 à +3) ont été
évalués. Une analyse à composantes multiples (ACM) suivie d’une classification hiérarchique
ascendante ont été conduites pour identifier des sous-groupes morphologiques distincts. Une
analyse univariée et multivariée a été réalisée sur les 76 patients ayant des données
neuropsychologiques complètes à la recherche d’une corrélation clinique et morphologique.
Résultats
La reproductibilité inter et intra observateur étaient excellentes pour les scores de Fazekas et
Scheltens. Elles étaient meilleures pour le GAFP que le score de Koedam.
L’ACM sans a priori identifiait 3 groupes : le groupe 1 était caractérisé par peu ou pas de
microangiopathie (Fazekas≤1), une atrophie hippocampique sévère (Scheltens=4), une
atrophie pariétale sévère (GAFP≥2; Koedam≥2); Le groupe 2 avait une microangiopathie
(Fazekas≥2) et une atrophie hippocampique sévère (Scheltens=3), pas d’atrophie pariétale
(GAFP≤0; Koedam≤1). Le groupe 3 avait une atrophie hippocampique faible (Scheltens ≤ 2)
et une faible atrophie pariétale (GAFP=1; Koedam<2).
Dans le groupe 1, et contrairement au groupe2, les fonctions exécutives et l’empan inverse
relatif à la mémoire de travail, notamment, étaient préservés (p=0.01). Le groupe 3 avait
uniquement une altération de la mémoire de travail.
Conclusion
L’évaluation combinée de la microangiopathie, de l’atrophie pariétale, hippocampique, et du
gradient d’atrophie fronto-pariétal permet d’identifier des sous-groupes morphologiques parmi
les patients suspects de MA ou à risque. Ces sous groupes sont différents sur le plan
neuropsychologique. Ces résultats suggèrent différents mécanismes physiopathologiques.
Références : [1] Scheltens, JNNP 1992; [2] Du et al. Brain 2007; [3] Du et al., Neurology
2006; [4] Boehnen et al., J Nucl Med 2012; [5] Koedam et al.,
Eur Radiol 2011 ; [6] McKhann
et al., Alzheimers Dement 2011; [7] Albert et al., Alzheimers Dement 2011.
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RC05
Journée de la Recherche Médicale 2014
Etude EEG des mécanismes de la stimulation
cérébrale profonde chez les TOCs sévères
Astrid Kibleur, Guillaume Gras-Combe, Damien Benis, Julien Bastin , Thierry Bougerol,
Stéphan Chabardès, Mircea Polosan, Olivier David
Contact email: astrid.kibleur@gmail.com
Equipe 11 de l’Institut des Neurosciences de Grenoble : Fonctions cérébrales et neuromodulation
(responsable : O. David)
Chemin Fortuné Ferrini 38706 La Tronche
La stimulation cérébrale profonde (SCP) du noyau subthalamique (STN) est utilisée pour
traiter les troubles obsessionnels compulsifs (TOC) sévères résistants aux traitements
conventionnels. La SCP est un traitement efficace des troubles du mouvement (Parkinson
particulièrement) et son application aux maladies psychiatriques réfractaires est en plein
développement1.
Dans cette étude, nous avons cherché à évaluer par EEG l’impact de la SCP sur les
neurocircuits de l’inhibition motrice suspectés d’être altérés chez les patients TOCs et au sein
desquels le STN joue un rôle central2.
Pour cela, nous avons fait passer une tâche de Stop Signal (SST) à 9 patients en enregistrant
simultanément leur EEG à haute résolution (96 électrodes actives, sur la plateforme recherche
du CHU) avec la SCP ON et OFF en double aveugle. Après prétraitement des signaux (filtrage
entre 1 et 30 Hz, échantillonnage à 250 Hz, décomposition en éléments indépendants pour
supprimer sélectivement les composantes liées aux artefacts oculaires), nous avons étudié les
potentiels évoqués (PE) centrés sur la présentation des stimuli stops. Dans la SST, le sujet
doit répondre (cliquer) le plus vite possible quand on lui présente un stimulus Go qui est suivi
dans ¼ des cas par un stimulus Stop (SS) qui lui demande de retenir son action. Nous avons
supprimé les composantes du signal liées au processus Go pour étudier spécifiquement le
processus de l’inhibition réactive. Enfin, nous avons reconstruit les réseaux corticaux
correspondant à l’inhibition en utilisant une technique de localisation de sources EEG.
Nous avons montré que l’onde P300, un PE fronto-central maximal autours de 300ms post SS,
est modulée fortement par la SCP et la réussite ou non à l’inhibition. Elle était moins puissante
et retardée en ON par rapport à OFF et pendant les Stop ratés par rapport aux Stop réussis.
Ce résultat a été confirmé par les données comportementales qui montraient des temps de
réaction de l’inhibition (SSRT) plus grands en ON, ce qui indique une moins bonne
performance à l’inhibition. En comparant les sources corticales correspondant aux différentes
conditions expérimentales, nous avons mis en évidence une modulation des circuits de
l’inhibition par la SCP. En effet, les zones activées suite à la présentation des SS étaient
notamment situées dans l’aire prémotrice et le gyrus inférieur droit, deux zones activées
systématiquement dans la SST. En contrastant les conditions ON et OFF, ces mêmes aires
sont activées (p<0.05). Pour le contraste ON-OFF, à la latence de la P300 le gyrus frontal
inférieur droit ressort alors que l’aire prémotrice ressort en bilatéral pour le contraste OFF-ON
à la même latence.
Cette étude, complétée par des comparaisons de modèles causaux dynamiques de l’inhibition
nous a permis de préciser comment la SCP du STN module la connectivité des réseaux
corticaux impliqués dans l’inhibition motrice, suggérant l’optimisation du contrôle cognitif de
l’inhibition motrice comme l’un des mécanismes d’action potentiels de la SCP du STN dans les
TOC.
1
Chabardès, S. (2013), 'Deep brain stimulation for obsessive-compulsive
subthalamic nucleus target', World Neurosurgery, vol. 80, no. 3–4, pp. S31.e1–8.
2
disorder:
Benis, D. (2013), 'Subthalamic nucleus activity dissociates proactive and reactive inhibition in
patients with Parkinson’ s disease', NeuroImage.
P a g e | 15
RC06
Journée de la Recherche Médicale 2014
Transplantation d’îlots de Langerhans au sein
du réseau GRAGIL : données à 5 ans
Sandrine Lablanche1, Sophie Borot, Olivier Thaunat, Francois Bayle, Lionel Badet,
Emmanuel Morelon, Charles Thivolet, Anne Wojtusciszyn, Luc Frimat8, Laurence Kessler,
Alfred Penfornis, Coralie Brault, Cyrille Colin, Domenico Bosco, Thierry Berney et Pierre-Yves
Benhamou1 au nom du réseau GRAGIL
1
Clinqiue d’Endocrinologie – Diabétologie – Pôle DIGIDUNE - CHU Grenoble, 2CHU Jean Minjoz, Service
d’Endocrinologie-Métabolisme et Diabétologie-Nutrition, Besançon,3Hospices Civils de Lyon, Service de Néphrologie
Médecine de la Transplantation et Immunologie clinique, 4Department de Nephrologie, Pôle DigiDune, Grenoble
5
Hospices Civils de Lyon, Service d’Urologie et de Chirurgie de la Transplantation, Pôle Chirurgie, 6Hospices Civils de
Lyon, Service d’Endocrinologie Diabète Nutrition, 7CHU de Montpellier, Pôle Rein Hypertension Métabolisme, Service
d’Endocrinologie, 8CHU de Nancy, Service de Néphrologie,9Hôpitaux Universitaires de Strasbourg, Service
d’Endocrinologie Diabète et Maladies Métaboliques, Pôle NUDE,10Hospices Civils de Lyon, Pôle Information Médicale
Evaluation Recherche
Contexte scientifique : La transplantation d’îlots de Langerhans est une technique innovante
de thérapie cellulaire s’adressant aux patients diabétiques de type 1 porteur d’un diabète
instable ou ayant bénéficié d’une greffe de rein.
Objectifs de l’étude : Evaluer l’efficacité et la sécurité à 5 ans de la transplantation d’îlots de
Langerhans au sein du réseau GRAGIL.
Méthodes : Etude rétrospective analysant l’efficacité métabolique (HbA1c, correction des
hypoglycémies, insulino-indépendance, dose d’insuline), la survie du greffon et la sécurité à 5
ans de la transplantation d’îlots de Langerhans au sein de la cohorte de patients diabétiques
de type 1 transplantés dans le cadre du réseau GRAGIL entre 2003-2011.
Résultats : 44 patients ont bénéficié d’une transplantation d’îlots entre Septembre 2003 et
Avril 2011. 24 patients (54.5%) ont reçu une transplantation d’îlots seule (ITA) et 20 patients
(45.5%) ont reçu une transplantation d’îlots après une greffe de rein (IAK). L’âge moyen des
receveurs est de 46 ans (42-55) et l’ancienneté de diabète de 33 ans (26-27). Le nombre
moyen d’injection d’îlots est de 1,9 par patient. La quantité moyenne d’îlots administrée est
de 340 200 (279 000-427 000) IEQ/infusion, l’index de stimulation est mesuré à 1.9 (1.2-2.3)
et la viabilité des îlots de 92 % (81-91). Un an et 5 ans après la transplantation d’îlots, 80%
et 65% des receveurs atteignent une HbA1c <7% ou une baisse d’HbA1C > 2% vs. seulement
9% avant la transplantation (p<0.05). 41/43 patients (95%) et 19/21 patients (90.4%) des
patients ne décrivent plus d’hypoglycémies sévères un an et cinq ans après la transplantation
vs. 18/44 (40.9%) avant la transplantation (p<0.05). 35/43 (81.4%) et 13/21 (62%) patients
ont un greffon d’îlots fonctionnel un an et 5 ans après la transplantation. Les doses d’insuline
utilisées par les receveurs est de 0.15 (0-0.21) UI/kg et 0.19 (0-26) UI/kg un an et 5 ans
après la transplantation vs. 0.5 (0.42-0.58) UI/kg avant la transplantation d’îlots (p<0.05).
23/44 patients (52%) connaissent une période d’insulino-indépendance avec une durée
médiane d’insulino-indépendance de 18 mois (2-60). Aucun décès n’est à déplorer pendant la
période d’analyse. 29/44 (65%) patients décrivent la survenue d’au moins un évènement
indésirable pendant les 5 ans de suivi. 18/55 (32%) des évènements indésirables sont
possiblement imputables au traitement immunosuppresseur, 10/55 (18%) sont reliés à
l’injection d’îlots. Concernant la sévérité des évènements indésirables, 14% sont mineurs, 9%
modérés, 67% sévères and 9% menaçant le pronostic vital. Sur 5 ans, les patients
transplantés d’îlots ont été hospitalisés 35.25 jours en moyenne. 9.1% patients (4/44)
totalisent 52% des jours d’hospitalisation (807/1551).
Conclusion : La transplantation d’îlots est une technique efficace offrant aux receveurs une
amélioration notable et durable de l’équilibre métabolique en termes de réduction de l’HbA1c
et de réduction des hypoglycémies sévères à long terme.
P a g e | 16
Journée de la Recherche Médicale 2014
Recherche Fondamentale (RF 01 à RF 06) P a g e | 17
RF01
Journée de la Recherche Médicale 2014
Etude de la réaction inflammatoire dans un
modèle murin d’intoxication par un pesticide
organophosphoré.
Nom des auteurs : Baccus Benjamin (EDCSV), Testylier Guy, Depaulis Antoine, Dorandeu Frédéric
Laboratoires : Grenoble institut des neurosciences – Inserm U836 – UJF,
Institut de recherche biomédicale des armées – Service de santé des armées – Ministère de la défense
Coordonnées : Benjamin Baccus
Grenoble institut des neurosciences – BAT E Saffra – Equipe 09 – 38700 LA TRONCHE
benjamin.baccus@irba.fr
Les composés organophosphorés (OP) se subdivisent en agents létaux (neurotoxiques OP ou
NOP) et en agents phytosanitaires (pesticides OP ou OPP). Les OPP sont impliqués dans
plusieurs millions d’intoxications par an dans le monde à l’origine de plus de 300.000 décès
[1]. La menace d’une utilisation détournée ou d’une exposition accidentelle à des OPP
nécessite de mieux connaître les mécanismes physiopathologiques aigus et chroniques des
intoxications par ces agents chimiques.
Les OP ont une action neurotoxique à la fois sur le système nerveux central et périphérique
par inhibition d’une enzyme (l’acétylcholinestérase) dégradant un neurotransmetteur
(l’acétylcholine). La gravité de la symptomatologie centrale repose sur l’hypercholinergie
initiale pouvant induire une crise comitiale et évoluer vers un état de mal [2].
A ce jour, ces mécanismes ont été essentiellement étudiés sans prendre en compte le
contexte dans lequel intervient l’intoxication. En particulier l’influence de la réaction
inflammatoire sur la réponse du système nerveux central aux OPP n’a pas été étudiée. De
nombreuses activités ou pathologies peuvent moduler la réaction inflammatoire et sont
susceptibles de modifier la réponse au neurotoxique : stress, sommeil [3], activité physique,
infection, etc.
Nous nous sommes intéressés à l’évolution de la réaction inflammatoire qui succède 1) à une
intoxication par un OPP à dose convulsivante, 2) à une privation aigüe totale de sommeil chez
la souris congénitale C57Bl/6. Notre travail comprend une étude immunohistochimique de la
réaction des cellules gliales (GFAP, Iba1) et une étude de la cinétique de protéines
inflammatoires (IL-1b, IL-6, TNF-a, TGFb) dans les suites de l’intoxication et de la privation de
sommeil. Nous souhaitons caractériser la réaction inflammatoire qui succède à ces 2
agressions afin d’évaluer l’influence de la privation de sommeil sur la réponse centrale au
toxique dans ce modèle expérimental murin.
Notre projet scientifique a pour ambition de mieux comprendre les mécanismes
physiopathologiques de l’intoxication par un OPP en prenant en compte le contexte
inflammatoire. Les résultats obtenus, toute réserve gardée, pourraient nous permettre
d’optimiser la prise en charge médicale de ces intoxications chez l’homme, pour qui une telle
étude ne peut éthiquement être envisagée.
[1]. Gunnell D, Eddleston M, Phillips MR, Konradsen F. The global distribution of fatal pesticide
self-poisoning: systematic review. BMC Public Health 2007; 7: 357.
[2]. Masson P. Evolution of and perspectives on therapeutic approaches to nerve agent
poisoning Toxicology Letters 206 (2011) 5–13.
[3]. Mullington JM, Haack M, Toth M, Serrador JM, Meier-Ewert HK. Cardiovascular,
inflammatory, and metabolic consequences of sleep deprivation. Prog Cardiovasc Dis.
2009;51:294–302.
P a g e | 19
RF02
Journée de la Recherche Médicale 2014
Effets de l'érythropoïétine carbamylée (CEPO)
sur l'expression de l'aquaporine 4
dans un modèle d'œdème cérébral
après traumatisme crânien chez le rat.
Perrine Boucheix, Anne Millet, Clotilde Schilte, Pierre Bouzat, Yvonnick Boué
Emmanuel Barbier, Samuel Valable, Myriam Bernaudin, Jean-François Payen.
Coordonnées du laboratoire : GIN Grenoble Institut des Neurosciences (Equipe 5)
Responsable : Emmanuel Barbier - Site Santé –La Tronche
Inserm U836 - UJF – CEA - CHU
Contact: Perrine Boucheix PBoucheix@chu-grenoble.fr
Pôle Anesthésie Réanimation CHU de Grenoble 1er étage CS 10217 38043 Grenoble cedex 9
Intérêt et cadre de la recherche: L’érythropoïétine carbamylée (CEPO), dénuée d’effets
hématologiques délétères, possède des propriétés neuroprotectrices anti-œdémateuses (d'action
méconnue) dans les modèles de traumatisme crânien (TC). L’aquaporine 4 (AQP4) est une protéine
cérébrale, tel un canal à eau, présente au niveau de la barrière hémato-encéphalique. Son rôle dans
la genèse et l’évacuation de l’œdème cérébral (OC) est à l’étude et controversé.
Objectif scientifique: Nous formulons l'hypothèse que l’effet anti-œdémateux de la CEPO
pourrait être médié par une modulation de l’expression et de la localisation des AQP4. L’objectif de
notre étude était d’analyser l’OC en IRM de diffusion par comparaison des variations d’ADC
(coefficient apparent de diffusion) et d’étudier l'expression des AQP4 en RT-PCR et en
immunofluorescence (IF) à H2.
Méthodes: 5 groupes de rats Wistar mâles ont été anesthésiés et inclus dans un modèle de TC
diffus (de type impact accélération). Les animaux recevaient 30 minutes après le TC : de la CEPO à
la dose de 50μg/kg, ou du sérum physiologique (TC saline), ou un inhibiteur des AQP4, le PMA
(phorbol 12-myristate 13-acétate) à la dose de 200μg/kg/2heures ou son véhicule le DMSO
(diméthylsulfoxide). Le groupe Sham n'avait pas de TC (contrôle). Les rats bénéficiaient d’une IRM
pré-TC, à H1, H2 et étaient sacrifiés et leur cerveau extrait. 3 expérimentations étaient conduites.
Résultats: 1) Analyse de l’OC en IRM de diffusion (n=39 rats)
La comparaison de l’ADC entre l’IRM pré-TC et à H2 (∆ ADC)
montrait un œdème: diminution de l’ADC dans le groupe TC saline
(∆ ADC -7,74%±2,7) vs Sham (0,26%±3,4) P<0,01, la réduction
de l’œdème dans le groupe TC CEPO (∆ ADC -1,47%±2,2) P<0,01,
et la majoration de l’OC dans le groupe inhibiteur des AQP4 : TC
PMA (-7,69%±3,6) vs TC DMSO (-0,65%±5,9) P=0,01 (Fig 1).
2) Expression des AQP4 en RT-PCR à H2 post-TC (n=35)
On notait une tendance à l’augmentation de l’expression de l’ARNm
dans le groupe TC saline vs Sham, et encore plus importante dans
le groupe TC CEPO vs Sham (P=0,07). Le PMA inhibait l’expression
des AQP4 (P=0,05).
3) Expression et localisation des AQP4 en IF à H2 post TC (n=28).
On observait l’apparition d’un immunomarquage AQP4 au niveau
capillaire dans les groupes TC, non présent chez les Sham, et une
augmentation du marquage chez les TC CEPO par rapport aux TC
saline (Fig 2). Aucun marquage n'était observé chez les TC PMA. Le
marquage vasculaire était inchangé (anticorps anti endothélial
2
*
**
***
0
Fig.1 Delta
ADC à H2
‐2
Sham
TBI saline
TBI CEPO
TBI PMA
TBI DMSO
‐4
‐6
‐8
‐10
‐12
Fig.2 Immuno‐marquage
AQP4
TC saline
Sham
TC CEPO
Barre d’échelle 100 μm
TC PMA
Conclusions: La CEPO pourrait diminuer l’œdème post-TC (en IRM)
grâce à une augmentation de l’expression des AQP4 (observée en RT-PCR et en IF).
Cela pourrait s’accompagner d’une relocalisation des AQP4 au plus près de la barrière hématoencéphalique le long des pieds astrocytaires et favoriserait ainsi la sortie de l’eau des cellules.
Ce travail sera complété en IF par un co-marquage vasculaire, AQP4 et astrocytaire (en cours).
Références : Bouzat P, Millet A et al. Changes in brain tissue oxygenation after treatment of diffuse
traumatic brain injury by erythropoietin. Crit Care Med 2013;41:1316-1324.
Bouzat P, Francony G et al. Reduced brain edema and functional deficits after treatment of diffuse
traumatic brain injury by carbamylated EPO derivative. Crit Care Med.2011;39:2099-2105.
P a g e | 20
RF03
Journée de la Recherche Médicale 2014
MicroARNs et toxoplasmose chronique :
induction spécifique de miR-146a et miR-155
dans le cerveau de l'hôte1
D. Cannella1*, M.P. Brenier-Pinchart1*, L. Braun1, J.M. van Rooyen1, A. Bougdour1, O. Bastien2,
M.S. Behnke3, R.L. Bertini1, A. Curt1, J.P.J. Saeij4, D.L. Sibley3, H. Pelloux1, M.A. Hakimi1
1
Epigénétique et Parasites, LAPM, CNRS/UJF UMR 5163, Grenoble
2
UMR 5168, CNRS/INRA, UJF, CEA, Grenoble
3
Washinghton Univeristy School of Medicine, St Louis, USA
4
Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, USA
* Contributions équivalentes des 2 premiers auteurs,
MPBrenierPinchart@chu-grenoble.fr
En Europe, 90% des souches de Toxoplasma gondii isolée au cours de la toxoplasmose
humaine appartiennent à un seul génotype (II). Le polymorphisme de deux protéines
parasitaires sécrétées dans la cellule, ROP16 et GRA15, explique en partie certaines
particularités observées entre les trois principaux génotypes.
L’infection par T. gondii est associée à une augmentation de 15% des ARNm de la cellule hôte
et l’expression de nombreuses protéines cellulaires est modulée par ce protozoaire
intracellulaire. Comment le parasite manipule-t-il sa cellule hôte au niveau moléculaire? Notre
hypothèse de travail fut que la réorganisation par le parasite de son environnement
impliquerait les microARNs de la cellule hôte infectée.2 Ces microARNs constituent de
véritables réseaux de ribo-régulateurs post-transcriptionnels.
La subversion du microRNome de la cellule hôte par T. gondii
L’étude des profils des microARNs de la cellule hôte (Exiqon) a initialement permis de
constater des variations de leur niveau après infection par T. gondii. En comparant les profils
de microARNs après une infection par la souche de type I (RH) ou II (ME49), nous avons
montré des différences significatives de l’expression/stabilité de plusieurs microARNs et ce
différentiellement entre ces génotypes. Ainsi, plusieurs microARNs immuno-modulateurs, dont
miR-146a et miR-155, ont été identifiés et plus spécifiquement étudiés par Northern blot puis
quantifiés par qRT-PCR (Taqman) après infection par les parasites des 3 principaux génotypes
et par Neospora caninum, un proche cousin de T. gondii, dans différents modèles cellulaires.
Seul les parasites du génotype II induisent miR-146a, alors que miR-155 est augmenté après
l’infection par les 3 génotypes. L'infection par ces souches de type II interfère directement au
niveau transcriptionnel avec une augmentation du précurseur de miR-146a ( pri-miR-146a).
miR-146a : une régulation génotype-spécifique par la kinase parasitaire ROP16
L'infection in vivo et in vitro par de nombreuses progénies, souches issues du croisement
génétique des 3 génotypes canoniques (IxII et IIxIII), nous ont permis de montrer que miR146a est médié par la kinase ROP16 sécrétée par les rhoptries. Ces résultats ont été
confirmés par génétique inverse: l'allèle ROP16 des souches de type I est un répresseur de
l'expression de miR-146a et son absence conduit à une induction du miR-146a.
miR-146a et miR-155 : biomarqueurs de toxoplasmose chronique murine
En modèle murin sensible à l'infection (C57BL/6), la délétion de miR-146a a été associée à un
meilleur contrôle de la charge parasitaire cérébrale et à un allongement de la survie des souris
miR-146a-/-. Par ailleurs, dans un modèle de souris résistante, après infection par des
souches de type II à l'origine d'une toxoplasmose chronique, miR-146 et miR-155 sont coinduits dans le cerveau alors que l’expression des autres microARNs étudiés ne varie pas. Ces
microARNs représentent donc de véritables biomarqueurs cérébraux d’une infection chronique
asymptomatique chez la souris. Quelle pourrait être la conséquence de cette «empreinte
microARN» chez l'hôte chroniquement infecté, c'est à dire 45 % de la population française?
1
Cannella D, Brenier-Pinchart MP, Braun L, van Rooyen JM, Bougdour A, Bastien O, Behnke MS, Curt RL, Curt A, Saeij JP, Sibley LD, Pelloux H, Hakimi MA.
miR-146a and miR-155 delineate a MicroRNA fingerprint associated with Toxoplasma persistence in the host brain. Cell Rep. 2014; 6: 928-937.
2
Hakimi MA, Cannella D. Apicomplexan parasites and subversion of the host cell microRNA pathway. Trends Parasitol. 2011; 27: 481-486.
P a g e | 21
RF04
Journée de la Recherche Médicale 2014
Nouveaux composés bis-indoliques de synthèse
actifs vis-à-vis de Francisella tularensis
subspecies holarctica
1
Yvan Caspar,1,2# Vivien Sutera,1,2 Jean-Noël Denis,3 Max Maurin 1,2
CNR Francisella, Laboratoire de bactériologie, Institut de Biologie et Pathologie, CHU de Grenoble
2
Univ. Grenoble Alpes, LAPM, F-38000 Grenoble, France
CNRS, LAPM, F-38000 Grenoble, France
3
Univ. Grenoble Alpes, DCM, F-38000 Grenoble, France
CNRS, DCM, F-38000 Grenoble, France,
#
YCaspar@chu-grenoble.fr
La tularémie est une zoonose dont l’agent pathogène est un petit bacille à Gram négatif,
Francisella tularensis, qui conduit chez l’homme à des infections sévères voire
occasionnellement létales. Cette bactérie est classée comme agent pathogène de catégorie A
par le CDC. Peu de classes d’antibiotiques sont utilisées dans le traitement de la tularémie :
les aminosides (gentamicine et streptomycine), les fluoroquinolones (ex : ciprofloxacine) et
les tétracyclines (doxycycline). Cependant, malgré l’administration d’une antibiothérapie
appropriée, les échecs thérapeutiques ainsi que les rechutes restent fréquents, notamment
lorsque l’instauration du traitement est retardée. Par ailleurs, des souches de Francisella
tularensis résistantes à ces antibiotiques peuvent être facilement sélectionnées in vitro. Notre
objectif étant de trouver de nouvelles alternatives thérapeutiques, nous avons évalué l’activité
de nouveaux composés bis-indoliques de synthèse vis-à-vis de F. tularensis subsp. holarctica.
Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) de 4 composés bis-indoliques (dcm01,
dcm02, dcm03 et dcm04) ont été déterminées par la technique de référence de microdilution
en milieu liquide selon les recommandations du CLSI. Nous avons testé 41 souches cliniques
(Ft1 à Ft41) de F. tularensis subsp. holarctica isolées et identifiées au Centre National de
Référence de la tularémie (CHU de Grenoble) entre 2006 et 2013. Nous avons également
inclus dans nos essais les souches de référence de F. tularensis subsp. novicida CIP56.12, F.
philomiragia ATCC25015 ainsi que la souche de virulence atténuée F. tularensis subsp.
holarctica LVS. Les concentrations minimales bactéricides (CMB) ont été déterminées pour les
composés dcm02 et dcm04 sur trois souches (Ft6, Ft24 et LVS) en évaluant en parallèle la
gentamicine et la doxycycline, pris respectivement comme témoin d’activité bactéricide ou
bactériostatique. Enfin des courbes de survie bactérienne en fonction du temps ont été
réalisées pour ces trois mêmes souches vis-à-vis du composé dcm04.
Les CMI90 obtenues sont de 8 mg/L pour dcm01, dcm02 et dcm03 et de 2 mg/L pour
dcm04. Toutes les souches de F. tularensis subsp. holarctica testées étaient sensibles aux
composés dcm02 et dcm04 avec des CMI de l’ordre de 2 à 8 mg/L. Seule la souche Ft5 était
résistante aux composés dcm01 et dcm03 avec des CMI>32 mg/L. Cette différence d’activité
peut s’expliquer par la présence d’un large groupement chimique de type CH2NHBoc présent
dans la structure de dcm01 et dcm03, remplacé par une fonction méthyle dans dcm02 et
dcm04. A noter que l’activité de ces composés diffère en fonction des espèces et sous-espèces
de Francisella considérées. En effet, F. tularensis subsp. novicida était résistante aux 4
composés avec des CMI ≥ 32 mg/L et F. philomiragia était seulement sensible aux composés
dcm02 et dcm04 avec des CMI respectives de 16 et 4 mg/L. Enfin, la détermination des CMB
ainsi que les courbes de survie bactérienne ont révélé que les composés dcm02 et dcm04
étaient bactéricides vis-à-vis de la souche de F. tularensis subsp. holarctica LVS, mais
seulement bactériostatiques sur les souches Ft6 et Ft24.
En conclusion nous avons identifié de nouveaux composés bis-indoliques de synthèse
actifs vis-à-vis de F. tularensis subsp. holarctica, agent étiologique de la tularémie. Ces
composés représentent des candidats potentiels pour le développement de nouvelles
alternatives thérapeutiques de la tularémie. La cible bactérienne de ces composés reste à
déterminer.
P a g e | 22
RF05
Journée de la Recherche Médicale 2014
EG-VEGF (Endocrine gland-derived vascular
endothelial growth factor) controls placental
hematopoietic differentiation
during early pregnancy
Garnier V1,2, Sergent F1, Souyri M, Petit L, Zhou QY, Balboni G, ,
Hoffmann P3, Feige JJ1, and Alfaidy N1
Vanessa.garnier@cea.fr
1
Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale U1036 (INSERM U1036), laboratoire Biologie
du Cancer et de l’Infection (BCI), Commissariat à l’Energie Atomique (CEA), Grenoble cedex 9, France.
2
Université Joseph Fourier (UJF), Grenoble 1, France.
3
Gynécologie-Obstétrique et centre d’Assistance Médicale à la Procréation, CHU de Grenoble, France.
Objectives: Recent studies have shown that human and mouse placentas are not only niches
for hematopoietic stem cells, but constitute proper sites of their generation. Nevertheless, to
date little is known about local regulators of these processes. We have recently shown that
EG-VEGF is a new angiogenic factor, produced by the placenta and acts locally via its
receptors PROKR1 and PROKR2 to control placental development during early pregnancy.
Interestingly, EG-VEGF has a peak of expression that precedes the launch of the
hematopoietic differentiation. We hypothesized that EG-VEGF might control hematopoietic cell
differentiation.
Methods: Both human (in vitro studies) and mouse (in vivo studies) placentas were used. In
the mouse, two approaches were employed; EG-VEGF was either over expressed from day 7.5
post coïtum (dpc) to day 12.5 dpc using osmotic pumps, or antagonized upon injections of
PROKR1 and PROKR2 antagonist from day 4.5 to day 11.5 dpc. Mice were sacrified, placentas
collected and analyzed for the expression of hematopoietic and angiogenic markers, using the
flow cytometry, Western Blotting and immunofluorescence techniques. Human placentas were
collected from first trimester terminations of pregnancies and placental explants were treated
with EG-VEGF (25 ng/ml) for 24 hours.
Results: Our results show that in the mouse EG-VEGF significantly decreased placental
CD34/C-kit positive cells (hematopoietic progenitor cell marker). More importantly, we
demonstrated that simultaneous injection of PROKR1 and PROKR2 antagonists significantly
increased c-kit/CD34 positive cells. These finding were confirmed in the human placentas. EVVEGF effect on hematopoietic cell function was also examined. Preliminary results did not
show any significant difference. In addition, we investigated EG-VEGF effect on common
markers of endothelial cells as well as hemogenic cells, endothelial like cells that differentiate
to give rise to hematopoietic cells. We found that EG-VEGF significantly decreased VEcadherin/CD31 positive cells and CD34+/CD45- cells. These data demonstrate that EG-VEGF
negatively controls hematopoietic cell differentiation; however the sites of action of EG-VEGF
are still to be determined, as this could be at the endothelial and/or at the hemogenic level.
Conclusion: Altogether, these results demonstrate that EG-VEGF is a key endogenous and
local regulator of placental hematopoiesis and endothelial cells differentiation. Further studies
are ongoing to demonstrate the physiological significance of this process.
P a g e | 23
RF06
Journée de la Recherche Médicale 2014
Glycopolypeptide-based nanocarriers targeting
CD44 for lung cancer treatment
JEANNOT Victor1, MAZZAFERRO Silvia2, LAVAUD Jonathan1, JOSSERAND Véronique1,
GUIDETTI Mélanie1, HENRY Maxime1, SCHATZ Christophe2, LECOMMANDOUX Sebastien2,
COLL Jean-Luc1, HURBIN Amandine1
Ecole Doctorale Chimie Science du vivant
victor.jeannot@ujf-grenoble.fr
1
2
Centre de Recherche INSERM-UJF U823, équipe « Thérapie ciblée, diagostic précoce et
imagerie du cancer », Institut Albert Bonniot, BP 170, 38042 GRENOBLE Cedex 9
Directeur: COLL Jean-Luc
UMR CNRS 5629, Laboratoire de chimie des polymères organiques, 16 Av. Pey-Berland,
33607 Pessac
Directeur: LECOMMANDOUX Sébastien
Lung cancer is the leading cause of mortality by cancer in the world. There is an urgent need
to propose new therapeutic approaches in addition to conventional therapy. To be efficient
and to decrease side effects, treatments must reach specifically tumor cells. In this context,
this work aims to develop a new nanocarrier, able to reduce the toxicity of drug molecule
against healthy tissues and to control its release in time and space. The nanoparticles (Np) we
used here combine a biodegradable polypeptide (poly(γ-benzyl-L-glutammate)), and the
Hyaluronan (Hya), the natural ligand of the CD44 receptors upregulated on cancer cells.
The ability of Hya fragments with different molecular weights (5000 and 35000 Da), or Np
with different sizes (30 and 300 nm), to target the CD44 receptors was studied in vitro using
lung cancer cell lines (H358, H460, A549, H322), in which CD44 expression level was
measured. We investigated Hya and Np accumulation in tumor in vivo using an orthotopic
lung cancer model, after administration by systemic route (i.v. injections) or pulmonary route
(nebulization). We also analyzed the accumulation of an anti-CD44 antibody in vivo. Noninvasive optical imaging techniques (2D and 3D fluorescence) allowed the real time follow-up
of the Np in mice.
Binding of Hya fragments on cell lines was dose-dependent, with a higher affinity for the low
molecular weight Hya. Np bound lung cancer cells and were internalized at 37°C. This
interaction was partially dependent to CD44 expression level. In vivo, we observed a better
accumulation of the anti-CD44 antibody administered by nebulization, in tumor-bearing mice,
compared to healthy mice. In contrast, no specific accumulation of Hya or Np was observed in
tumors after nebulization. The nebulized Np showed long time retention in lungs. We observed
a higher accumulation of Np, but not Hya, in the lungs of tumor-bearing mice compared to
healthy mice, after i.v. injection.
We show that CD44 receptor is a pertinent target for lung cancer treatment. Despite the
promising results obtained after anti-CD44 antibody nebulization, this way of administration
seems less efficient to target tumor with Np. Our results will allow us to select the best Np
formulation to load anticancer drugs. We will then evaluate the potential antitumor activity of
drug-loaded Np using lung cancer model in mice.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Recherche Translat ionnel le (RT 01 à RT 06) P a g e | 25
Journée de la Recherche Médicale 2014
RT01
Peut-on améliorer son équilibre unipédique
grâce à l’utilisation du biofeedback auditif de
l’application Smartphone iBalance ?
1
Bouis J 1, Franco C 1, Mourcou Q 1,2, Fleury A 2, Diot N 1,3, Vuillerme N 1,4
Univ. Grenoble-Alpes, Laboratoire AGIM FRE 3405, CNRS-UJF-UPMF-EPHE, France
2
Univ. Lille Nord de France, F-59000 Lille & EMDouai, IA, F-59500 Douai, France
3
IDS, Montceau-les-Mines, France
4
Institut Universitaire de France, Paris, France
Intérêt et cadre de la recherche. Nous contrôlons notre équilibre postural grâce à
l'intégration de multiples informations sensorielles, de nature visuelle, somesthésique et
vestibulaire. Si une ou plusieurs de ces informations est absente ou perturbée, il peut se
produire un déséquilibre, voire une chute. Il est dans ce cas possible de compenser l’absence
ou l’altération de cette ou ces informations sensorielles par l’utilisation de dispositif de
suppléance perceptive ou biofeedback postural. C’est dans ce contexte que nous avons
développé l’application iBalance, entièrement intégrée dans un Smartphone (objet du
quotidien). Cette solution permet (1) la mesure en temps réel des inclinaisons du buste par
rapport à la verticale dans le plan frontal et dans le plan sagital, et (2) la conduite d’exercices
de rééducation posturale guidée par rétro-information (biofeedback). Cette rétro-information
peut être visuelle, auditive, tactile ou peut combiner ces différentes modalités sensorielles.
Objectif scientifique. L’objectif est de cette étude est d’évaluer si, et dans quelle mesure,
des personnes jeunes et en bonne santé sont capables d’utiliser efficacement le biofeedback
auditif de l’application Smartphone iBalance pour améliorer le contrôle d’une posture très
déstabilisante : la station unipodale en l’absence de repère visuel.
Méthodes. Sept jeunes adultes en bonne santé ont volontairement participé à cette étude. Ils
ont été testés dans une tâche posturale consistant à se tenir debout sur un pied, les yeux
fermés, le plus immobile possible. Cette tâche a été exécutée dans deux conditions
expérimentales : (1) sans biofeedback et (2) avec le biofeedback auditif de l’application
Smartphone iBalance décrit plus haut. Les orientations du tronc par rapport à la verticale (en
degrés) ont été calculées à partir des signaux issus des accéléromètres, gyroscopes et
magnétomètres tri-axes embarqués dans le Smartphone.
Résultats. Une diminution statistiquement significative de l’inclinaison du tronc est observée
dans la condition « Avec biofeedback » par rapport à la condition « Sans biofeedback ».
Conclusions. Nos résultats suggèrent que les personnes jeunes et en bonne santé ont été
capables d’intégrer efficacement le biofeedback auditif de l’application Smartphone iBalance
pour réduire les oscillations de leur tronc et améliorer le contrôle, difficile, de la station
unipodale en l’absence de vision. Une étude clinique est en cours afin d’évaluer l’efficacité et
l’intérêt de ce dispositif chez des personnes souffrant de troubles de l’équilibre (par exemple,
personnes âgées fragiles, hémiplégiques, amputées de membres inférieurs et atteintes de la
maladie de Parkinson) et pour lesquelles un déséquilibre pourrait avoir des conséquences
dramatiques (par exemple, chutes, fractures, perte d’autonomie).
Références bibliographiques de l'équipe de travail
Fleury A, Mourcou Q, Franco C, Diot B, Demongeot J, Vuillerme N. Evaluation of a
Smartphone-based audio-biofeedback system for improving balance in older adults - A pilot
study. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2013;2013:1198-201.
Franco C, Fleury A, Gumery PY, Diot B, Demongeot J, Vuillerme N. iBalance-ABF: a
Smartphone-based audio-biofeedback balance system. IEEE Trans Biomed Eng.
2013;60(1):211-5.
Remerciements. Ce travail a bénéficié du soutien de l’Institut Universitaire de France (IUF).
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Journée de la Recherche Médicale 2014
RT02
Analysis of Chronic Lung Allograft Dysfunction
(CLAD) after Lung Transplantation by proteomic
approaches of bronchoalveolar lavage
and plasma fluids
Sandrine Bourgoin-Voillard1,2, Candice Trocmé1,3, Johanna Claustre1,2, Hélène FlamantWaret1, Izabel Bérard1, Bertrand Toussaint1,3, Karine Botturi-Cavailles4, Antoine Magnan4,
Laurent Nicod5, Christophe Pison2,6,7, Michel Sève2,3
1
Université Grenoble Alpes, Grenoble, France
Plateforme Protéomique Prométhée, INSERM/IAB, CHU Grenoble, Grenoble, France
3
Laboratoire de Biochimie des Enzymes et des Protéines, CHU Grenoble, Grenoble, France
4
Service de Pneumologie, CHU Nantes - Institut du Thorax - INSERM UMR 1087 / CNRS UMR
6291, Nantes, France
5
Centre Hospitalo-Universitaire Vaudois, Lausanne, Suisse
6
Clinique Universitaire de Pneumologie, CHU Grenoble, Grenoble, France
7
European Institute of Systems Biology and Medicine, Lyon, France
2
With 39,000 procedures performed worldwide in the least 30 years, lung transplantation (LT)
has become the standard treatment for patients with advanced lung diseases. Unfortunately,
about 50% of LT recipients (LTR) will develop within 5 years a chronic lung allograft dysfunction
(CLAD), a generic term regrouping two clinical pictures named bronchiolitis obliterans
syndrome (BOS) and restrictive allograft syndrome (RAS). Moreover, CLAD diagnosis based of
the decline of respiratory function is often late when lung damages are irreversible and no early
symptoms of this pathology are currently known. Thereby, identification of biomarkers at early
stage would allow the use of adequate treatments for patients that will develop BOS or RAS
syndromes.
The goal of our study, which is part of an EU-funded FP7 project named SysCLAD, was to
identify at 6 and 12 months after LT biomarkers that will predict CLAD occurrence 3 years later.
We used for this purpose patient samples from a European prospective cohort of 500 LTR,
whom 100 reached 3 years follow up at the time of the study (Cohort Of Lung Transplantation
(COLT)). Proteome of plasma and bronchoalveolar lavages withdrawn at 6 and 12 months posttransplantation were analyzed by two approaches. SELDI-TOF profiles of LTR developing a BOS
or RAS phenotype were compared to those of stable patients, allowing characterization of
several proteins differentially expressed between each group. Then, identification of these
candidate biomarkers will be performed by a bottom-up approach. Secondly, samples from the
same group (BOS, RAS and stable LT) were pooled and analyzed by iTRAQ quantitative
proteomic approach using 2D fractionation (OFFGEL, nanoHPLC) and MALDI-TOF/TOF mass
spectrometer. All these results will be integrated into a prediction computational model of CLAD
based on principles of systems medicine developed from all the clinical and experimental data
(environment, phenotype, microbiome, biology, omics) of donors and recipients.
References:
Pison C. et al., Prediction of chronic lung allograft dysfunction: a systems medicine challenge,
European Respiratory Journal 2014: 43:689-693
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RT03
Journée de la Recherche Médicale 2014
A safe bacterial micro-syringe for in
vivo antigen delivery and immunotherapy
Le Gouëllec1,2, X. Chauchet1,2, D. Laurin1,3, A. Broisat5, C. Ghezzi5,
B. Polack1 and B. Toussaint1,2
1-Laboratoire TIMC-TheREx (UMR 5525 CNRS-UJF), Faculté de médecine, Université
Joseph Fourier Grenoble I, F-38700 La Tronche.
2-Département de Biochimie, Toxicologie et Pharmacologie, UM Biochimie des Enzymes et des
Protéines, Institut de Biologie et de Pathologie, CHU de Grenoble, BP 217 – 38043.
3-Etablissement Français du Sang Rhône-Alpes, R&D Laboratory, La Tronche.
5-INSERM U1039, Radiopharmaceutiques Biocliniques, F-38700, La Tronche
In the emerging field of active and specific cancer immunotherapy, strategies using live
attenuated bacterial vectors have matured in terms of academic and industrial development.
Different bacterial species can be genetically engineered to deliver antigen to APCs with
strong adjuvant effects due to their microbial origin. We developed a microsyringe for antigen
delivery based on the type III secretion system (T3SS) of P. aeruginosa. We applied the
“killed but metabolically active” (KBMA) attenuation strategy to make this bacterial vector
suitable for human use. We demonstrate that attenuated P. aeruginosa has the potential to
deliver antigens to human antigen-presenting cells in vitro via T3SS with considerable
attenuated cytotoxicity as compared with the wildtype vector. In a mouse model of cancer, we
demonstrate that this KBMA strain, which cannot replicate in its host, efficiently disseminates
into lymphoid organs and delivers its heterologous antigen. The attenuated strain effectively
induces a cellular immune response to the cancerous cells while lowering the systemic
inflammatory response. Hence, a KBMA P. aeruginosa microsyringe is an efficient and safe
tool for in vivo antigen delivery.
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RT04
Journée de la Recherche Médicale 2014
Analyse des pressions à l'interface moignonemboiture chez les patients amputés fémoraux
M. Bastien MOINEAU*, M. Bruno SAUREL, Dr Vanessa SEETHA, M. Pierre CHABLOZ, Dr Marie-Pierre
DEANGELIS, Pr Vincent NOUGIER, Pr Dominic PERENNOU
Clinique MPR - Institut de Rééducation - Hôpital sud – CHU de Grenoble
Laboratoire TIMC-IMAG - Faculté de Médecine - La Tronche
* : Ecole doctorale EDISCE
Références bibliographiques de l’équipe : http://www-timc.imag.fr/rubrique301.html
Etude réalisée dans le cadre du financement PHRIP 2012 du projet « Marche Amputé »
Intérêt et cadre de la recherche: La conception et les réglages de l’appareillage des patients
amputés fémoraux reposent actuellement en grande partie sur les perceptions du patient, car il
n’existe pas d’évaluation objective de l’interaction entre le patient et sa prothèse.
Objectif scientifique: Cette étude transversale vise à définir une méthode et des paramètres
cliniquement pertinents pour décrire les pressions exercées au contact du moignon et de
l’emboiture chez le patient amputé fémoral.
Méthode: Les pressions ont été mesurées lors de la marche chez 32 patients avec 14 capteurs
piézo-résistifs placés sur le moignon. Les paramètres étaient les pics de pressions (valeurs
maximales), les coefficients de corrélations croisées des pressions entre les capteurs (mesurant
la synchronisation des appuis) et leurs décalages temporels.
Un examen du confort de la prothèse, des plaies et des douleurs du patient, ainsi que des
échelles de satisfaction et d’utilisation de la prothèse ont été réalisés.
Des analyses en composantes principales ont servi à construire des scores et des groupes
cliniques (bons/intermédiaires/mauvais et satisfaisants/insatisfaisants/désadaptés). Les critères
de pressions les plus pertinents ont été sélectionnés à l’aide de tests statistiques nonparamétriques réalisés entre les paramètres de pressions et ces données cliniques.
Les seuils d’acceptabilité de ces paramètres de pressions ont été fixés au moyen de courbes
ROC. Les dix paramètres les plus signifiants cliniquement ont permis de constituer un score
global des pressions dans la prothèse variant entre +10 et -10.
Résultats: Les paramètres les plus signifiants cliniquement étaient (1) les coefficients de
corrélations des capteurs à mi-hauteur de moignon, de la branche et de la tubérosité
ischiatique, (2) les décalages temporels des capteurs de la branche et de la tubérosité
ischiatique, (3) les hyper-appuis à l’extrémité du moignon et sur la branche ischiatique.
Les pics de pressions relevés sur les parties non-osseuses du moignon étaient faiblement et
inversement corrélés avec les problèmes cliniques (r=-0.13 à -0.43).
Le score de pressions permettait de détecter les prothèses problématiques avec une sensibilité
de 94% et une spécificité de 93%. Les patients ayant un score des pressions négatif
présentaient soit des plaies et/ou des douleurs, soit une prothèse désadaptée (emboiture trop
grande) mais qui les satisfaisait tout de même.
Conclusions: La mesure de ces paramètres de pressions permet donc de distinguer les
prothèses bien ou mal ajustées, et de valider certaines hypothèses cliniques concernant la
conception des emboitures à ischion intégrés pour amputés fémoraux :
(1) assurer un serrage à mi-hauteur du moignon permettant la mise en charge simultanée sur
les quatre faces du moignon (zones sans appuis osseux), (2) éviter une mise en charge
importante au fond de la prothèse, (3) assurer une mise en charge modérée et synchronisée
avec le reste du moignon au niveau du bassin (branche et tubérosité ischiatiques).
Ce type de dispositif de mesure des pressions pourrait être utile en pratique clinique courante
pour orienter les cliniciens lors de la conception des prothèses, en pronostiquant ou
diagnostiquant des problèmes d’appareillage.
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RT05
Journée de la Recherche Médicale 2014
Prédicteurs neuroanatomiques de la réponse à
la psychoéducation chez les patients bipolaires
euthymiques : étude en IRM morphologique
Dr Alexandre PERRIN (aperrin4@chu-grenoble.fr)
Pauline Favre1, Monica Baciu1, Cédric Pichat1, Thierry Bougerol2 & Mircea Polosan2,3
1
Université Grenoble Alpes, LPNC, CNRS UMR 5105, F-38040 Grenoble
2
CHU de Grenoble, Pôle Psychiatrie et Neurologie, Centre Expert des Troubles Bipolaires,
cepb@chu-grenoble.fr
3
Univ. Grenoble Alpes, INSERM, CHU de Grenoble, GIN, F-38000 Grenoble, France
Intérêts et cadre de la recherche : De manière empirique puis épidémiologique, l’efficacité
des thérapies non médicamenteuses dans la prise en charge des troubles bipolaires a été
avérée. Avec l’avènement des neurosciences et notamment l’exploration en IRM des
structures cérébrales mise en jeu dans la production et la gestion des processus émotionnels,
une nouvelle évaluation et une meilleure compréhension des thérapies non médicamenteuses
comme la psychoéducation est possible.
Objectifs : Les études de neuroimagerie structurelle concernant les troubles bipolaires (BP)
ont principalement rapporté des anomalies de la substance grise dans les régions limbiques et
préfrontales (Bora, 2010). Bien que les interventions psychosociales comme la
psychoéducation aient montré une réelle efficacité dans la prévention des rechutes des
troubles bipolaires, les bases neuronales de cet effet prophylactique restent inconnues. Cette
étude en IRM vise à évaluer les facteurs neuroanatomiques prédictifs de réponse à la
psychoéducation chez les patients bipolaires euthymiques (BPE).
Méthode : Nous avons utilisé une technique d’analyse spécifique, la voxel-based
morphometry (VBM), pour comparer le volume de substance grise (VSG) de 16 BPE et 16
témoins sains, appareillés, et mis en œuvre toutes les améliorations méthodologiques qui ont
été récemment mises au point afin de limiter les erreurs possibles associés au traitement de
l’image (Ashburner, 2007). L'évaluation clinique des BPE a été effectuée avant et après un
programme de psychoéducation de trois mois. La différence des scores cliniques avant et
après psychoéducation permet de mesurer la réponse à la thérapie. Enfin, les corrélations
entre le VSG des régions identifiées et une amélioration clinique après psychoéducation ont
été cherchées.
Résultats: L’analyse en VBM a montré une diminution du VSG au niveau du cortex préfrontal
dorso-latéral droit (CPFDL) et du putamen gauche ainsi qu’une augmentation du VSG dans la
partie orbitale du gyrus frontal inférieur (GFI) à droite chez les BPE par rapport aux témoins.
En outre, des corrélations positives et négatives, significatives, ont été trouvées entre le VSG
du GFI droit et les scores cliniques évaluant l'amélioration de l'anxiété (STAI-B), des
stratégies d'adaptation (WCC) et du fonctionnement social (QFS).
Conclusion : Cette étude plaide en faveur d’anomalies structurelles dans les régions frontolimbiques chez les patients BPE. Une diminution du VSG au niveau du CPFDL et du putamen
pourrait être liée à des troubles cognitifs persistants chez les patients BPE. L’augmentation du
VSG du GFI pourrait appuyer l'hypothèse d’une dérégulation affective chez les patients BPE
(Philips, 2008). Enfin, nos résultats suggèrent qu’un volume plus faible du GFI droit pourrait
prédire une meilleure réponse à la psychoéducation. De futures études seront nécessaires
pour évaluer la modulation potentielle du VSG après un programme de psychoéducation.
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RT06
Journée de la Recherche Médicale 2014
Erythrocyte dysfunctions in Myeloproliferative
Neoplasms PhSOCORO YUSTE Nuria1, COURT Magali2, DAGHER Marie-Claire1, ZACCARIA Affif3, GONZALEZ
DE PEREDO Anne4, MONSARRAT Bernard4, POLACK Benoit1,6, CAHN Jean Yves1,5, MOSSUZ
Pascal1,6
1
Equipe TheREx- « Thérapeutique recombinante expérimentale » Laboratoire TIMC-IMAG,
Techniques de l’Ingénierie Médicale et de la Complexité - Informatique, Mathématiques et
Applications de Grenoble - UMR UJF CNRS 5525
2
Plateforme d’Analyses Protéomiques EDyP-Service – CEA Grenoble
3
Department of clinical proteomics – University of Geneva
4
Plate-forme Protéomique de la Génopole Toulouse Midi-Pyrénées. Institut de Pharmacologie
et de Biologie Structurale - CNRS - UMR 5089 - Toulouse
5
Clinique Universitaire d’Hématologie – CHU Grenoble
6
Laboratoire d’Hématologie cellulaire - Institut de Biologie et Pathologie – CHU Grenoble
nsocoro@chu-grenoble.fr Tél : 06.52.40.12.13
Polycythemia Vera (PV), Essential Thrombocythemia (ET) and Primary Myelofibrosis (PMF) are
myeloproliferative neoplasms (MPN) characterized by a clonal proliferation of hematopoietic
stem cells that results in an overproduction of mature blood cells. Several molecular
abnormalities have been described in progenitor cells such as JAK2 V617F mutation, which is
the most frequent mutation in PV (>95%). More recently, a new somatic mutation of the
CALR gene has been described with a particular frequency in ET and PMF patients without
JAK2 V617F mutation. These two mutations are responsible for a constitutive activation of the
STAT signaling pathway causing an enhanced proliferation of progenitor cells. In parallel,
functional alterations of leucocytes and platelets have been reported in MPN patients, but little
is known about functional alterations of erythrocytes and potential correlation of erythrocyte
dysfunction with patient’s genotype. First studies have discovered that abnormal red blood cell
(RBC) adhesion to endothelial cells in PV could be due to the activation of Lu/BCAM by a
JAK2V617F/Akt/Rap1 pathway. In this context, we have focused our research on the study of
RBC anomalies in PV and ET. In a first time, we performed a proteome study on 48 samples
selected from ET, PV and control patients. Erythrocytes were separated from leucocytes by
gradient density centrifugation before lysis for protein recovery. Being the hemoglobin a big
impediment to study the erythrocyte proteome, we developed and validated a new technique
based on a library of hexapeptides bound to beads in chromatographic supports (ProteoMiner)
for the enrichment in low-abundance proteins. Samples were firstly analyzed by SELDI-TOF
MS which allowed us to select, based on their proteomic profile, the five most representative
patients of each group (PV, ET and control). Next, on these selected patients, we performed a
LC MS/MS analysis raising the quantification of 1019 different proteins. Comparative analysis
of the relative ratios of the 1019 proteins between ET, PV and control patients identified
proteins that were significantly differently expressed between MPN and controls and among
MPN. Functional analysis of pathways implicated in these protein alterations was performed
using Ingenuity Pathway Analysis (IPA) software. We thereby highlighted a deregulation of
Ras family GTPases signaling between both MPN and control patients. In particular, Ras
GTPase-activating like protein IQGAP1 was overexpressed in ET and PV comparing to controls.
(IQGAP1 ratios in ET vs control: 3.7 and PV vs control: 2.2). IQGAP1 is an important scaffold
protein that regulates several pathways and, in particular, the MAPK pathway, which is also
overexpressed in MPN and activated by JAK2V617F. We have confirmed by western blot the
deregulation of IQGAP1 expression in ET and PV erythrocytes. Currently, we are investigating
the western blot expression in erythrocytes of downstream effectors of IQGAP1, with a
particular focus on the Rho family of GTPases cdc42 and Rac1, which have been described as
major partners of IQGAP1. Altogether these data suggest that erythrocyte dysfunction
mediated through alteration of Ras signaling could play a role in MPN pathogenesis. Future
perspectives are based on an evaluation of Calreticulin expression in RBC analysis with regard
to CALR and JAK2 status.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Les résumés P a g e | 32
Journée de la Recherche Médicale 2014
Monitoring the immunomodulatory effects of
pegylated interferon a-2a therapy in patients
with chronic HBV infection, an immunological
sub-study of ANRS HB06 PEGAN TRIAL
C Aspord1,2, J Bruder-Costa1,2, T Dufeu-Duchesne3,4, S Larrat5, JP Zarski3,4,
J Plumas1,2, V Leroy 3,4
1EFS Rhone-Alpes, R&D Laboratory, La Tronche, F-38701 France
2University Joseph Fourier, Grenoble, F-38041 France; INSERM, U823, Immunobiology &
Immunotherapy of Cancers, La Tronche, F-38706 France
3University Joseph Fourier, Grenoble, F-38041 France; INSERM, U823, Analytic Immunology
of chronic pathologies, La Tronche, F-38706 France
4CHU Grenoble, Michallon Hospital, Hepato-gastroenterology unit, Grenoble, F38043 France
5CHU Grenoble, Michallon Hospital, Virological laboratory / UMI 3265 CNRS-UJF-EMBL,
Grenoble, F-38043 France
Pegylated interferon α-2a (PEG-IFN) therapy represents a therapeutic alternative for the
prolonged use of nucleos(t)ide analogues in Chronic Hepatitis B (CHB) infection. However the
mechanisms leading to a positive clinical outcome remain not fully understood. We
investigated the immunomodulatory effects of PEG-IFN on the major components of the antiviral response. Blood samples were obtained from HBeAg-negative patients with CHB infection
treated for 48weeks with nucleos(t)ide analogue alone (n=14) or together with PEG-IFN
(n=8). We analyzed the features of T cells, NK cells, B cells and DCs before and during the
treatment by flow cytometry. PEG-IFN induced a potent expansion of the CD56bright NK cell
subset, while the CD56dim NKs showed an early higher level of activation, together with an
enhanced ability to secrete IFNγ and an improved cytotoxic activity. These modulations were
preceded by an increase in pDC and mDC activation level. In addition, PEG-IFN therapy
droved an improvement in the frequencies of Th1 HBc-, HBs- and HBx-specific T cells and a
remodeling of the B cell compartmentalization. The global cytokine profile revealed an early
Th2-biaised HBx-specific T cells, and a global Th17 skewing of HBV-specific immune
responses. Patients initially unable to respond to a specific stimulation by HBV derived-peptide
loaded pDCs became responsive during the course of PEG-IFN therapy. Thus, PEG-IFN therapy
triggers a potent remodelling of the repartition and function of the major anti-viral effectors.
Our study leads to a better understanding of the effects of PEG-IFN on immunity, which may
help identify predictive factors of response.
P a g e | 33
Journée de la Recherche Médicale 2014
Evaluation de l’impact des antifongiques sur le
pronostic à trente jours des patients sévères en
réanimation
S Bailly ; R Hamidfar-Roy ; M Garrouste-Orgeas ; S Chemam ; B Souweine
; M Cornet; S Ruckly; C Schwebel; C Adrie; M Rabilloud; JF Timsit;
Institut Albert Bonniot – Equipe 11
38706 LA TRONCHE
Cadre de la recherche : Les traitements antifongiques sont plus efficaces s’ils sont administrés
précocement chez les patients présentant une infection fongique prouvée. Près de 40% des infections
fongiques invasives sont recensées dans les services de réanimation. Leur diagnostic est peu sensible et
tardif amenant à administrer dans 75% des cas un traitement antifongique probabiliste ; ce traitement est
débuté chez plus de 5% des patients en réanimation un jour donné. Son impact sur le pronostic est suggéré
par certaines études sans preuve formelle. Les méthodes d’estimation utilisées ne permettent pas de tenir
compte de l’ensemble des facteurs de confusion (gravité au cours du temps et propension à recevoir un
traitement).
Objectif : estimer l’impact d’un traitement antifongique sur le pronostic à trente jours des patients sévères.
Patients et méthodes : Etude rétrospective multicentrique concernant 5 services de réanimation français
collaborant à une cohorte prospective. Les patients présentant une ventilation mécanique invasive de plus
de 5 jours et n'ayant pas d'infection fongique invasive documentée à J5 ont été inclus dans l'étude. Dans un
premier temps, la propension à recevoir un traitement antifongique chaque jour a été estimée par une
régression logistique poolée en tenant compte de la gravité des patients, du case-mix, de l’utilisation des
procédures invasives, de la colonisation fongique connue ainsi que des facteurs de risque connus. La
pondération par l’inverse de la probabilité de traitement permet de faire une pseudo-randomisation de la
population étudiée en fonction des facteurs de confusion initiale et temps dépendants. Les risques
compétitifs de sortie vivants du service de réanimation ont également été pris en compte à partir du calcul
d'une probabilité de recevoir un traitement antifongique en dehors du service de réanimation grâce à
l’analyse des prescriptions post-réanimation d’un échantillon randomisé de patients. Un modèle structural
marginal de Cox a été utilisé pour calculer le ratio de risque de décès ou de candidose invasive.
Résultats : Nous avons inclus dans l’étude 1491 patients. Les patients avaient un âge médian de 65 ans
±12, étaient de sexe masculin dans 64% des cas. Le motif d'admission était une chirurgie programmée
dans 6% des cas, une chirurgie urgente dans 10% des cas. Au total, 8% des patients étaient
immunodéprimés, 16% avaient une maladie tumorale (dont 27% avec métastases, et 11% avec une
hémopathie maligne) et 65% avaient au moins une maladie chronique. Tous les patients bénéficiaient d'une
ventilation mécanique invasive d’au moins 5 jours. 427 patients (29%) étaient en état de choc septique ou
présentaient une défaillance multiviscérale. A J5 18% présentaient une colonisation multisites à Candida et
le Candida score médian était de 2 (IQR= 1 ;3). La durée moyenne d’hospitalisation avant l’admission dans
le service de réanimation était de 6 jours (IQR : 5 – 8). A 30 jours, 100 patients (7%) ont reçu au moins une
fois un traitement antifongique non lié à une candidose invasive documentée en cours de séjour pour une
durée médiane de 5 jours (IQR: 3-9). 385 patients (26%) ont présenté l'événement d'intérêt, dont 363 décès
(25%) et 22 candidoses invasives documentées (1,5%). Après ajustement sur les facteurs de confusions à
l'inclusion et les facteurs de confusion dépendants du temps, on ne notait pas d'association entre l'initiation
d'un traitement antifongique empirique et la survenue de l'événement d'intérêt : Hazard Ratio 1,05 (IC95%
0,56 ; 1,96).
Conclusion : Les résultats obtenus prennent en compte les facteurs de confusion dépendant du temps et
les risques compétitifs liés à la sortie des patients. Ils ne mettent pas en évidence un impact protecteur du
traitement antifongique probabiliste sur la survie sans candidose invasive à trente jours. Le traitement
semble présenter un effet protecteur non significatif pour les patients immunodéprimés et les patients ayant
un score SOFA inférieur à 6 à l’inclusion.
P a g e | 34
Journée de la Recherche Médicale 2014
Prévention des troubles musculo-squelettiques
par la pratique d’activités physiques adaptées en
milieu professionnel – Application au secteur de
la viticulture
Balaguier R 1,2, Madeleine P 2, Rose-Dulcina K 1,2, Vuillerme N 1,3
Univ. Grenoble-Alpes, Laboratoire AGIM FRE 3405, CNRS-UJF-UPMF-EPHE, France
Univ. Aalborg, Départ. des Sciences et Technologies de la Santé, SMI, Aalborg, Danemark
3
Institut Universitaire de France, Paris, France
1
2
Intérêt et cadre de la recherche. Les troubles musculosquelettiques représentent
aujourd’hui un véritable fléau en évolution constante dans tous les pays européens. Ils
touchent particulièrement les secteurs de l’agriculture et de l’agro-alimentaire, notamment la
viticulture, où ils représentent 94% des maladies professionnelles reconnues pour les salariés
du régime agricole. Malgré une volonté d’améliorer les conditions de travail pour ses salariés
vignerons/vigneronnes, le Château Larose-Trintaudon (St Laurent-Médoc, France) fait face à
une augmentation exponentielle du nombre de troubles musculoquelettiques et de jours
d’arrêts de travail. C'est dans ce contexte que cette entreprise viticole a fait appel au
laboratoire AGIM dans le but d'être guidée et accompagnée dans sa démarche d'amélioration
des conditions de travail et de prévention des troubles musculosquelettiques.
Objectif scientifique. L’objectif est de concevoir, planifier, mettre en œuvre et évaluer un
programme d’activités physiques adaptées dédié à la prévention des troubles musculosquelettiques chez les salariés vignerons/vigneronnes du Château Larose-Trintaudon. Les
résultats de d’une analyse ergonomique de l’activité des salariés vignerons/vigneronnes que
nous avons préalablement menée [1] nous a conduit à orienter notre intervention à une prise
en charge de la sangle abdominale et du rachis lombaire.
Méthodes. Neuf salariés vignerons/vigneronnes ont volontairement participé à cette étude. Ils
ont bénéficié d’un programme d’activités physiques adaptées de 8 semaines comprenant un
échauffement musculaire (15 minutes) effectué avant chaque journée de travail et deux
séances hebdomadaires de renforcement musculaire (40 minutes) supervisées par deux
étudiants de la filière Activités Physiques Adaptées Santé de l’UFRAPS. L’endurance des
muscles fléchisseurs et extenseurs du tronc, la souplesse du rachis, ainsi que l’intensité des
douleurs perçue au niveau de la région lombaire ont été mesurées avant le début et à la fin du
programme d’activités physiques adaptées.
Résultats. Une amélioration statistiquement significative de l’endurance des muscles
fléchisseurs et extenseurs du tronc et de la souplesse du rachis, ainsi qu’une réduction
statistiquement significative des douleurs lombaires ont été observées chez tous les vignerons
après leur participation au programme d’activités physiques adaptées.
Conclusions. Notre programme d’activités physiques adaptées de 8 semaines a permis non
seulement d’augmenter les capacités neuromusculaires de la sangle abdominale et du rachis
lombaire, mais aussi de réduire les douleurs lombaires chez les salariés vignerons/vigneronnes
du Château Larose-Trintaudon. Même si cette étude se doit d’être complétée par une
évaluation du coût médico-économique de notre prise en charge, elle fournit d’ores-et-déjà des
résultats encourageants pour la promotion de l’activité physique adaptée comme un moyen de
prévention ou de réduction des troubles musculo-squelettiques en milieu professionnel.
Références bibliographiques de l'équipe de travail : Balaguier R, Madeleine P,
Hlavackova, P, Rose-Dulcina K, Vuillerme N. (2014) Ergonomic evaluation of pruning activity
among the Chateau Larose-Trintaudon wine-growers. Proceedings of the 11th International
Symposium on Human Factors in Organisational Design & Management and the 46 Annual
Nordic Ergonomics Society Conference (ODAM-NES 2014).
Remerciements : Les auteurs remercient Franck Bijon (Château Larose-Trintaudon), ainsi que
l’ensemble des salariés vignerons/vigneronnes pour leur participation à cette étude. Ce travail
a bénéficié du soutien de l’Institut Universitaire de France (IUF).
P a g e | 35
Journée de la Recherche Médicale 2014
Caractérisation fonctionnelle et moléculaire de
mutations rares CGDX- – Mise en évidence de
régions de NOX2 essentielles pour la synthèse
du cytochrome b558
1
Sylvain Beaumel1,2, Didier Grunwald, Franck Fieschi3, and Marie José Stasia1,2
Centre Diagnostic et Recherche sur la granulomatose septique (CDiReC), Institut de Biologie
et Pathologie, CHU de Grenoble ; 2TheREx, TIMC/Imag, UMR CNRS 5525, Université Joseph
Fourier, Grenoble Alpes ; 3Univ. Grenoble Alpes, Institut de Biologie Structurale (IBS), F38027 Grenoble, France
sbeaumel@chu-grenoble.fr; mjstasia@chu-grenoble.fr
Le cytochrome b558 élément redox du complexe NADPH oxydase des phagocytes, est constitué
de deux protéines membranaires, p22phox et NOX2. Ce complexe joue un rôle clé dans la
réponse immunitaire innée en permettant la production de FRO, essentiels pour lutter
efficacement contre les infections microbicides. Un défaut de fonctionnement de ce complexe
provoque une maladie génétique rare, la granulomatose septique chronique ou CGD. Dans
certains cas rarissimes (CGDX-), des mutations sur NOX2 entraînent une expression partielle de
NOX2 et une activité oxydase très réduite ou abolie. Ces variants sont très intéressants car ils
permettent de cibler des acides aminés (AA) importants dans le processus de synthèse ou de
maturation de NOX2. Si l’on sait que les synthèses respectives de NOX2 et de p22phox sont
étroitement liées, l’identité des AA de NOX2 impliqués dans les étapes de synthèse et/ou de
maturation du cytochrome b558 restent inconnus.
Nous avons donc modélisé 10 mutations humaines de type CGDX- (W18C, H101Y, E309K,
K315del, I325, H338Y, P339H, G389A et F565_570del) en modèle cellulaire PLB985 KO pour
NOX2, afin d’étudier le rôle joué par ces AA dans les étapes de synthèse et de maturation du
cytochrome b558. Pour cela, les mutations CGDX- ont été reproduites par mutagénèse dans un
vecteur eucaryotique d’expression stable. Après nucléofection, sélection antibiotique et dilution
clonale, les cellules PLB985 transfectées et mutantes ont été analysées. L’homogénéité du taux
d’ARNm de NOX2 a été contrôlée dans chaque lignée, par PCR semi-quantitative. Le niveau
d’expression dans les PLB985 transfectées de NOX2 mutée recombinante a été mesuré par
cytométrie en flux. Le degré de maturation de NOX2 a été évalué par western blot (présence du
précurseur p65-KDa, NOX2 mature). L’activité NADPH oxydase a été mesurée par
chimiluminescence. Pour les mutations entrainant une accumulation anormale du précurseur p65KDa, l’étude d’une co-localisation de NOX2 et/ou p65 avec le RE,Golgi et la mb nucléaire a été
analysée par microscopie confocale. L’interaction p65/p22phox a été évaluée par
coimmunoprécipitation grâce à un AC anti-p22phox monocl.
Les AA impliqués dans ces mutations sont totalement conservés dans NOX1-4, soulignant un
rôle essentiel dans cette famille. La caractérisation phénotypique des mutants a permis
d’identifier 2 groupes: groupe A (W18C, E309K, K315del, I325F), caractérisé par une relation
linéaire entre l'expression de NOX2 et l'activité NADPH oxydase et groupe B (H338Y, P339H,
G389A et F656-F570del) caractérisé par l'absence d'activité NADPH oxydase et une expression
variable de NOX2. Les AA du groupe B se trouvant tous dans le site de liaison du FAD, l’absence
d’activité oxydase observée peut être ainsi expliquée. De plus il apparaît que l’intégrité de ce site
FAD est essentielle à la synthèse correcte de NOX2 et du cytochrome b558. Nous avons observé
une accumulation anormale de p65-KDa pour les mutants W18C, E309K, I325F et G389A dans le
RE. L'immunoprécipitation a révélé une dissociation de p65/p22phox pour ces mutants, indiquant
un rôle possible du premier domaine transmembranaire (W18) et de la région intermédiaire entre
les domaines membranaire et cytosolique déshydrogénase de NOX2 (E309, I325, G389), dans la
liaison avec p22phox.
Debeurme, F., Picciocchi, A, Dagher, MC, Grunwald D, Beaumel S, Fieschi F, Stasia, M. J.
(2010) Regulation of NADPH oxidase activity in phagocytes: relationship between FAD/NADPH
binding and oxidase complex assembly. J Biol Chem 285, 33197-33208
Picciocchi A, Debeurme F, Beaumel S, Dagher MC, Grunwald D, Jesaitis AJ, Stasia MJ.
(2011) Role of putative second transmembrane region of Nox2 protein in the structural stability
and electron transfer of the phagocytic NADPH oxidase. J Biol Chem. 286(32), 28357-69.
P a g e | 36
Journée de la Recherche Médicale 2014
Implication du noyau sous thalamique de
patients parkinsoniens dans l'inhibition
proactive et réactive.
Damien Bénis, Olivier David, Jean-Philippe Lachaux, Eric Seigneuret, Paul Krack, Valérie Fraix,
Stéphan Chabardès et Julien Bastin
Institut des Neurosciences de Grenoble - Chemin Fortuné Ferrini - Bâtiment Edmond J. Safra,
38700 La Tronche
La Maladie de Parkinson est caractérisée non seulement par des symptômes moteurs
(akinésie, rigidité) mais aussi non moteurs (apathie, dépression).
Le noyau sous thalamique (NST) est une structure importante des boucles cortico-souscorticales impliquées dans la physiopathologie de cette maladie, mais son rôle fonctionnel
reste débattu. Ainsi, il a été observé que les patients parkinsoniens présentent un déficit
concernant les processus exécutifs comme l'inhibition réactive à savoir la suppression d'un
mouvement programmé en réponse à un changement dans l'environnement (Obeso et al.,
2011), et l'inhibition proactive, à savoir la préparation à inhiber son mouvement afin d'éviter
des réponses impulsives inappropriées (Wylie., 2010). La stimulation haute fréquence du NST
utilisée comme traitement symptomatologique de la maladie de Parkinson influe sur
l'inhibition réactive et proactive (Ray et al., 2009; van den Wildenberg et al., 2006, Frank et
al., 2007) mais les corrélats électrophysiologiques de ces processus exécutifs dans le NST ne
sont pas clairs.
Nous avons tiré parti de la procédure d'implantation des électrodes de stimulation dans le NST
de 12 patients parkinsoniens, pour étudier le décours temporel des activités neuronales du
NST, lors de l'inhibition réactive associée à la suppression d'un mouvement programmé et
l'inhibition proactive associée à
la préparation à inhiber son mouvement. L'activité
électrophysiologique du NST pendant une tache de Stop Signal optimisée a été enregistrée à
deux échelles : à l’échelle du neurone à l’aide de microélectrodes pendant la procédure
d’implantation des électrodes de stimulation, et à l’échelle de populations de neurones
synchronisées (Potentiels de Champ locaux) à partir des électrodes de stimulation.
Les enregistrements électrophysiologiques ont démontré l’existence de deux populations de
neurones dans le NST, l’une répondant au mouvement et l’autre à l’Inhibition Réactive. En
potentiels de champs locaux, une hausse relative de la synchronisation neuronale dans la
bande de fréquence Beta (13-35 HZ) à une latence précédant le Stop Signal Reaction Time
(SSRT) a été mise en évidence. Cette activité peut ainsi être interprétée comme reflétant un
signal "Stop" inhibant l'activité thalamo-sous-corticale sous tendant le mouvement.
Enfin, nous avons mis en évidence un niveau d'activité beta plus élevé dans le NST lors de la
préparation à inhiber le mouvement (inhibition proactive) corrélant avec la performance du
sujet lors de l'inhibition réactive. Nous proposons donc que l'activité beta dans le NST
implémente un signal qui permet de retarder la réponse afin de privilégier la précision par
rapport à la vitesse.
En résumé, les preuves électrophysiologiques apportées par cette permettent de mieux
appréhender les fonctions non motrices du NST qui est fortement impliqué dans la
physiopathologie de la maladie de Parkinson.
Damien Bénis1,2, Olivier David1,2, Jean-Philippe Lachaux3, Eric Seigneuret, Paul Krack1,2,4, Valérie Fraix1,2,4, Stéphan
Chabardès1,2,5 and Julien Bastin1,2* Beta band activity in the subthalamic nucleus dissociates proactive and reactive
inhibition in patients with Parkinson’s disease, 2014 , Neuroimage
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Prevalence of focal fibrosis and right ventricular
systolic dysfunction by Magnetic Resonance
Imaging (MRI) in nonischemic dilated
cardiomyopathy.
Aure-Elise Biguet Petit Jean,* Mathieu Rodière MD,‡ Adrien Jankowski MD,‡ Catherine Ghezzi, PhD,†
Gérald Vanzetto MD, PhD,*† Daniel Fagret MD, PhD,†‡ Gilles Barone-Rochette MD, PhD,*†
* Department of Cardiology, University Hospital, Grenoble, France
† INSERM U1039, Bioclinic Radiopharmaceutics Laboratory, Grenoble, France
‡ Department of Radiology, University Hospital, Grenoble, France
Background: Nonischemic dilated cardiomyopathy (CMD) is the most frequent cause of heart
transplantation and the 5-year mortality is 20%. Cardiac Magnetic Resonance Imaging (CMR)
provides new predictive prognostic factors like mid-ventricular fibrosis or impairment of right
ventricular ejection fraction (RVEF).
Scientific objective: The objective of this study was to investigate the clinical characteristics
and the CMR data as fibrosis of patients with CMD according to whether they had or not RVEF
failure.
Méthods: The study included 39 consecutive patients with CMD and no evidence of significant
coronary artery disease who were referred for CMR to Grenoble University Hospital between
November 2008 and March 2009. Depending on the presence or absence of RVEF failure
(RVEF<40%) two groups were formed respectively “Mono-ventricle failure group” (MVFG) and
“Bi-ventricle failure group” (BVFG).
Results: Thirty-nine patients were included in this study: 27 in MVFG and 12 in BVFG.
Patients with biventricular impairment were more frequently in stage III-IV NYHA (50%
versus 8%, p=0.008) than patients with monoventricular impairment. In BVFG, the systolic
and diastolic left ventricular volumes were higher than in MVFG (respectively 156 +/-49
versus 114 +/-19 ml/m2, p<0.001 and 130 +/-44 versus 70 +/-18 ml/m2, p<0.001).
Regarding the parameters of left ventricular function, left ventricular ejection fraction (LVEF)
(17+/-6 versus 39+/-7%, p<0.001) and cardiac debit (4.4+/-1.8 versus 5.8+/-1.4 l/min,
p=0.017) were decreased in BVFG. A positive correlation was observed between LVEF and
RVEF (r2=0.731, p<0.0001). However, there was no significant difference between both
groups regarding the percentage of fibrosis.
Conclusion: In this study, patients with CMD with right ventricular failure had a more severe
form of the same disease both functionally and morphologically.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Analyse de la survie des patients avalanchés en
arrêt cardiaque dans les Alpes du Nord.
Boué.Y1,2,3, Brun.J1, Thomas.S1, Levrat.A4, Blancher.M5, Debaty.G5, Payen JF1,2,3, Bouzat.P1,2,3
1
Pole Anesthésie-Réanimation, Hôpital Michallon, Grenoble, F-38043 France
2
Université Joseph Fourier, Grenoble Institut des Neurosciences, Grenoble, F-38043 France
3
INSERM, U836, Grenoble, F-38042, France
4
Service réanimation, Centre Hospitalier Région d’Annecy, Metz-Tessy, F-74370 France
5
Service Urgences-SAMU-SMUR, Hopital Michallon, Grenoble, F-38043 France
Introduction : Pathologie circonstancielle fréquente dans notre région, la prise en charge des
avalanchés pose le problème du triage des patients victimes d’arrêt cardiaque (AC) réfractaire
consécutivement à un ensevelissement complet. En effet, 3 mécanismes peuvent conduire à
un AC dans ce contexte : l’anoxie, le traumatisme ou l’hypothermie. Seul l’AC par
hypothermie sévère permet d’espérer une évolution neurologique favorable et nécessite une
réanimation prolongée(1). Les critères actuels d’éligibilité à l’assistance circulatoire sont dictés
par les recommandations internationales (2) : absence d’un traumatisme sévère, température
corporelle inférieure à 32°C et kaliémie inférieure à 10 mmol/L.
Objectif : Mettre en évidence les facteurs associés à la survie afin d’optimiser le triage des
patients avalanchés en AC réfractaire.
Matériel et méthodes : Nous avons étudié rétrospectivement de 1994 à 2013 tous les
avalanchés en ACR admis au déchocage suite à un ensevelissement par avalanche. Le registre
du Réseau de Traumatologie Nord Alpin des Urgences a permis le recueil des données. Le
triage préhospitalier
suivait les recommandations internationales(2). A l’admission
hospitalière, les patients transportés sous massage cardiaque étaient récusés à l’assistance
circulatoire en cas de traumatisme sévère diagnostiqué au bilan initial, d’une kaliémie
supérieure à 10 mmol/L ou d’une température centrale supérieure à 32°C. Les facteurs
associés à la survie hospitalière ont été déterminés par analyse univariée (Test non
paramétrique de Mann-Withney). L’évolution neurologique était évaluée par le score Cerebral
Performance Category (CPC) à 3 mois.
Résultats : 48 patients ont été inclus. A l’admission hospitalière, 11 patients ont été récusés
à l’assistance circulatoire du fait d’une hyperkaliémie (n=8 patients), d’une température
supérieure à 32°C (n=2 patients) ou d’un traumatisme thoracique (n=1 patient). 21 patients
ont bénéficié d’une assistance circulatoire pour ACR réfractaire (n=19) ou pour une instabilité
hémodynamique persistante (n=2). 16 patients présentaient une reprise d’activité circulatoire
spontanée à l’admission. Les patients non-survivants (n=29 patients) présentaient une
kaliémie plus élevée (5.6 mmol/L [4.2-4.8 mmol/L] vs 3.2 mmol/L [2.7-4 mmol/L], P=0.001),
un TCA ratio plus long (3.3 [1.9-3.7] vs 1.3 [0.9-1.9], P=0.01), un TP plus bas (30% [1951%] vs 64% [54-83%], P=0.01) et un fibrinogène plus bas (1.1 g/L [0.6-1.7 g/L] vs 1.7 g/L
[1.6-2.3 g/L], P=0.04) par rapport aux patients survivants (n=8 patients). Parmi les patients
survivants, 3 patients présentaient un score CPC de 1, 1 patients un score CPC de 3 et 4
patients un score CPC de 4. Parmi les 3 patients sans séquelles neurologiques (CPC1), tous
ont présenté des signes de vie ou une poche à air avant l’extraction.
Discussion : En préhospitalier, la présence d’une poche à air a été associée à la survie ainsi
que la présence de signes de vie avant l’ACR. En association avec l’hyperkaliémie, les troubles
de coagulation (3), grâce aux outils de biologie délocalisée, pourraient également intégrer
l’algorithme de triage pour la mise en place d’une assistance circulatoire en cas d’ACR
réfractaire.
1 N Engl J Med 2012 ; 367 : 1930-1938
2 Resuscitation 2013 ; 84 : 539-546
3 Resuscitation 2013 ; 84 : 48-53
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Auto-antibodies to vascular endothelial cadherin
in humans: association with
autoimmune diseases.
Nom des auteurs : Bouillet L, Baudet AE, Deroux A, Sidibé A, Dumestre-Perard C, Mannic T,
Treillard B, Arboleas MA, Chiquet CA, Gulino-Debrac DG, Vilgrain I.
Laboratoire et Coordonnées: Grenoble University Hospital, Internal Medicine Department, Grenoble,
France [2] INSERM, Unit 1036, Biology of Cancer and Infection, Grenoble, France [3] Joseph Fourier
University UJF-Grenoble 1, Biology of Cancer and Infection, Grenoble, France [4] CEA, DSV/iRTSV,
Biology of Cancer and Infection, Grenoble, France.
To identify patients with autoimmune diseases who are at high risk of developing vascular cell
dysfunction, early biomarkers must be identified. This study was designed to detect and
characterize circulating autoantibodies to VE-cadherin (AAVEs) in patients with early-stage
autoimmune diseases. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to
capture autoantibodies, using a recombinant human VE-cadherin fragment covering the
extracellular domains as a target antigen. AAVEs specificity for the target antigen was
confirmed by western blotting. Basal AAVEs levels were determined for healthy donors
(n=75). Sera from patients (n=100) with various autoimmune diseases, including rheumatoid
arthritis (n=23), systemic lupus erythematosus (SLE, n=31), systemic sclerosis (n=30), and
Behçet's disease (BD, n=16) were also tested. Levels of AAVEs were significantly higher in
rheumatoid arthritis (P<0.0001), SLE (P<0.05), and BD (P<0.05) populations than in healthy
subjects. Purified immunoglobulin G (IgG) from a BD patient with exceptionally high AAVEs
levels recognized the EC1-4 fragment in western blots. Further characterization of the
epitopes recognized by AAVEs showed that BD patients had antibodies specific for the EC3 and
EC4 domains, whereas SLE patients preferentially recognized the EC1 fragment. This suggests
that distinct epitopes of human VE-cadherin might be recognized in different immune
diseases. Purified IgG from BD patients was found to induce endothelial cell retraction,
redistribution of VE-cadherin, and cause the formation of numerous intercellular gaps.
Altogether, these data demonstrate a potential pathogenic effect of AAVEs isolated from
patients with dysimmune disease. This is the first description of AAVEs in humans. Because
regions EC1 and EC3-4 have been shown to be involved in homophilic VE-cadherin
interactions, AAVEs produced in the course of dysimmune diseases might be specific
biomarkers for endothelial injury, which is part of the early pathogenicity of these diseases.
References: L Bouillet et al, Laboratory Investigation, 2013 Nov;93 (11):1194-202
P a g e | 40
Journée de la Recherche Médicale 2014
Role of endoplasmic reticulum stress in the
deleterious cardiovascular consequences of
chronic intermittent hypoxia. Beneficial effects
of exercise.
Guillaume Bourdier1, Patrice Flore, Hervé Sanchez, Elise Belaidi* and Claire Arnaud*
Université Grenoble Alpes, Laboratoire HP2, INSERM 1042, BP170, 38042 Grenoble Cedex
1
Ecole doctorale chimie et sciences du vivant
*co-senior authors
AIM: Chronic intermittent hypoxia (IH) is described as the major detrimental factor leading to
cardiovascular morbi-mortality in obstructive sleep apnea (OSA) patients. Previous animal
studies demonstrated that IH induces elevation of arterial blood pressure and increased
susceptibility to myocardial ischemia-reperfusion (IR). Among mechanisms involved in the
pathophysiology of myocardial IR, modulation of endoplasmic reticulum (ER) stress seems to
play a major role. Exercise is known to exert beneficial effects on the cardiovascular system
and a growing body of evidence demonstrates a particular efficiency of high-intensity interval
training (HIT). The aim of the present study is 1) to evaluate the beneficial effects of HIT on
IH-induced hypertension and increased susceptibility to myocardial IR; 2) to determine the
implication of ER stress in these mechanisms.
METHODS: Wistar male rats were exposed to 21 days of IH (21–5% FiO2, 60s cycle,
8 h/day) or normoxia (N). After one week of IH alone, rats were daily submitted to both IH and
HIT (2*24 min, 15 to 30m/min on a motorized treadmill). At the end of the exposure, rats
were anesthetized and arterial blood pressure was measured; hearts were isolated, perfused
according to Langendorff technic and subjected to 30 min-global and total ischemia and 120
min-reperfusion. Infarct size was assessed using triphenyl tetrazolium chloride (TTC) assay. In
a second set of experiments, at the end of the conditioning, hearts were rapidly frozen and ER
stress was evaluated by Western Blot and RT-qPCR.
RESULTS: IH induced a significant increase in arterial blood pressure that was corrected by
HIT. IH induced an increase in infarct size (35.4±3.2% vs 22.7±1.7% of ventricles, in IH and
N respectively, p<0.05). This effect was abolished by HIT (28.8±3.9 vs 21.0±5.1% of
ventricles, in IH and N respectively). IH exposure induced myocardial ER stress, shown by the
increased expression of GRP78, p-eIF2α and CHOP. ER stress was reduced in the HIT group
with a lower expression of CHOP (a pro-apoptotic factor) that could contribute to the reduced
infarct size.
DISCUSSION: These findings show that chronic IH increases myocardial sensibility to
ischemia/reperfusion and ER stress. High-intensity interval training exerts a cardioprotective
effect, probably through a reduction of proapoptotic ER stress. These results suggest that HIT
could represent a good preventive strategy to limit myocardial ischemia reperfusion-related
damages in OSA patients.
P a g e | 41
Journée de la Recherche Médicale 2014
An Understanding of Metabolic Adaptation in
Non-Small Cell Lung Cancer
Sandrine Bourgoin-Voillard1,2,3 ; Alfonso Martín-Bernabé1,2,3,4 ; Roldán Cortés4; Sylvia G.
Lehmann1,2,3; Marta Cascante4; Michel Seve1,2,3
1
Univ. Grenoble Alpes, IAB, PROMETHEE Proteomic Platform, F-38000 Grenoble, France
2
INSERM, IAB, PROMETHEE Proteomic Platform, F-38000 Grenoble, France
3
CHU de Grenoble, IAB, Institut de Biologie et de Pathologie, PROMETHEE Proteomic Platform,
F-38000, Grenoble, France.
4
Department of Biochemistry and Molecular Biology, IBUB, Faculty of Biology, Universitat de
Barcelona and Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer (IDIBAPS), Barcelona,
Spain.
Sandrine.Bourgoin@ujf-grenoble.fr
While KRAS mutations in non-small cell lung cancer (NSCLC) are known to play a key role in
resistance to EGFR-targeted therapies, therapeutic treatment to target mutant KRAS-driven
cancer have been unsuccessful. Therefore, targeting lung cancer metabolism is a promising
alternative strategy that could overcome drug resistance in such cancer. In this study, we
used iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) quantitative proteomic
analysis to evidence key enzymes involved in metabolic adaptations in NSCLC.
Proteomic analysis was performed on two KRAS-mutated NSCLC cell lines (A549 and NCIH460) and a non-tumoral bronchial cell line (BEAS-2B). Extracted proteins from those cells
were digested, then, labelled with iTRAQ tags (m/z 114, 116 and 117 for BEAS-2B, A549 and
NCI-H460, respectively). The resulted labelled peptides were fractionated in two dimensions
(OFFGEL/RP nanoLC) prior MALDI-TOF/TOF mass spectrometry analysis.
Among 1169 proteins identified and 834 proteins quantified, several enzymes involved
metabolic pathways especially in glycolysis and pentose phosphate pathway (PPP) were upregulated. Up-regulation of those proteins was confirmed by western blotting analysis.
Moreover, the up-regulation of enzymes expression in PPP is correlated to their enzyme
activity suggesting them as potential metabolic targets for the development of new
therapeutic treatments and/or biomarker assays for NSCLC.
P a g e | 42
Journée de la Recherche Médicale 2014
Optimized generation of functional neutrophils
and macrophages from patient-specific induced
pluripotent stem cells – Ex vivo models of Xlinked, AR22- and AR47Chronic Granulomatous Diseases
J Brault1,2, E Goutagny1,2, NS Telugu3, K Shao3, M Baquie4, V Satre5, D Grunwald6, JP Brion7, V
Barlogis8, JL Stephan9, D Plantaz10, KH Krause4, T Saric3, MJ Stasia1,2
1
Centre Diagnostic et Recherche sur la granulomatose septique (CDiReC), Institut de Biologie et
Pathologie, CHU de Grenoble ; 2TheREx, TIMC/Imag, UMR CNRS 5525, Université Joseph Fourier,
Grenoble ; 3Institute for Neurophysiology, Cologne, Allemagne ; 4Dept. Of Pathology and Immunology,
Geneva Medical Faculty, Genève, Suisse ; 5Unité de génétique chromosomique, Pôle Couple Enfant, CHU
Grenoble ; 6iRTSV/BCI, CEA, Grenoble ; 7Pôle de Médecine Aigue et Communautaire, Pôle Couple Enfant,
CHU Grenoble ; 8Service de Pédiatrie, Hôpital La Timone, Marseille ; 9Service de Pédiatrie, Hôpital Nord,
CHU Saint-Etienne ; 10Service de Pédiatrie, Pôle Couple Enfant, CHU Grenoble.
jbrault@chu-grenoble.fr; mjstasia@chu-grenoble.fr
Patients with chronic granulomatous disease (CGD) have mutations in CYBB, CYBA, NCF1 and NCF2
genes encoding the gp91phox (NOX2), p22phox, p47phox and p67phox subunits of NADPH oxidase
required for microbicidal reactive oxygen species (ROS) production by phagocytes. However cellular
models of the different genetic forms of CGD reproducing the pathognomonic CGD oxidase-negative
phenotype in mature neutrophils or monocytes are missing. Our objective was to optimize the
quantitative and qualitative generation of mature neutrophils and macrophages from patientspecific induced pluripotent stem cells (iPSCs) reproducing three forms of CGD (X-, AR22- and
AR47-CGD) in order to develop new therapeutic approaches of CGD.
First, we showed that iPSCs reprogrammed from CGD patients’ fibroblasts by introducing specific
transcription factors have the pluripotency and self-renewal potential of embryonic stem cells
(ESCs). Furthermore, all the iPSC lines formed embryoid bodies in vitro containing cells originating
from all three germ layers. They were isogenic with the original patient fibroblasts, exhibited normal
karyotype and retained the CYBB, CYBA and NCF1 mutations found in the patient fibroblasts.
Second, hematopoietic differentiation from wild-type iPSC clones cultured on OP9 cells during 10
days was optimized to obtain CD34+/CD43+/CD45+ progenitors. We observed no difference
between the WT and the CGD-iPSC lines regarding the kinetic of disappearance of pluripotency
markers and the appearance of myeloid markers. These CD34+ progenitors can be frozen and
thawed without loss of their progenitor ability for a production of mature cells upon request. Then
terminal differentiation into mature neutrophils (1.106 neutrophils obtained from 4.106 CD34+
progenitors) or macrophages (3.106 macrophages obtained from 2.106 CD34+ progenitors)
separately was obtained in 15-18 days by using two specific protocols. The typical morphology of
mature neutrophils and macrophages was assessed by MGG staining and electron microscopy. In
addition mature neutrophils exhibited the three populations of granules as shown by
myeloperoxidase staining, and lactoferrin and gelatinase exocytosis experiments. No NOX2 and
p22phox expression was observed in X- and AR22-CGD neutrophils and macrophages by flow
cytometry. NADPH oxidase activity was deficient in the X-, AR22- and AR47-CGD neutrophils and
macrophages as determined by chemiluminescence, DHR and NBT assays.
In conclusion, 3 forms of CGD were modelled by optimization of hematopoietic differentiation,
AR22-CGD being produced for the first time. We succeeded to generate high amount of mature
neutrophils and macrophages separately. Development of new CGD therapies based on
proteoliposome or vectorialization approaches are currently under investigation to restore the
NADPH oxidase activity in our CGD model cells derived from iPSCs.
Réf : J Brault, E Goutagny, T Saric, KH Krause, MJ Stasia. Successful modelisation of X-linked Chronic
Granulomatous Disease (X-CGD) by using patient-specific induced pluripotent stem cells (iPSCs). ISEH- Society
for Hematology and Stem Cells, 42nd Annual Scientific Meeting. 22-25 Août 2013. Vienne, Autriche
(communication affichée).
P a g e | 43
Journée de la Recherche Médicale 2014
Impact of follicular Prokineticin 1
quantification on subsequent embryo transfer
decisions in conventional in vitro fertilization
Sophie Brouillet1,2,3, Camille Lebayle2, Héloïse Garcin2, Jean-Jacques Feige2,3, Ulrike Bergues1,
Claire Thomas-Cadi1, Nadia Alfaidy2,3, Pascale Hoffmann1,2,3, et Sylviane Hennebicq1,2.
sbrouillet@chu-grenoble.fr
1
Centre d’Assistance Médicale à la Procréation, Hôpital Couple-Enfant niveau 2
CHU Grenoble, BP217, 38043 GRENOBLE cedex 09, France.
2
3
Université Joseph Fourier (UJF), Grenoble 1, France.
INSERM U1036, iRTSV/LAPV, CEA, 17 rue des Martyrs, 38054 Grenoble cedex 09, France.
What is known already - Assessing the embryo implantation potential is crucial for
increasing the success rates of cIVF. PROK1 is a well established actor in endometrial
receptivity, trophoblast physiology and reproductive organs angiogenesis. In Assisted
Reproductive Technology (ART), the rates of circulating PROK1 were recently reported as
significantly linked to the rates of pregnancy. On the basis of these observations, it was
intriguing to investigate the value of its measurement in FF and FCM in cIVF cycles.
Study question - To investigate the correlation of PROK1 concentrations in follicular fluid
(FF) and fertilization culture media (FCM) with the corresponding reproductive outcome in
patients who received conventional in vitro fertilization embryo transfer (cIVF-ET).
Study design, size, duration - We conducted a prospective study utilizing clinical pregnancy
rate as endpoint. The study was performed between January and November 2013 in the
Assisted Reproduction Unit, Department of Obstetrics and Gynaecology, University of
Grenoble, France. A total of 100 infertile couples receiving first cIVF were recruited.
Participants/materials, setting, methods - Samples were collected through the CRB
Germetheque. Signed informed consent was obtained from all patients who participated in the
study. FF was collected immediately after oocyte retrieval (OR) and FCM after oocyte
denudation steps (ODS). PROK1 concentrations in FF and FCM were measured by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA).
Main results - PROK1 was detected in all FF and FCM samples. The mean value of PROK1
concentrations in FF was 722 ± 306 pg/ml, ranging from 57 to 56,558 pg/ml. Follicular fluid
PROK1 levels were significantly different between embryos which led to implantation versus
no implantation, with 19,279 pg/oocyte and 7,879 pg/oocyte respectively (p value = 0.0015,
Mann Whitney test). In FCM, the mean value of PROK1 concentrations was 114 ± 89 pg/ml,
ranging from 3 to 274 pg/ml. PROK1 concentrations in FCM were significantly different
between embryos which led to implantation versus no implantation, with 74 pg/oocyte and 40
pg/oocyte respectively (p value = 0.006, Mann Whitney test). Increased levels of PROK1 in FF
and FCM are both associated with an increased risk of pregnancy (FF PROK1 ≥ 15,000
pg/oocyte: RR [95%CI] = 7.6 [5.36; 215.63]; and FCM PROK1 ≥ 50 pg/oocyte: RR [95%CI]
= 16.7 [1.79; 155.18]).
Conclusion - High concentrations of PROK1 in FF and FCM are both correlated with embryo
implantation in cIVF-ET. PROK1 levels in FF and FCM are independent of transferred embryos
morphokinetic parameters. PROK1 is a non-invasive biomarker of human oocyte
developmental competence and embryo implantation in cIVF cycles.
Wider implications of the findings - PROK1 concentrations assessment in FF and FCM by
ELISA constitute a quick, non-invasive and non expensive test, which displays an appropriate
sensitivity and specificity for cIVF cycles routine application. The long term objective is to
evaluate the impact of including FF and/or FCM PROK1 quantification in the embryo transfer
decisions. PROK1 levels determination in FF/FCM might improve the effectiveness of cIVF by
reducing the time and cost required for obtaining a pregnancy.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Kinin catabolism and disease severity in
hereditary angioedema with F12 mutation
1
Charignon Delphine1-2; Defendi Federica1-2; Ponard Denise1; Martin Ludovic1-3; Fain Olivier1-4;
Cichon Sven5; Drouet Christian1-2
Centre national de référence des angioedème (Coordonnateur Pr L. Bouillet); CHU Grenoble,
CS10217, 38043 Grenoble; dcharignon@chu-grenoble.fr
2
Univ. Grenoble Alpes, CNRS, GREPI/AGIM FRE 3405 (Directeur Pr C. Drouet), CHU Grenoble,
CS10217, 38043 Grenoble
3
Université d’Angers, Dermatologie (Pr L. Martin), CHU Angers, 49933 Angers
4
Université Paris XIII, Médecine interne (Pr O. Fain), Hôpital Jean Verdier, 93143 Bondy
5
Université de Bâle, Département de biomédecine et de génétique humaine (Pr S. Cichon),
Bâle 4031, Suisse
Introduction
L’angioedème (AO) à bradykinine (BK) est caractérisé par des œdèmes spontanés et
récurrents des tissus sous-cutanés et/ou sous-muqueux. L’étiopathogénie de ces AO dépend
de l’accumulation de BK sur l’endothélium (1), pouvant être la conséquence d’une
surproduction et/ou d’un défaut du catabolisme de BK. L’AO à BK a été initialement
caractérisé par un déficit de C1 inhibiteur (C1Inh). Récemment la mutation c.983C>A du gène
F12, conférant un gain de fonction au facteur XII, a été identifiée comme causale de la
maladie (2). La variabilité de la pénétrance des symptômes et du phénotype clinique rendent
son diagnostic difficile (3). Le but de cette étude est d’explorer les relations entre la sévérité
de la pathologie et les activités des enzymes du métabolisme de BK.
Méthode
Cette étude analyse rétrospectivement les patients porteurs de la mutation sur le gène F12
ainsi que leur famille et les compare à des donneurs sains.
L’activité de production de BK est mesurée (activité amidase spontanée vis-à-vis du substrat
PFRpNA)(4) ainsi que la qualité de son contrôle (concentration de C1Inh). L’activité de
dégradation de BK est évaluée par la mesure des activités des trois enzymes principales du
catabolisme de BK (Enzyme de Conversion de l’Angiotensine-I, ECA; Aminopeptidase P, APP;
Carboxypeptidase N/M, CPN).
La sévérité de la pathologie est établie selon la fréquence, la localisation et l’âge d’apparition
des crises d’AO. A partir de ces données clinico-biologique, la prédiction de la sévérité de la
maladie a été développée à l’aide de la méthode de régression logistique.
Résultats
Les données mesurées à partir de 111 porteurs de la mutation et 249 non porteurs ont été
comparées. 37 porteurs (33%) sont asymptomatiques, 30 (27%) présentent une
symptomatologie modérée, 35 (31%) une sévérité intermédiaire et 9 sujets (8%) présentent
une pathologie sévère. Le modèle de régression logistique, sélectionné par le critère d’Akaike,
retient les paramètres de l’activité amidase spontanée, l’ECA et la CPN pour expliquer la
sévérité de la maladie. Il retrouve qu’une augmentation de l’activité amidase spontanée
(p<0.001) ainsi qu’une diminution des activités ECA (p<0.01) et CPN (p<0.05) représentent
des facteurs de risques de maladie sévère.
Conclusion
Ces résultats montrent que la sévérité des AO associés à la mutation du gène F12 est corrélée
avec les activités amidase spontanée, ECA et CPN. Ces facteurs de risque sont différents de
ceux observés pour les AO associés à un déficit pour C1Inh où la sévérité est corrélée à
l’activité APP (5). Ceci suggère un mécanisme étiopathogénique distinct entre les deux formes
d’AO, avec l’accumulation de BK pour les AO causés par l’anomalie du gène F12, et
l’accumulation de desArg9-BK pour les AO avec déficit pour C1Inh.
1.
2.
3.
4.
5.
Ghannam A et al. Immunol Allergy Clin North Am 2013;33:513–33.
Cichon S et al. Am J Hum Genet 2006;79:1098–104.
Marcos C et al. Ann Allergy Asthma Immunol 2012;109:195–200.
Defendi F et al. PLoS One 2013;8:e70140.
Drouet C et al. J Allergy Clin Immunol 2008;121:429–33.
P a g e | 45
Journée de la Recherche Médicale 2014
Résultats à long terme de 14 méniscectomies
partielles (méniscoplasties) dans les lésions
méniscales sur ménisque latéral discoïde.
Cheda Bornu Billy, Saragaglia Dominique
Hôpital Sud, CHU de Grenoble
38434 Echirolles
Introduction : L’objectif de ce travail était de présenter les résultats à long terme de 14
méniscoplasties du ménisque latéral discoïde, réalisées entre juillet 1991 et mai 2009 par l’un
d’entre nous.
Matériel et méthodes : La série était composée de 10 patients (14 genoux), 4 hommes et 6
femmes, âgés de 12 à 47 ans (âge moyen : 26,1+/-12,4 ans). Le motif principal de
consultation était des douleurs dans 10 cas, des blocages dans 2 cas et une association
douleurs et blocages dans 2 cas. L’examen clinique retrouvait un ressaut dans 4 cas, une
hydarthrose dans 2 cas et un flessum dans 2 cas. Le diagnostic a été confirmé en
préopératoire par une IRM dans 10 cas, un arthroscanner dans 1 cas et une arthrographie
dans 3 cas. Toutes les interventions ont été indiquées devant un ménisque latéral discoïde
symptomatique. Le geste thérapeutique chirurgical était une méniscoplastie arthroscopique
réalisée par le même chirurgien expérimenté. Les résultats radiologiques et fonctionnels ont
été évalués en fonction des scores de Lyshölm-Tegner, IKDC, KOOS et d’un score de
satisfaction au cours d’une consultation de révision.
Résultats : 8 patients (2 perdus de vue) ont été revus à un recul moyen de 157,5+/-72,1
mois (61 à 276). Le score de Lyshölm-Tegner moyen était de 89,7+/-10,6 points (75 à 100),
le KOOS moyen de 94,9+/- 5,3 (88,1 à 100), le score IKDC moyen de 89+/-11,8 points (74,7
à 100). Sur les 8 patients revus (12 genoux), 8 étaient très satisfaits ou satisfaits du résultat.
En ce qui concerne les résultats radiologiques, le stade de l’arthrose a été évalué en fonction
des critères d’Ahlbäck modifiés. Nous avons constaté 6 stades 1 et 1 stade 2. 5 genoux
n’avaient pas d’arthrose. À ce recul, aucun patient n’a eu de révision chirurgicale.
Discussion : Nos résultats fonctionnels et radiologiques à long terme plaident en faveur de la
réalisation d’une méniscoplastie isolée se poursuivant jusqu’à emporter la lésion. Dans cette
série de patients adultes, compte tenu du type de lésion méniscale retrouvé, à savoir un
clivage horizontal, aucune réparation méniscale n’a été réalisée.
Conclusion : Les méniscoplasties dans les lésions méniscales sur ménisque latéral discoïde
sont un exercice difficile. Les résultats à long terme sont excellents et on ne constate pas de
dégradation arthrosique précoce du compartiment latéral à 13,1 ans de recul.
P a g e | 46
Journée de la Recherche Médicale 2014
Description of BAL Proteome in Lung Transplant
Recipients: Optimization of Sample Analysis and
Comparison with Healthy Volunteers
Johanna Claustre, Hélène Flamant-Waret, Sandrine Bourgoin-Voillard, Izabel Bérard, Sylvia
Lehmann, Candice Trocmé, Bertrand Toussaint, Karine Botturi-Cavaillès, Antoine Magnan,
Laurent Nicod, Christophe Pison, Michel Sève
jclaustre@chu-grenoble.fr
Plateforme de Protéomique Prométhée
Institut Albert Bonniot – INSERM U823
Responsable : Pr. Michel Sève
Plateforme de protéomique Prométhée
Institut Albert Bonniot CS 10219
38043 Grenoble Cedex 9
With more than 39,000 procedures performed around the world in the last 30 years, lung
transplantation (LT) has become a validated therapeutic option for end-stage lung diseases.
The long term survival after LT remains limited because of the onset of Chronic Lung Allograft
dysfunction (CLAD), affecting 50% of LT recipients within 5 years post-LT. Bronchoalveolar
lavage fluid (BAL), is a major tool for LT follow-up as it represents a unique description of lung
allograft microenvironment. Modifications of BAL proteome have been studied in several
chronic lung diseases but little is known about its changes after LT and during complications
such as CLAD.
This study aimed to describe BAL proteome in stable LT recipients, as a first step of SysCLAD,
a FP-7 European program, which will build a systemic model for CLAD prediction (Pison et al.,
2014).
BAL samples were collected from a European prospective cohort of LT recipients. As BAL
samples are basically very salted, an ultrafiltration was performed with Amicon 3 kDa before
fractionation by OFFGEL and nano-HPLC. Data from quantitative iTRAQ-MALDI-TOF/TOF MS
and MS/MS analysis were compared following 2 bioinformatic approaches : ProteinPilot™
software v. 4.0 with the Paragon™ Algorithm (AB Sciex) and MASCOT v. 2.4 (Matrix Science).
We finally identified 539 non redundant proteins in BAL from 2 stable LT recipients. Results
were merged with data from 3 stable lung transplant recipients described in literature: 698
proteins appeared to compose BAL proteome of stable LT recipients. Results were then
compared with previous descriptions of BAL proteome from 18 healthy volunteers. When
focusing on proteins represented in at least 50% of the samples, we identified a common core
of 93 proteins, present in both populations. 80 proteins were specific for LT recipients while
102 were only represented in healthy people. Ontologic analyses showed that differentially
expressed proteins were mainly involved in immune processes and especially in the innate
immune system.
In conclusion, this investigation provides an exhaustive description of BAL proteome in LT
recipients and constitutes an indispensable step in CLAD biomarker identification. This
experimental protocol is highly efficient for protein identification in BAL and will be used to
identify CLAD biomarkers in BAL as a part of the SysCLAD project.
References:
Pison C. et al., Prediction of chronic lung allograft dysfunction: a systems medicine challenge,
European Respiratory Journal 2014: 43:689-693
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Autogreffe ostéochondrale en mosaïque des
condyles fémoraux: résultats à 9 ans de recul
moyen de 24 patients.
J. Cognault*, C.Chaussard*, S.Ionescu*, D.Saragaglia*
*Clinique Universitaire de Chirurgie Orthopédique et de traumatologie du Sport. CHU de Grenoble,
Hôpital Sud. 38130, Échirolles.
Introduction : L’autogreffe ostéochondrale est la technique de restauration cartilagineuse la
plus facilement accessible en pratique clinique courante. Peu d’études font état de résultats à
long terme. Le but de ce travail était d’évaluer les résultats à 9 ans de recul moyen d’une
série continue de patients opérés entre 2001 et 2008.
Matériel et méthodes : Il s’agissait de 24 patients âgés de 28,4 ans en moyenne (16 à 44
ans) et qui présentaient des lésions chondrales stade 3 ou 4 (selon le score ICRS ou ICRSOCD) du condyle médial (19 cas) ou du condyle latéral (5 cas). L’origine de la lésion était soit
une ostéochondrite disséquante (50%), soit une séquelle de fracture ostéochondrale (41%)
soit une ostéonécrose aseptique (9%). La surface moyenne était de 2,11 cm2 +/- 0,9 cm2. Un
patient sur deux avait déjà subi une intervention pour la même pathologie et 9 (37%),
avaient eu un geste associé lors de l’autogreffe ostéochondrale : 3 méniscectomies, 2
ostéotomies, 2 ligamentoplasties du LCA, une ablation de matériel et une transposition de
TTA. L’évaluation a été faite cliniquement (scores IKDC et de Lyshölm-Tegner) et
radiologiquement (20 cas), par un examinateur indépendant des opérateurs.
Résultats : Tous les patients ont été revus à un recul moyen de 9 ans (6 à 15 ans). 79%,
étaient satisfaits ou très satisfaits de l’intervention. L’IKDC moyen était de 75,1 +/- 18,7
points. Le score de Lysholm moyen était de 87,3 +/- 11,6 points. Le score de Tegner moyen
était passé de 6,35 +/-1,53 en préopératoire à 5,53 +/-1,64 en post-opératoire. La perte était
en moyenne de 1,08 point pour les patients dont le « Tegner » Préopératoire était supérieur
ou égal à 7 et de 0,3 points s’il était inférieur à 7. L’évaluation radiologique de 20 patients
montrait une ostéo-intégration complète des greffons dans 90% des cas.
2 patients
présentaient une arthrose stade un du compartiment initialement lésé. 3 arthro-scanners et 2
IRM ont été faits et montraient une intégration parfaite des greffons.
Un patient a été réopéré 3 fois pour ablation des carottes ostéochondrales qui s’étaient toutes
détachées en 7 ans. Un autre patient a présenté une lyse totale de l’os sous chondrale de la
greffe.
Conclusion : Les résultats des autogreffes en mosaïque des condyles fémoraux sont tout à
fait satisfaisants à 9 ans de recul moyen. Cependant, Les patients les plus sportifs baissent
leur niveau d’activité alors que les plus sédentaires oublient leur genou.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
OPTIC CLINIC : Utilisation de l’Imagerie optique
pour les applications cliniques
JL Coll1, Agathe Puszka1, Marion Aribert1,2, Aurélien Gourrier3, Rachel Genthial3, Samy Strola4, JeanClaude Vial3, Jean-Marc Dinten4, Anne Planat-Chrétien4, Michel Berger4, Sylvie Lantuejoul1,2,
Cynthia Hamou1,2, Georges Bettega1,2
1
IAB, La Tronche
2
CHU, Grenoble
3
LiPhy, Grenoble
4
CEA, LETI, Grenoble
OPTIC CLINIC est un plateau technologique du CHU, mutualisé avec l'UJF, le CEA, le CNRS
et l'INSERM, pour permettre l'introduction en clinique de méthodes optiques innovantes. Trois
programmes sont en cours:
1. Suivi des paramètres vasculaires et de l’oxygénation de lambeaux de peaux
post-opératoire (A Puszka, M Aribert, A Planat-Chrétien, C Hamou, M Berger, G
Bettega, JM Dinten, JL Coll) Les résultats préliminaires obtenus (voir abstract A Puszka)
montrent qu’il est possible de détecter des occlusions veineuses et artérielles, de les
différencier et de calculer les variations de concentration moyenne en Hb et HbO2 chez le rat.
OC permet ensuite de transférer cette étude au lit du patient.
2. Étude du réseau ostéocytaire/canaliculaire des tissus osseux par imagerie de
fluorescence biphotonique (2PE) et par génération de seconde harmonique (SHG) (A
Gourrier, JC Vial) : Les résultats préliminaires montrent qu'il est possible d'imager,
simultanément, le réseau lacuno-canaliculaire entourant les ostéocytes par 2PE et
l'organisation du collagène tissulaire par SHG. Ces informations intrinsèquement colocalisées
permettent d'aborder l'effet du remodelage osseux tant sur le plan cellulaire, par l'analyse de
l'organisation des ostéocytes, que tissulaire, à travers l'organisation du collagène. Le fort
sectionnement optique de l'imagerie non-linéaire, associé à la profondeur de pénétration
accrue dans les longueurs d'ondes proches de l'infrarouge, offre, ainsi, de fortes perspectives
en anatomopathologie.
3. Mise en place d’un système d’imagerie sans lentille et de microscopie Raman
pour la caractérisation de zones saines par le pathologiste. (S Strola, S Lantuejoul,
JM Dinten, JL Coll). La spectroscopie Raman permet l’identification, le suivi et la
compréhension des processus biochimiques intracellulaires, sans marquage. Elle est non
destructrice et peut servir notamment pour l’analyse biochimique pour le diagnostic rapide du
cancer sur prélèvement frais. Des mesures réalisées sur un prototype sur des lymphomes B
nous permettent d’obtenir des spectres pertinents dans lesquels les contributions des
macromolécules d’intérêt sont discriminées et classifiées : les protéines via les vibrations des
amides I/III, l’ADN (bandes d’adénine), les lipides via δ(CH2). Des différences entre les tissus
lymphomateux et les tissus témoins, mais aussi entre les 2 sous types histogénétiques sont
visibles mais nécessitent d’être confirmées.
P a g e | 49
Journée de la Recherche Médicale 2014
Identification du gène DNAH1 dans les
anomalies flagellaires multiples responsables
d’une infertilité masculine primaire.
Charles Coutton1, Mariem Ben Khelifa2, Raoudha Zouari3, Thomas Karaouzène 2, PierreSimon Jouk4, Christophe Arnoult5 and Pierre F. Ray2
1
UJF / CNRS / Laboratoire AGIM, CNRS FRE3405, Equipe « Andrologie et Génétique »,
F 38700, France ; UF de Génétique Chromosomique, Hôpital Couple Enfant, CHU
Grenoble, Grenoble
2
UJF / CNRS / Laboratoire AGIM, CNRS FRE3405, Equipe « Andrologie et Génétique »,
F 38700, France ; UF de Biochimie et Génétique Moléculaire, DBTP, CHU Grenoble,
Grenoble, France
3
Clinique des Jasmins, Tunis, Tunisie
4
UF de Génétique Clinique, Hôpital Couple Enfant, CHU Grenoble, Grenoble
5
UJF / CNRS / Laboratoire AGIM, CNRS FRE3405, Equipe « Andrologie et Génétique »,
F 38700, France
Introduction : Aujourd’hui, entre 10 à 15% des couples sont confrontés à des problèmes
d’infertilité. Dans près de la moitié des cas, une origine masculine est retrouvée avec souvent
un défaut qualitatif des spermatozoïdes. Une origine génétique est probable dans la plupart
des cas mais jusqu’alors seuls quelques gènes ont pu être formellement reliés à l’infertilité
masculine. L’identification et la caractérisation de nouveaux gènes sont donc primordiales
pour améliorer le conseil génétique et la prise en charge des hommes infertiles.
Matériel et Méthodes : Dans cette étude nous avons réalisé l’analyse par cartographie par
homozygotie de 20 patients présentant une infertilité primaire recruté à la Clinique des
Jasmins (Tunis, Tunisie). Les spermes de ces patients combinent plusieurs anomalies
morphologiques du flagelle (absent, court, courbé, enroulé et de diamètre irrégulier)
regroupés sous le terme de « MMAF » (Multiple Morphological Anomalies of the Flagella). Tous
les patients sont d’origine Nord-Africaine (11 Tunisiens, 7 Algériens et 2 Libyens). Douze
d’entre d’eux sont issus d’unions consanguines au premier degré. Aucun patient n’est
apparenté à part 3 frères inclus dans la cohorte.
Résultats : Trois gènes candidats ont été retenus : KIF9, SPAG4 et DNAH1. Aucun variant
pathogène n’a été retrouvé dans les deux premiers gènes. Cinq mutations homozygotes ont
été retrouvées dans le gène DNAH1 codant pour une chaine lourde des bras internes de
dynéine exprimée dans le testicule: deux mutations situés respectivement sur des sites
consensus donneurs et accepteurs d’épissage, une mutation run-on abrogeant le codon stop
et une mutation faux-sens potentiellement délétère. La mutation localisée sur un site
accepteur a été retrouvé chez quatre patients dont les 3 frères inclus dans la cohorte.
Des analyses de RT-PCR, immunofluorescence (IF) et microscopie électronique ont pu être
réalisées chez un des frères présentant la mutation d’épissage. Il a été observé une absence
totale de transcrits chez ce patient ainsi qu’une disparation complète de la protéine DNAH1 au
niveau de l’axonème du flagelle du sperme confirmant le caractère pathogène du variant. Une
désorganisation générale et sévère de l’axonème incluant une disparation des doublets
centraux et des bras internes de dynéine a été observée. Bien que DNAH1 soit exprimée dans
d’autres cellules ciliées, aucun autre symptôme relatif aux ciliopathies, à part l’infertilité, n’a
été observés chez ces patients. Les analyses par RT-qPCR montrent un profil d’expression de
DNAH1 prédominant au niveau testiculaire par rapport à d’autres tissus ciliés et aux autres
dynéines axonèmales des bras internes proches phylogénétiquement de DNAH1.
Conclusion : Au final, nous avons identifié DNAH1 comme le premier gène codant pour une
dynéine axonèmale responsable uniquement d’infertilité masculine. L’ensemble de ces
résultats suggèrent que DNAH1 est une protéine primordiale dans la biogenèse
et l’organisation de l’axonème du flagelle du sperme.
P a g e | 50
Journée de la Recherche Médicale 2014
Improvements of Sample Preparation Strategies
for the Research of Protein Biomarkers
in Plasma
Valérie Cunin
1,2
, Hélène Guiguet-Coradin2, Christelle Melo-de-lima3, Michel Seve1,2,
Sandrine Bourgoin-Voillard1,2
VCunin@chu-grenoble.fr
Plateforme de Protéomique Prométhée
Univ. Grenoble Alpes, Institut Albert Bonniot INSERM U823, CHU Grenoble
Institut de Biologie et Pathologie - CS 10219
38043 Grenoble Cedex 9
Responsable : Pr. Michel Sève
Human plasma has an attractive clinical value for the discovery of proteomics biomarkers.
However, the intrinsic dynamic range of plasma proteins makes the analysis very challenging.
Detection of low abundance proteins which could contain potential biomarkers tend to be
masked by a few proteins presents in high concentration. Therefore, plasma fractionation
before LC-MS analysis is crucial to access to the depth proteome. Since the last decade, many
efforts were done in development of pre-fractionation methods to remove the proteins in high
abundance, thereby, improve the identification of proteins in low abundance. In this study, we
proposed a new pre-fractionation strategy that consists in the combination of two prefractioning methods which are equalization (Proteominer kit) and immunodepletion (human
14 MARS column). We also highlighted the importance of the workflow in such studies by
comparing results obtained from the following workflows: i) immunodepletion, ii) equalization
step, iii) immunodepletion followed by an equalization step and iv) an equalization step
followed by immunodepletion. Our data showed that the number of identified proteins is
higher especially for proteins in low abundance when immunodepletion is followed by an
equalization step. This workflow is processed four times using the iTRAQ labeling as a relative
quantitation method in order to verify the repeatability of this complex fractioning. A
coefficient variation is established by bio-statistical approach and we evidenced here a few
parameters (with regard to peptides proprieties) that may influence this CV value of the
method. Thus, our data showed that the research of protein biomarkers in plasma samples
could be improved by performing immunodepletion followed by an equalization step prior LCMS analysis. We confirmed a good repeatability of this method and evidenced what peptide
properties could induce or limit errors in such studies.
P a g e | 51
Journée de la Recherche Médicale 2014
Une géographie de la santé des travailleurs ?
Intégration de données relatives à la santé au
travail au moyen d’un Système d’Information
Géographique (SIG).
M. Delaunay, S. Faye, V. Godard, R. de Gaudemaris, V. Bonneterre
Laboratoire Techniques de l’Ingénierie Médicale et de la Complexité - Informatique, Mathématiques et
Applications, Grenoble (TIMC-IMAG), Directeur : Philippe Cinquin
Equipe Environnement et Prédiction de la Santé des Populations (EPSP) Equipe de Médecine et Santé au
Travail – Faculté de Médecine – Domaine de la Merci – 38076 La Tronche cedex
Cadre de la recherche. La vigilance et la prévention des maladies professionnelles sont des
enjeux majeurs en santé publique car ils concernent la santé et la sécurité d’une immense
majorité de personnes : les travailleurs. Jusqu’à présent, dans le domaine de la santé au
travail, les fonctionnalités des SIG [1] ont été exploitées de manière partielle, sans démontrer
tous leurs intérêts [2]. Ces outils possèdent pourtant de nombreux atouts pouvant les amener
à devenir incontournables dans l’aide à la vigilance et à la prévention des maladies en lien
avec le travail.
Objectif. Développer un outil au service de la veille sanitaire des pathologies professionnelles
qui permettrait un retour vers la prévention, en s’appuyant sur les données du rnv3p [3] mais
également d’autres sources de données complémentaires pertinentes et disponibles.
Méthode. Notre projet s’appuie sur les bases de données du rnv3p créé en 2001 au CHU de
Grenoble ainsi que sur celles de la Carsat-RA [4] et de la Cnam-TS [5].
Résultats. Pour la première partie de notre projet, nous avons travaillé sur un secteur
d’activité, celui de la microélectronique. Les différentes informations, disponibles au sein des
différentes bases ou encore non formalisées (données qualitatives), ont été structurées selon
leur nature (type d’activité, couverture sanitaire, problème de santé) et ont été ajouté à
différentes échelles géographiques. La deuxième partie de notre projet concerne la
caractérisation du réseau. Pour cela, nous travaillons principalement sur l’adressage des
patients dans les CCPP [3] et les aires géographiques de recrutement de ceux-ci.
Conclusion. A travers la combinaison de différentes sources de données complémentaires,
l’élaboration de diagnostics territoriaux précis (par secteur d’activité par exemple) ou encore
la définition d’échelles d’actions pertinentes, les SIG permettent de territorialiser le
phénomène des maladies professionnelles tout en le situant dans un contexte géographique
global (population, système de santé, emploi, transports, etc...) visualisable à différentes
échelles (nationale, régionale, locale).
[1] SIG : Système d’Information Géographique : outil informatique permettant de stocker,
gérer, traiter et représenter l’information géographique. Bien que récente, l’utilisation des SIG
dans le domaine de la santé est désormais une étape importante, notamment pour « produire
de nouvelles informations à partir de données existantes » (In « Géographie de la santé »,
sous la direction de Sébastien Fleuret et Jean-Pierre Thouez, Economica, Antropos, 301
pages).
[2] Neff RA, Curriero FC, Burke TA. Just in the wrong place...?: geographic tools for
occupational injury/illness surveillance. American journal of industrial medicine. 2008
Sep;51(9):680-90.
[3] rnv3p : Réseau National de Vigilance et de Prévention des Pathologies Professionnelles.
Constitué d’experts et de praticiens hospitalo-universitaires, le rnv3p regroupe 32 Centres de
Consultation et de Prévention des Pathologies Professionnelles (CCPP) qui recueillent de façon
systématique et standardisée des données issues des consultations de pathologies
professionnelles.
[4] Carsat-RA : Caisse d’Assurance Retraite et de la Santé Au Travail – Rhône-Alpes.
[5] Cnam-TS : Caisse Nationale d’Assurance Maladie – Travailleurs Salariés.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Développement d’un programme en Activités
Physiques Adaptées au domicile
suivi sur le NET
1
M Depalma1, A Monray2, D Tessier3, P Flore4,5, N Vuillerme1
Univ. Grenoble Alpes, AGIM, F-38000, Grenoble, F-38000,
2
Association Ligue Rhône Alpes APA-CONCEPT F-38000,
3
Univ. Grenoble Alpes, SENS, F-38000,
4
Univ. Grenoble Alpes, HP2, F-38000,
5
INSERM, HP2, F-38000
Grenoble,
Grenoble,
Grenoble,
Grenoble,
Grenoble,
France
France
France
France
France
Intérêt-cadre de la recherche.
L’Activité Physique Adaptée (APA) regroupe l’ensemble des activités physiques et sportives,
adaptées aux capacités de la personne vieillissante, en situation de handicap, atteintes de
maladies chroniques ou en difficultés sociales, dispensées à des fins de rééducation, de
réadaptation, de réinsertion, d’éducation, de participation sociale mais aussi de prévention.
Le vieillissement pathologique peut être prévenu voire traité par l’APA.
Objectif scientifique
Evaluer l’intérêt des participants et l’efficacité d’un programme d’APA en télé-suivi pour
prévenir la perte d’autonomie.
Méthodes.
Deux groupes de plus de 65 ans autonomes (1) Contrôle sans télé-suivi (C, n=18) et (2)
« Expérimental avec télé-suivi » (TS; n=47) ont bénéficié d’un programme APA de 4 mois (1
séance collective, 2 séances individuelles à domicile, 3h/sem). Le groupe C avait pour
consigne de réaliser 2 séances APA en autonomie à domicile. Pour le groupe TS, nous avons
déployé une solution de télé-suivi : envoi des séances d’APA par messagerie et possibilités
d’échanges avec l’enseignant APA). Des évaluations sensori-motrices, physiques et psychosociales ont été conduites Pré et Post 4 mois d’APA. Seuls les résultats du groupe C sont
présentés dans ce résumé, TS étant en cours d’évaluation
Résultats.
Alors que l’adhésion des participants de C aux séances collectives APA est de 100%, celle aux
séances individuelles à domicile est faible (25%), les séances étant vécues comme
fastidieuses. L’endurance (nombre d’élévations de genou en 2 min : 60 ± 23 ; 60 < normale <
100) et la coordination motrice (temps de parcours : 14 ± 3 s ; normale < 11,3 s) sont
inférieures à la normale ou situées à la limite inférieure de la normale. Seules la coordination
motrice (temps de parcours Post APA : 12 ± 2 s vs 14 ± 3 s Pré APA; p < 0,01) et l’endurance
(nombre d’élévations de genou en 2 min Post APA: 68 ± 26 vs 60 ± 23 Pré APA; p < 0,01 ; 60
< Normale <100).
Conclusions.
Les résultats préliminaires de cette étude obtenus dans C confirment le déconditionnement
bien connu des personnes âgées. Notre programme améliore quelques variables de la
condition physique mais les effets sont plutôt faibles. L’adhésion aux séances individuelles de
C confirme le manque d’engagement des personnes âgées (pourtant en bonne santé) à
l’activité physique. Les niveaux d’activité physique recommandés (2,5 h d’APA
modérée/semaine) ne sont pas atteints, expliquant les effets modestes du programme dans ce
groupe. Le groupe TS, bénéficiant d’un télé-suivi APA à domicile, est actuellement pris en
charge et semble pour l’instant plus assidu aux séances à domicile. En cas de confirmation, le
programme APA pourrait être plus efficace, justifiant l’intérêt d’un télé-suivi APA à domicile en
complément d’une séance APA collective pour prévenir la perte d’autonomie.
Remerciements pour leur soutien financier : Conseil Général de l’Isère, Structure Fédérative
de
Recherche
Sport – Exercice – Motricité,
Institut
de
Recherche
Technologique
NanoElectronique – Programme Technologies de Liaison (IRT NanoElec – PTL), Institut
Universitaire de France (IUF)
P a g e | 53
Journée de la Recherche Médicale 2014
COB223: un inhibiteur chimique de
l’angiogenèse et de la tumorigenèse ciblant la
voie MAPK.
Agnès Desroches-Castan*$, Delphine Quélard*$, Jean-François Constant$°, Martine
Demeunynck$#, Caroline Barette$§, Laurence Lafanechère$+, Michelle Keramidas$+, Jean-Luc
Coll$+, Jean-Jacques Feige*$
* Inserm U1036, CEA/DSV/iRTSV/Biologie du Cancer et de l’Infection, 17 Av. des Martyrs,
38054 Grenoble, France, directeur Jean-Jacques FEIGE
$ Université Joseph Fourier-Grenoble 1, FRANCE
§ CEA/DSV/iRTSV/Biologie à Grande Echelle, 17 Av. des Martyrs, 38054 Grenoble, France
° CNRS UMR 5250, Département de Chimie Moléculaire, BP 53, 38041 Grenoble, France
# CNRS UMR 5063, Département de Pharmacochimie Moléculaire, BP 53, 38041 Grenoble,
France
+
Inserm U823, Institut Albert Bonniot, 38706 La Tronche, France
Intérêt et cadre de la recherche :
Ces dernières années, des thérapies anti-tumorales ciblant l’angiogenèse ont été développées et ont
montré un bénéfice dans le traitement de certains cancers métastatiques. Cependant, dans de
nombreux cas, les tumeurs acquièrent des résistances et on observe un échappement tumoral. Le
développement de nouveaux composés anti-angiogène est donc une réelle nécessité pour proposer
une seconde ligne thérapeutique.
Objectif scientifique :
Notre objectif était d’identifier de nouvelles molécules originales anti-angiogène par criblage à haut
débit, de la chimiothèque académique (1360 molécules) de l’Université de Grenoble.
Méthodes :
Nous avons adapté le test de blessure sur cellules endothéliales au format des plaques de 96 puits
puis déposé les molécules de la chimiothèque. Nous avons étudié l’effet anti-angiogène et antitumorale de la molécule la plus efficace et déterminé son mécanisme d’action.
Resultats :
Nous avons identifié une famille de molécules qui inhibent spécifiquement la migration des cellules
endothéliales avec une EC50 de 5 à 20 µM alors que l’EC50 est de 50 à 200 µM sur des fibroblastes.
L’activité anti-angiogène de la molécule leader (COB223) a été confirmée par des modèles
d’angiogenèse tridimensionnels : bourgeonnement de sphéroïdes endothéliaux, formation de
pseudo-capillaires par différenciation de cellules souches embryonnaires murines. L’activité antiangiogène de COB223 a été démontrée in vivo par un modèle d’implantation en sous-cutanée
d’éponge imbibée de FGF-2 et par imagerie de fluorescence non-invasive. Nous avons testé l’activité
anti-tumorale de COB223 dans un modèle de xénogreffe chez la souris. Nous avons injecté des
cellules LLC (Lewis Lung Carcinoma) exprimant la luciférase dans des souris nude. Nous les avons
traitées en intrapéritonéal avec 0.16 ou 0.4 mg/kg de COB223. Nous avons observé une diminution
significative de la taille des tumeurs dans les souris traitées. Ceci est corrélé avec une diminution
de la densité microvasculaire et de plus grandes régions nécrotiques dans les tumeurs traitées. A la
recherche de son mécanisme d’action, nous avons observé que COB223 inhibe la prolifération des
cellules endothéliales et des cellules tumorales. Il réduit la phosphorylation de MEK et de p42-p44
MAPK induite par le VEGF-A dans les cellules endothéliales. COB223 n’a pas d’effet sur les voies de
signalisation p38 MAPK et AKT, et n’inhibe pas les phosphorylations du VEGFR2 et de PLC. Nous
avons observé qu’inhiber la voie PKC dans les cellules endothéliales empêche la phosphorylation de
MEK et p42/p44 MAPK induite par le VEGF-A. Au vu de ces résultats, nous proposons que la cible de
COB est localisée dans la voie de signalisation VEGF/ PLC /PKC/MAPK entre PKC et MEK.
Conclusions :
Nous avons identifié un composé original présentant une activité anti-angiogène et anti-tumorale à
la fois in vivo et in vitro et qui cible la voie de signalisation MAPK.
Patent « composés anti-angiogéniques, compositions pharmaceutiques les comprenant, et leur
utilisation. » Feige JJ, Castan A, Quelard D, Demeunynck M, Constant JF, Barette C., January
31st,2011, n°11/00277, CNRS, PCT extension 31st January, 2012.
Mail : agnes.castan@cea.fr ; Appartenance EDCSV
P a g e | 54
Journée de la Recherche Médicale 2014
Etude de la connectivité fonctionnelle et
structurelle des régions cérébrales frontolimbique dans le trouble bipolaire :
Pauline Favre1, Monica Baciu1, Cédric Pichat1, Thierry Bougerol2,3 & Mircea Polosan2,3
2
1
Univ. Grenoble Alpes, CNRS, LPNC UMR 5105, F-38040 Grenoble
CHU de Grenoble, Pôle Psychiatrie et Neurologie, Centre Expert en Troubles Bipolaires, F-38000,
Grenoble, France
3
Univ. Grenoble Alpes, INSERM, CHU de Grenoble, GIN, F-38000 Grenoble, France
Introduction : Les troubles bipolaires (BP) sont principalement caractérisés par l'alternance
d'états euphoriques (maniaques) et dépressifs. Lors de ces périodes aiguës de la maladie les
patients BP éprouvent des troubles émotionnels et cognitifs importants, qui peuvent persister
pendant les périodes euthymiques. Il a récemment été suggéré par des études resting-state
(rs-IRMf) et par imagerie par tenseur de diffusion (DTI) que la présence d’anomalies de
connectivité entre le cortex préfrontal (CPF) et les régions limbiques pourrait sous-tendre le
dérèglement affectif caractérisant le trouble BP (Vargas et al., 2013, Nortje et al., 2013, Favre
et al, accepted). Cette étude vise à évaluer conjointement le profil de connectivité anatomique
(DTI) et fonctionnelle (rs-IRMf) chez les patients BP euthymiques afin d’identifier des
caractéristiques traits de la maladie BP (i.e., non dépendantes de l’état maniaque ou
dépressif).
Méthodes : Les données rs-IRMf et DTI ont été obtenues auprès de 20 patients BP et 20
sujets sains. L’analyse des données resting-state a été effectuée avec une approche seedbased permettant le calcul de cartes de connectivité entre le cortex préfrontal médial (mPFC)
et l’ensemble des voxels du cerveau. Une analyse par région d’intérêt (ROI) supplémentaire a
porté sur la connectivité mPFC-amygdale. Pour chaque sujet, les données DTI ont été traitées
et analysées par le logiciel FSL (groupe FRMIB, 2012) afin d’obtenir les valeurs d'anisotropie
fractionnelle (FA) de l'ensemble du cerveau. Les valeurs de FA du faisceau unciné en
particulier ont été extraites et comparées entre les groupes. Enfin, une analyse
corrélationnelle entre les valeurs de FA du faisceau unciné et de la connectivité mPFCamygdale (z-scores) a été effectuée pour chaque groupe.
Resultats: Les résultats au repos montrent une augmentation considérable de la connectivité
mPFC-amygdale droite chez les patients BP par rapport aux sujets sains. Plus
particulièrement, les patients BP présentent une corrélation positive significative entre
l’activité du mPFC et de l'amygdale droite, alors que cette corrélation n'est pas significative
chez les sujets sains. Les résultats DTI révèlent une diminution tendancielle (p=.08) de la FA
au niveau du faisceau unciné droit chez les patients BP. En outre, la valeur FA de faisceau
unciné corrèle négativement avec la connectivité fonctionnelle mPFC-amygdale chez les
patients BP, ce qui n’est pas le cas chez les sujets sains.
Conclusion : Nos résultats confortent les résultats précédents rapportant une connectivité
fronto-limbique anormale chez les patients BP. De plus, nous avons montré que
« l'hyperconnectivité » fonctionnelle du mPFC et de l'amygdale chez les patients BP pourrait
être sous-tendue par une diminution l'intégrité structurelle du faisceau unciné. De plus, ces
anomalies cérébrales semblent être une caractéristique trait de la maladie car elles persistent
lors des périodes euthymiques. Des études longitudinales seraient nécessaires pour évaluer
l’impact de ces anomalies sur un plan clinique et pronostique de la maladie bipolaire.
P a g e | 55
Journée de la Recherche Médicale 2014
Validation de la protéine kinase CK2 et des
facteurs uPA/PAI-1 comme biomarqueurs dans
les cancers du sein: facteurs pronostiques
indépendants ou associés ?
Mathias Wolf, Dominique Pasquier, Marlène Debiossat, Anne-Sophie Gauchez, Raoul Payan, Mireille
Mousseau, Claude Cochet, Odile Filhol
INSERM U1036, iRTSV/BCI CEA Grenoble, 17 rue des Martyrs, 38054 Grenoble cedex 9
odile.filhol-cochet@cea.fr ; tel:33 (0)4 38 78 56 45 ; Fax : 33 (0)4 38 78 50 58
La protéine kinase CK2 est une enzyme mutifonctionnelle qui phosphoryle de nombreuses
protéines régulant les voies de signalisation intracellulaire. Au plan structural, la CK2 existe
sous forme d’un tétramère actif qui contient deux sous-unités catalytiques α ou α’ (38-42
kDa) et deux sous-unités régulatrices  (24-28 kDa) Son implication dans le cancer du sein
est maintenant clairement démontrée : Une première étude visant à valider CK2 comme
marqueur pertinent, a été réalisée à partir de lignées cancéreuses mammaires bien
caractérisées mais également sur une cohorte de 1000 patientes atteintes de tous types de
cancers du sein. Elle a clairement montré qu’une dérégulation de l’expression des deux sous
unités de CK2 est associée à des critères de mauvais pronostic. Cette étude a permis deux
observations majeures: 1) une surexpression de CK2α est associée à des facteurs de mauvais
pronostic notamment à l’apparition de métastases ; 2) un déficit dans l’expression de CK2β
est corrélé in vivo et in vitro avec une EMT (Transition Epithélio-Mésenchymateuse) et
l’acquisition de caractéristiques de cellules souches. CK2 est donc un régulateur déterminant
dans la plasticité cellulaire mise en jeu lors du processus de dissémination métastatique.
Nous souhaitons valider CK2 en tant que nouveau marqueur en le confrontant aux marqueurs
impliqués dans la dissémination des cellules souches cancéreuses (EMT, uPA/PAI1, hypoxie).
L’étude consiste à évaluer par dosage enzymatique et par Western Blot l’activité catalytique et
l’expression des sous-unités de CK2 sur une cohorte de 548 patientes suivies depuis 2010. Le
profil d’expression des sous-unités de CK2 sera corrélé à d’autres facteurs pronostiques tels
que uPA, PAI-1, E-cadherine, Claudine-1, Vimentine, Snail-1, Glut-1, Récepteurs hormonaux,
HER2….
Notre ambition est d’apporter la preuve de concept que CK2 en tant que biomarqueur, peut
contribuer à l’élaboration d’une signature pour une sous-population dont l’évaluation
permettra à la fois une meilleure classification des tumeurs mais également l’élaboration de
nouveaux protocoles thérapeutiques.
Résultats attendus :
L’identification de nouveaux biomarqueurs du pronostic des tumeurs du sein peut représenter
une aide à la mise en place de la stratégie thérapeutique et les études de corrélation
permettent d’évaluer la valeur ajoutée d’un biomarqueur donné par rapport aux autres outils
existants.
Dans ce cadre, on a pu assister au cours des dernières années à une évolution spectaculaire
concernant l’intérêt médical pour CK2. Sa validation comme biomarqueur émergeant dans
différentes pathologies cancéreuses en fait également une cible attractive pour la recherche
de petites molécules d’intérêt thérapeutiques. Ainsi, le premier inhibiteur chimique de CK2
administrable par voie orale (CX-4945) est en essais cliniques aux USA (Marschke, 2011).
CK2 a donc atteint le statut de biomarqueur théranostique. Notre ambition est de l’inclure
dans une nouvelle signature moléculaire utile cliniquement pour la prise en charge des
patientes.
Ce travail est soutenu par l’association Espoir
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Vasoréactivité de la choroïde et de la tête du
nerf optique en hypoxie, hyperoxie
chez les sujets sains
GALLICE M, ZHOU T, GEISER MH, TRUFFER F, ROMANET JP, APTEL F, CHIQUET C
Plateforme de fluxmétrie et chronobiologie, INSERM U1042
Laboratoire Hypoxie et physiopathologie cardiovasculaire et respiratoire
Clinique Universitaire d’Ophtalmologie, CHU de Grenoble
Haute Ecole Valaisanne, Sion, Suisse
Intérêt et cadre de la recherche : Des anomalies de la vascularisation de la choroïde et de
la tête du nerf optique sont responsables de pathologies potentiellement cécitantes, telles que
le glaucome à angle ouvert, la neuropathie optique ischémique, ou la choroïdérémie. les
différences embryologiques vasculaires de la choroïde et de la tête du nerf optique (TNO) ainsi
que l’absence d’innervation de la TNO laissent présager une réponse différente lors des tests
vasoactifs.
Objectif scientifique : Afin de caractériser les réponses physiologiques, nous étudions la
vasoréactivité de la choroïde et de la TNO en hypoxie (FiO2 10,5%), en hyperoxie (FiO2
100%), en hypercapnie (pour obtenir une augmentation de la PetCO2 de 10mmHg) et en air
ambiant chez des sujets sains.
Méthodes : Seize sujets sains, âgés de 21 à 49 ans ont été inclus dans cette étude
(promoteur : CHU de Grenoble). Le protocole comportait une période initiale de référence,
une période de 15 minutes d'inhalation des gaz, et une période de retour. Le flux sanguin
oculaire a été mesuré par laser Doppler fluxmètrie, technique validée, non invasive, pour
l’étude du flux sanguin au niveau de la TNO et au niveau de la choroïde (rétro-maculaire). Au
total, douze mesures de 30 secondes ont été réalisées, pour chaque condition de mélange
gazeux : 3 pendant la période initiale de référence, 5 pendant la période d’inhalation des gaz
et 4 pendant la période de retour. Les paramètres hémodynamiques (pression artérielle,
fréquence cardiaque) et respiratoires (fréquence respiratoire, SpO2, pression télé-expiratoire
en CO2) étaient surveillés tout au long de l’expérimentation.
Résultats : Nous avons observé une augmentation de 30±10% du flux sanguin de la TNO en
hypoxie et une diminution de 12±7% en hyperoxie. Le flux sanguin choroïdien ne varie pas
significativement en condition d’hypoxie ou d’hyperoxie.
Conclusion : Les mécanismes physiopathologiques font intervenir, en hypoxie aigue, le
monoxyde d’azote (NO), responsable d’une vasodilatation et, en hyperoxie, l’endothéline 1
(ET-1), à l’origine d’une vasoconstriction des capillaires de la tête du nerf optique. L’absence
de réponse de la choriocapillaire pourrait s’expliquer par l’absence de certains médiateurs
(prostacycline) ou par sa grande capacité de réserve en oxygène. Cette étude ouvre des
perspectives pour l’étude du flux sanguin oculaire, en particulier chez les patients porteurs
d’un syndrome d’apnées du sommeil, de diabète ou de glaucome chronique.
P a g e | 57
Journée de la Recherche Médicale 2014
Pharmacogenetic study and longitudinal
therapeutic drug monitoring of voriconazole in
allogeneic hematopoietic stem cell
transplantation patients
Elodie GAUTIER-VEYRET1, Xavier FONROSE1, Julia TONINI1, Anne THIEBAUT-BERTRAND2, Mireille
BARTOLI1, Claude-Eric BULABOIS2, Jean-Yves CAHN2, Françoise STANKE-LABESQUE1
1
Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie, CHU Grenoble, INSERM U1042
2
Département d’Hématologie Clinique, CHU Grenoble
Contact : EGautier@chu-grenoble.fr
Adresse : Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie, Institut de Biologie et Pathologie R+2, CHU
Grenoble, CS10217, 38043 GRENOBLE
Background - Voriconazole (VRC) is an antifungal largely used in allogeneic hematopoietic
stem cell transplantation patients (AHSCT) as the first-line treatment of invasive aspergillosis.
Its plasma trough concentrations (VRC Cmin) are highly variable, that could affect treatment
efficacy and safety.
Objectives - To describe the initial and temporal variations of VRC Cmin throughout the
course of VRC therapy and to identify the determinants of the variability of the first and the
subsequent VRC Cmin.
Methods – 34 AHSCT patients who experienced three or more VRC Cmin determinations
during therapeutic drug monitoring were included. Biological, clinical data and records
concerning VRC therapy and others medications were retrospectively collected. Genotype of
CYP2C19 and CYP3A was determined on samples taken before the allograft and a genetic
score taking into account CYP2C19 and CYP3A activities was calculated for each patient.
Results – VRC Cmin (n= 316) inter- and intra-individual coefficients of variation were 87 %
and 70 % respectively, resulting in 39 % VRC Cmin out of the therapeutic range. VRC dose
was poorly correlated to VRC Cmin (r=0.324; p=<0.0001). After adjustment to VRC dose, the
first VRC Cmin/dose was influenced by the route of administration (p=0.04) and the genetic
score, especially for oral treatment (p=0.01). During therapeutic drug monitoring, route of
administration, diarrhea and corticoid treatment did not impact subsequent VRC Cmin/dose,
whereas pump proton inhibitor did: esomeprazole was associated with increased VRC
Cmin/dose compared to pantoprazole (post-hoc test: p=0.002).
Conclusion - VRC Cmin displayed a high variability in recipients of AHSCT that could be
partially explained by variable routes of administration, concomitant treatment with pump
proton inhibitor and genetic score. This study suggests the interest of CYP2C19 and 3A
genotype determination to individualize a priori the first VRC dose, and underlined the need
of therapeutic drug monitoring to adapt the following doses.
P a g e | 58
Journée de la Recherche Médicale 2014
Radiothérapie par photoactivation de
nanoparticules et effet Mössbauer
Paul Gimenez1,2, Hélène Elleaume1, Jean-Luc Ravanat2
paul.gimenez@esrf.fr
16 impasse des Lauriers
1
Equipe 6 Grenoble Institut des Neurosciences
71, avenue des Martyrs, 38000 Grenoble
2
Lésions des Acides Nucléiques / CEA Grenoble
17 avenue des Martyrs; 38054 Grenoble Cedex 9
L’effet Mössbauer est très utilisé en spectroscopie pour la physique du solide depuis sa
découverte en 1958. L’absorption résonante et sans recul et la réémission de rayons gamma
par des isotopes Mössbauer (p. ex. Fe57) conduit à la production de nombreux électrons Auger
de faible portée (quelques nanomètres). Ces électrons peuvent induire des dommages
complexes à l’ADN comme des cassures double brins, et peuvent déclencher l’apoptose des
cellules.
L’augmentation du dépôt de dose (en Joules par kg) par effet Mössbauer a été montrée
pour la première fois par Mills et al. en 1988. D’autres études, expérimentales ou par
modélisation, ont tour à tour confirmé ou infirmé ces résultats. Les différences de résultat
proviennent de la difficulté de condition adaptées pour obtenir une résonance Mössbauer :
énergie des photons [14.4 keV], réseau cristallin de l’isotope, ...
Le rayonnement synchrotron offrant des propriétés adaptées à la résonance Mössbauer
(flux important et contrôle précis de l’énergie), nous tentons d’évaluer l’efficacité de
nanoparticules de fer (NPFe) enrichies en 57Fe pour augmenter la dose déposée sous
irradiation. L’aspect NPFe permet de concentrer de manière localisée une grande quantité
d’isotopes de Fer 57. Une forte augmentation de dépôt de dose est attendue à l’énergie de
résonance en présence de NPFe, due à l’effet Mössbauer.
Afin de mesurer cette augmentation de dose dans des échantillons liquides, un dosimètre
chimique fluorescent liquide (la coumarine) permettant de mesurer la production de OH° in
situ sera utilisé. Ses caractéristiques complètes (dépendance en dose, en débit de dose,
stabilité, reproductibilité) sont en cours de détermination.
Des NPFe introduites dans du gel d’agarose et irradiées sur la ligne ID18 dédiée à l’effet
Mössbauer, présentent un spectre de Diffusion Nucléaire Inélastique qui traduit une Densité
d’état des Phonons similaire à du fer solide. Ce résultat permet d’affirmer que l’effet
Mössbauer peut avoir lieu à température ambiante dans des NPFe au sein d’un matériau à la
rigidité voisine des tissus. La température et le mouvement des nanoparticules ne détruisent
pas le signal Mössbauer.
En parallèle de cette étude sur l’effet Mössbauer, l’effet photoélectrique est également testé
sur ces NPFe. Des cellules mises en présence de nanoparticules de fer et irradiées à
différentes énergies sur ID17 présentent une survie moindre à cause des photoélectrons
produits par l’interaction d’un rayonnement de faible énergie avec des atomes lourds. La
survie varie en fonction de l’énergie, selon l’augmentation de l’interaction physique entre
photons et NPFe.
En conclusion les expériences menées jusqu’à présent permettent de raffiner notre
compréhension du phénomène physique d’interaction Mössbauer ainsi que ses difficultés, et
d’envisager son utilisation pour augmenter l’effet de radiothérapies par rayons X.
Bobyk, L., Edouard, M., Deman, P., Vautrin, M., Pernet-Gallay, K., Delaroche, J., Adam, J. F.,
Esteve, F., Ravanat, J. L., and Elleaume, H. (2013) Photoactivation of gold nanoparticles for
glioma treatment. Nanomedicine 9, 1089-1097.
P a g e | 59
Journée de la Recherche Médicale 2014
Recherche par technique FISH des
translocations du gène RET dans les
adénocarcinomes pulmonaires métastatiques
GIOVANNINI D1, CECCALDI F1, CADET C1, BERTHIER S1, MORO-SIBILOT D2,3, LANTUEJOUL S1,3,
Mc LEER-FLORIN A1,3
1
Département d’Anatomie et Cytologie Pathologiques – Plateforme de génétique moléculaire –
2
Département d’Oncologie Thoracique - CHU Grenoble
3
Institut Albert Bonniot CRI INSERM/UJF U823 Equipe 02 - Bases moléculaires de la progression des
cancers du poumon, Pr Elisabeth Brambilla Rond-point de la Chantourne 38706 La Tronche
Intérêt et cadre de la recherche : Les adénocarcinomes pulmonaires représentent
plus de la moitié des cancers du poumon non à petites cellules (CPNPC). Les translocations
activatrices de l’oncogène RET sont retrouvées dans 1,2 à 2% des CPNPC métastatiques, et
sont mutuellement exclusives avec les altérations des gènes EGFR, KRAS, ALK et ROS1. Leur
mise en évidence permettrait de proposer une thérapie ciblée aux patients (inhibiteurs de
tyrosine kinase).
Objectif scientifique : Notre projet a consisté en la mise au point de la technique
d’hybridation in situ en fluorescence (FISH) pour la mise en évidence des translocations du
gène RET, en vue de sa pratique courante optimisée sur la plateforme de génétique
moléculaire du CHU de Grenoble.
Méthodes : Deux sondes break-apart commerciales RET Kreatech™ et RET
ZytoLight® ont été testées, ainsi que deux paramètres expérimentaux (durée et température
de co-dénaturation des sondes et de l’ADN cible), et les résultats ont été analysés à l’aide de
deux systèmes d’acquisition et d’analyse FISH (Metafer Fluorescence Imaging System,
Metasystems et CytoVision Image Analysis and Capture System, Leica). Les échantillons
analysés provenaient de prélèvements fixés et inclus en paraffine : lignées cellulaires
contrôles (lignée cellulaire sans réarrangement RET : contrôle négatif
et lignée RET
réarrangée : contrôle positif), biopsies (12), pièces opératoires (1), cytoblocs (3). Pour
chaque condition expérimentale, la qualité des signaux d’hybridation a été déterminée à l’aide
de deux critères objectifs (le nombre de cellules tumorales dénuées de signaux, et la
moyenne d’intensité des signaux sur au moins 100 cellules tumorales, réparties sur 20
champs), et d’un critère subjectif : le bruit de fond.
Résultats : La sonde ZytoLight® a été choisie car la qualité des signaux fluorescents
était meilleure et on observait peu de bruit de fond. La température et le temps de codénaturation retenus ont été de 75° et 10 minutes. Le système d’acquisition Leica offre des
filtres plus appropriés aux fluorochromes utilisés. Une fois la FISH RET mise au point, elle a pu
être pratiquée sur des prélèvements de patients suivis au CHU de Grenoble entre 2011 et
2013 pour un CPNPC métastatique, sans mutation activatrice des autres oncogènes connus.
16 patients, dont 9 hommes, d’âge moyen 58 ans (44-76 ans) et 7 femmes, d’âge moyen 68
ans (42-84 ans), ont bénéficié de la recherche d’un réarrangement du gène RET. Sur les 16
CPNPC, 13 étaient des adénocarcinomes du poumon. Pour l’instant, aucun réarrangement n’a
pu être mis en évidence avec les sondes utilisées.
Conclusion : Avec près de 40.000 nouveaux cas de cancers du poumon par an en
France, les réarrangements du gène RET toucheraient environ 480 patients.
La découverte de réarrangements touchant le gène RET, codant pour des protéines à
activité kinase est, sans aucun doute, une autre étape clé dans les avancées théranostiques
des adénocarcinomes pulmonaires métastatiques.
- McLeer-Florin A et al. Dual IHC and FISH testing for ALK gene rearrangement in lung adenocarcinomas in a routine
practice: a French study. J Thorac Oncol. 2012 Feb;7(2):348-54.
- McLeer-Florin A, Lantuéjoul S. Why technical aspects rather than biology explain cellular heterogeneity in ALKpositive non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 2012 Jun 1;4(3):240-1
- Mescam-Mancini L et al. On the relevance of a testing algorithm for the detection of ROS1-rearranged lung
adenocarcinomas. Lung Cancer. 2014 Feb;83(2):168-73.
P a g e | 60
Journée de la Recherche Médicale 2014
Role of HIF-1 in the cardiac remodeling and
inotropic effects of
chronic intermittent hypoxia
Emmanuelle Gras, Emeline Lemarié, Peter Carmeliet, Patrick Lévy and Diane Godin-Ribuot
Laboratoire HP2
Faculté de Pharmacie, Domaine de la Merci
La Tronche
Obstructive sleep apnea (OSA) is an important risk factor for cardiovascular morbidity and
mortality. Chronic intermittent hypoxia (IH), a major component of OSA, is thought to be
responsible for most of the cardiovascular complications (Hypertension, myocardial
remodelling...) occurring during OSA. We have previously shown that the hypoxia sensitive
transcription factor HIF-1 is involved in these cardiovascular complications. The  subunit of
HIF-1 is degraded in normoxia by prolyl hydroxylases (PHD1, PHD2 and PHD3) and stabilized
in hypoxia. By altering the activity of degradative enzymes, it is possible to change the
amount of HIF-1 even under normoxia (N).The aim of this study was to further explore the
effects of IH and of HIF-1 on the myocardium by assessing cardiac function and remodelling
with different models of mice who overexpress (by deletion of PHD-2) or under express HIF-1
alpha.
To do this, the answer to IH was studied in mice partially deficient for the gene encoding HIF1  (HIF1A +/-) and mice partially deficient for the gene encoding for PHD2. Mice were
exposed 14 days during 8 hours per day to 1-minute cycles of IH (30 seconds at 5% FiO2
followed by 30 seconds at room air) or to N (similar cycles with room air only). After
exposure, Fulton index (RV / LV + S) were evaluated in all experimental groups and cardiac
pressure were analysed on only HIF-1 mice.
As we have already observed several times, IH induced right ventricular hypertrophy in all
control groups. This parameter was abolished by the partial deficiency of HIF-1 and present
even in N with the partial deletion of PHD-2 enzyme. We also observed a significant
augmentation of pressure in myocardium after exposure to IH. This modification was
abolished in mice HIF-1 +/-.
In conclusion we proved that IH induce cardiac remodelling and augmentation of myocardial
pressure. We also shown these modifications are under the control of HIF-1.
P a g e | 61
Journée de la Recherche Médicale 2014
modifications au cours du temps des valeurs de
perfusion et de vasorecativite cerebrale
apres un avc ischemique
Olivier Heck, Johan Pietras, Thomas Perret, Agnès Aghetti, Marie-Charlotte Plichta, Irène
Troprès, Sylvie Grand, Olivier Detante, Assia Jaillard, Alexandre Krainik
olivier.heck1@gmail.com
Clinique universitaire de Neuroradiologie et IRM
CHU de Grenoble CS 10217, 38043 Grenoble cedex 9
Chef de service : Pr A. Krainik
Intérêt et cadre de la recherche
La restauration fonctionnelle de la zone lésée après un AVC est probablement précédée d’une
restauration fonctionnelle de la vascularisation cérébrale.
Des traitements innovants comme ceux fondés sur l’utilisation de cellules souches visent
favoriser une restauration de la fonction neuronale. Pour ces traitements, il est fondamental
de mieux caractériser les perturbations vasculaires basales et fonctionnelles après la survenue
d’un AVC ischémique afin d’ajuster et évaluer au mieux ce type de traitements.
Objectifs scientifiques
Le but de cette étude était d’étudier en IRM les changements au cours du temps des valeurs
de perfusion basale et de vasoréactivité cérébrale (CVR) après un AVC ischémique.
Méthodes
Nous avons mesuré en IRM 3T, chez 16 sujets, la perfusion basale (DSC) et la vasoréactivité
cérébrale en contraste BOLD. Les examens ont été réalisés à 3 temps différents : 35, 50 et
180 jours après la survenue d’un AVC ischémique antérieur.
Les paramètres de perfusion cérébrale (CBF, CBV, MTT, Tmax) ont été calculés par
déconvolution de l’entrée de fonction artérielle.
La CVR a été estimée en utilisant simultanément le end-tidal CO2 (EtCO2) par enregistrement
d’un régresseur physiologique des changements de signal BOLD.
Des régions d’intérêt (ROI), définies sur des images pondérées T1 et T2, représentaient le
cœur nécrotique de l’AVC, la zone péri-nécrotique, et la zone non lésée du territoire vasculaire
impliqué. Des ROI ont été générées simultanément en miroir dans l’hémisphère controlatéral,
afin de calculer des index de latéralité.
Résultats
La perfusion basale et la CVR étaient altérées dans toutes les ROI de l’hémisphère lésé. Des
changements significatifs ont été observés durant la période 35-180 jours après l’AVC.
Le cœur nécrotique et la zone périnécrotique montrèrent une diminution au cours du temps
des valeurs de CBV et CBF, et une augmentation des valeurs de MTT. La zone non lésée
montrait une stabilité dans le temps des valeurs de ces paramètres.
La CVR augmentait dans la zone péri-nécrotique mais restait stable au sein du cœur et de la
zone non lésée.
Conclusion
Cette étude préliminaire montre une altération importante des valeurs de perfusion basale et
de CVR au sein du territoire lésé après un AVC.
Alors que la perfusion basale continuait de s’altérer au cours du temps, la CVR s’améliorait,
suggérant une amélioration fonctionnelle de la vascularisation péri-nécrotique.
Favre et al., Stroke 2014;45 :1077-1043
Cantin et al., Neuroimage 2011;58:579-587
Krainik et al., Stroke 2005;36:1146-1152
P a g e | 62
Journée de la Recherche Médicale 2014
Determinants and impact of poor adherence to
hbv second generation analogs in real life in
france: the multicentric adhepb study
M.N. Hilleret1, T. Fontanges2, B. Froissart3, J. Dumortier4, C. Colin5, F. Bourrhis6, J. Pofelski7,
J.P. Zarski1, F. Bailly8, V. Leroy1, ADHEP-B
7c Viral hepatitis: Hepatitis B & D - c. Clinical (Therapy, new compounds, resistance)
1
CHU A Michallon, Grenoble, 2cabinet Gastroentérologie, Bourgoin Jallieu, 3cabinet
d'hépatogastroentérologie, Grenoble, France, 4Hopital E. Herriot, Lyon, France, 5Hopital Saint
Joseph, lyon, 6CH Chambery, Chambery, 7CHRA, Annecy, 8Hopital De La Croix Rousse,
Lyon, France
E-mail: mnhilleret@chu-grenoble.fr
Background and aims: Adherence to nucleos-t-ide analog therapy is a key factor in
achievement of HBV viral suppression. The aim of this study was to assess adherence to HBV
treatment and its impact on viral suppression.
Methods: We prospectively included 244 patients in 11 centers (university and regional
hospitals and private practices). Patients were eligible if they were on analogs for at least 6
months, were French speakers, had no viral co-infections and no HCC detected. Patients and
physicians answered in parallel questions concerning patient profile and adherence evaluation
(Morisky scale/MS, analogic visualization scale/AVS) through an ipad application.
Results: Patients characteristics were as follow: male: 67.7%, age: 49 years, ALT: 0.57 ULN,
HBeAg(+): 13.3%, METAVIR fibrosis > F1 : 56.6%, alcohol abuse: 12.2%. They were mainly
treated by TDF: 55.9%, ETV: 30.8%, or combination: 8.8%. At inclusion, 83.9% of patients
had undetectable HBV DNA. The percentage of patients with poor adherence defined by MS <
2 was 29.2%. Those patients had lower AVS scoring: 9.6 vs 8.9 (p=0.009). Concordance rate
between patient and physician adherence perception was 73.3%. Factors significantly
associated with poor adherence were young age (p 0.0001); unemployment (p 0.02) and
single status (p 0.0001). Poor adherence was not associated with HBV DNA detectability (15.9
vs 16.3%).
Conclusions: We hereby confirmed that poor adherence to HBV antiviral therapeutics is
common but does not impact on short term viral response. Identification of risk factors could
help identifying populations to target for more intensive therapeutics educational programs.
P a g e | 63
Journée de la Recherche Médicale 2014
APRIL, un facteur du microenvironnement
promoteur du lymphome B diffus a
grandes cellules
Manfroi B.1, Khandirova O.1, McKee T.2, Dietrich PY.3, Went P.4, Tzankov A.5, MamotP.6,
Batoroev Y.7, Gressin R.8, et Huard B.1
1
Equipe 8, Institut Albert Bonniot, INSERM U823, Université Grenoble-Alpes, Grenoble, France.
2
Pathologie, Faculté de Médecine, Genève, Suisse.
3
Oncologie, Hôpital Universitaire, Genève, Suisse.
4
Institut de Pathologie, Zurich, Suisse.
5
Pathologie, Hôpital Universitaire, Bale, Suisse.
6
SAKK, groupe suisse de recherche clinique.
7
Laboratoire de cytologie, Hôpital d’oncologie, Université d’Etat de Médecine, Irkoutsk, Russie.
8
Hémato-Oncologie, centre hospitalier universitaire, Grenoble, France.
A proliferation-inducing ligand (APRIL) est le dernier membre de la super famille des « tumor
necrosis factor » à avoir été cloné. Les récepteurs connus pour APRIL sont BCMA (B-cell
maturation protein) ainsi que TACI (transmembrane activator, calcium modulator, and
cyclophilin ligand interactor), tous deux étant majoritairement exprimés par les lymphocytes
B. APRIL possède un rôle au niveau de la survie des plasmocytes. Plus récemment, des études
ont permis de démontrer une expression importante de APRIL au niveau de lésions tumorales,
et ce, uniquement dans un seul sous-type de lymphome non hodgkinien : le lymphome diffus
à grandes cellules B (LDGCB). Cependant, l’expression d’APRIL est variable au sein de patients
atteints de LDGCB. Environ 50% des cas se trouvent être riches en APRIL. Deux études
cliniques rétrospectives et une prospective ont permis de corréler l’agressivité du LDGCB avec
la présence de APRIL. En effet, le taux de survie de patients ayant des lésions tumorales
riches en APRIL est significativement diminué par rapport à ceux dont les lésions sont
dépourvues de APRIL. Un modèle murin pré-clinique a également permis de mettre en
évidence un rôle promoteur du LDGCB pour APRIL. En effet, les greffes xénogéniques de
lignées LDGCB prennent moins bien dans des souris immunodéficientes génétiquement
dépourvues en APRIL. APRIL apparait donc comme une cible de valeur non seulement pour le
pronostique mais également pour le traitement du LDGCB. Nos expériences préliminaires
suggèrent que l’actuel traitement standard du LDGCB, R-CHOP (Rituximab®Cyclophosphamide, Hydroxydaunorubicine, Oncovin®, Prednisolone), augmente l’expression
de ce facteur promoteur. Nous allons donc tester si l’addition d’un antagoniste d’APRIL
augmente l’efficacité de R-CHOP dans un modèle murin de xénogreffe. Les cellules tumorales
ne produisent pas APRIL. La source de APRIL au niveau des lésions de type LDGCB est
d’origine myéloïde, avec une sous population de macrophage et chez certains patients
également des neutrophiles. Le fait qu’APRIL soit exprimé de manière constitutive dans la
lignée myéloïde laisse supposer un recrutement des cellules productrices d’APRIL par
chimiotactisme. Nos études préliminaires indiquent une expression différentielle de certaines
chimiokines par les cellules tumorales elles mêmes.
P a g e | 64
Journée de la Recherche Médicale 2014
Development of multifunctional particles for
diagnostic & targeted delivery
in cancer therapeutics
Tao JIA1 (2nd Doctorant), Jérêmie Ciccione2, Gilles Subra2, Mickael Claron3, Fabien
Thoreau1,3, Didier Boturyn3, Jean-Luc Coll1
1 : CR IAB INSERM-UJF U823, Grenoble
2 : IBMM, CNRS Montpellier
Tumor targeting depends strongly on the capacity of nanoparticles (NPs) or molecules to cross
several barriers from the injection site to the targeted cells. Thus, it is tempting to develop
targeted NPs or molecules that will recognize receptors overexpressed on both type of tissues:
the tumor endothelium and the tumor cells. Integrins (especially integrin avß3) and
Neuropilin-1, a co-receptor of VEGF (NRP) are over-expressed in the tumor vasculature and
tumor cells, and their expression has been correlated with angiogenesis and progression.
Importantly, integrin avß3 and NRP1 can interact physically and functionally. Dual targeting of
these two receptors may thus be useful for development of tumor targeted nanomedicines. In
the present study, we generated bifunctional scaffolds or particles (RAFT-[cRGD]n-[anti
NRP1]m, internalized RGD (iRGD) and RGD/[anti NRP1] NPs) targeting integrin and NRP1
simultaneously and explored their activity. By Western Blotting and Flow cytometry (FACS) we
characterized the expression of the receptors (VEGFR1/2, NRP1/2) in five different tumor cell
lines, and choose MDA-MB-231 and H358 cells for in vitro experimental model. By introducing
different ratio of RGD / [anti NRP1] peptides and several amount of peptides (1000, 100 and
10 peptides) on the surface, we generated 15 batches of NPs. In parallel, we also incorporated
[anti NRP1] peptide or RAFT-[anti NRP1] to RAFT-[cRGD] platform with varying lengths of
spacers. Finally, a CendR tumor penetrating peptide, iRGD, was also synthesized. In
conclusion, our study suggests that bifunctional RAFT-[cRGD]n-[anti NRP1]m molecules and
RGD/[anti NRP1] NPs would be of great potential for cancer targeted drug delivery and
therapy.
P a g e | 65
Journée de la Recherche Médicale 2014
Iontophoresis of treprostinil enhances ulcer
healing in a mouse model of systemic sclerosis.
S. KOTZKIa,b, JL. CRACOWSKIa,b, C. ARNAUDa, D. GODIN-RIBUOTa, M. ROUSTITa,b
a. Univ.Grenoble Alpes, HP2, F-38000 Grenoble, France
b. Clinical Pharmacology Unit, CIC, CHU de Grenoble, F-38000 Grenoble, France
Scientific context and main objective
Digital ulcers are a painful and very handicapping complication of systemic sclerosis (SSc).
Intravenous infusion of iloprost, a prostacyclin analogue, is the only approved curative
treatment but its use is counterbalanced by serious dose-limiting side effects.
Our objective was to evaluate the effect of iontophoresis (a non-invasive drug delivery
method) of treprostinil on ulcer healing in a mouse model of fibrous skin.
Methods
The study involved two groups of sixteen mice (BALB/c). Dermal fibrosis was induced in the
SSc group by daily intradermal injection of HOCl, during 6 weeks. Wounds were made on the
back of each mouse by 4-mm biopsy punches on hairless skin. A silicone ring was centered
and fixed around the wound to limit the impact of wound contraction (a phenomenon
observed in rodents) on the healing process. In both groups, mice were treated with
iontophoresis of treprostinil 0.64 mM or NaCl 0.9% during 20 minutes per day, for five
consecutive days (n=8 for each treatment). Daily assessment of wound healing was measured
with a digital microscope camera with image processing and analysis software. The
percentage of wound healing at the end of the treatment (fifth day) was the primary endpoint.
Results
Iontophoresis of treprostinil 0.64 mM significantly increased wound healing in comparison with
NaCl 0.9% in both groups: in SSc mice, healing was 33.47% ±14.26 and -3.92% ±17.38 for
treprostinil and NaCl, respectively (P<0.001), while in healthy mice it was 47.62% ±10.76
and 12.78% ±10.94, respectively (P<0.001). However, the time to complete healing was not
significantly reduced by treprostinil.
Conclusion
In this study we show that local delivery of a prostacyclin analogue enhances ulcer healing in
an animal model of SSc. The safety and efficacy of iontophoresis of treprostinil should now be
tested as a novel approach in the treatment of SSc-related ulcers.
Team references
Blaise, S., Roustit, M., Millet, C., Ribuot, C., Boutonnat, J., and Cracowski, J.L. (2011). Cathodal iontophoresis of
treprostinil and iloprost induces a sustained increase in cutaneous flux in rats. Br. J. Pharmacol. 162: 557–65.
Kotzki, S., Roustit, M., Arnaud, C., Boutonnat, J., Blaise, S., Godin-Ribuot, D., et al. (2013). Anodal iontophoresis of a
soluble guanylate cyclase stimulator induces a sustained increase in skin blood flow in rats. J. Pharmacol. Exp.
Ther. 346: 424–31.
Roustit, M., Blaise, S., and Cracowski, J.-L. (2014a). Trials and tribulations of skin iontophoresis in therapeutics. Br. J.
Clin. Pharmacol. 77: 63–71.
Roustit, M., Gaillard-Bigot, F., Blaise, S., Stanke-Labesque, F., Cracowski, C., Seinturier, C., et al. (2014b).
Cutaneous Iontophoresis of Treprostinil in Systemic Sclerosis: A Proof-of-Concept Study. Clin. Pharmacol. Ther. 95:
439–45.
P a g e | 66
Journée de la Recherche Médicale 2014
DNA binding of the p21 oncogene repressor
ZBTB2 is inhibited by cytosine
hydroxymethylation
Céline Lafayea, Ewa Barbiera, Audrey Misciosciaa, Christine Saint-Pierrea, Alexandra Krautb,
Yohann Coutéb, Isabelle Ploc, Didier Gasparuttoa, Jean-Luc Ravanata, Jean Bretona*
a
Laboratoire Lésions des Acides Nucléiques, Service de Chimie Inorganique et Biologique,
UMR E_3 CEA/UJF-Grenoble 1, INAC, 17 rue des Martyrs, Grenoble, F-38054, France
Directeur du laboratoire : Dr Jean-Luc Ravanat
b
Etude de la Dynamique des Protéomes, Biologie à Grande Echelle, UMR S_1038
CEA/INSERM/UJF-Grenoble 1, iRTSV
c
INSERM, U1009, Institut Gustave Roussy, Université Paris 11
*Correspondance : jean.breton@cea.fr
Recent studies have demonstrated that the modified base 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC)
is detectable at various rates in DNA extracted from human tissues. This oxidative product of
5-methylcytosine (5-mC) constitutes a new and important actor of epigenetic mechanisms.
We designed a DNA pull down assay to trap and identify nuclear proteins bound to 5-hmC
and/or 5-mC. We applied this strategy to three cancerous cell lines (HeLa, SH-SY5Y and UT7MPL) in which we also measured 5-mC and 5-hmC levels by HPLC-MS/MS. We found that the
putative oncoprotein Zinc finger and BTB domain-containing protein 2 (ZBTB2) is associated
with methylated DNA sequences and that this interaction is inhibited by the presence of 5hmC replacing 5-mC. As published data mention ZBTB2 recognition of p21 regulating
sequences, we verified that this sequence specific binding was also alleviated by 5-hmC.
ZBTB2 being considered as a multifunctional cell proliferation activator, notably through p21
repression, this work points out new epigenetic processes potentially involved in
carcinogenesis.
P a g e | 67
Journée de la Recherche Médicale 2014
Identification des transcrits de fusion ALK et
ROS1 dans le cancer du poumon au moyen de
techniques basées sur la PCR
LAGACHE A1, PUTAUD I2, BOLINA C1, BETHIER R3, LANTUEJOUL S1,3, BRAMBILLA E1,3,
Mc LEER-FLORIN A1,3
1
Institut Albert BonniotCRI INSERM/UJF U823Equipe 02 - Bases moléculaires de la progression des
cancers du poumon, Pr Elisabeth Brambilla Rond-point de la Chantourne 38706 La Tronche
2
Département Génétique Oncohématologique, 3Département d’Anatomie et Cytologie Pathologiques –
Plateforme de génétique moléculaire - CHU Grenoble
Projet bénéficiant d’un financement par la DRCI du CHU Grenoble (projet REALK)
Intérêt et cadre de la recherche : Les adénocarcinomes représentent50% des
carcinomespulmonaires. Différents drivers oncogéniques ont été décrits dans ces tumeurs
dont l’EGFR (epidermalgrowth factorreceptor) et les kinases ALK(anaplasticlymphoma kinase)
et ROS1 (c-rosoncogene 1). Les translocations des gènes ALK et ROS1conduisent à la
formation de protéines de fusion, dont l’activation permanente confère à la tumeur une
sensibilité à un traitement par un inhibiteur de tyrosine kinase. Différents partenaires de
translocation et différents variants de transcription ont été identifiés pour ALK et ROS1, et des
données in vitro suggèrent que l’efficacité du traitement pourrait dépendre du variant de
transcription présent.
Objectif scientifique : Les outils diagnostiques utilisés en routine pour la détection
des réarrangements ALK et ROS1 sont l’immunohistochimie (IHC) et la FISH (hybridationin
situfluorescence). Les techniques de RT-PCR, quantitative (RT-qPCR) ou PCR inverse (I-PCR)
pourraient constituer une aide au diagnostic, en tant que technique de recours (résultats
IH/FISH discordants, petites biopsies) mais aussi afin de caractériser et de quantifier les
transcrits de fusion ALKetROS1,et de les corréler à la réponse thérapeutique.
Méthodes : Dans un premier temps, nous avons adapté les techniques d’extraction
d’ARN et de RT-qPCR à l’étude d’ARNm dégradés (car issus de prélèvements fixés et inclus),
et présents en très faible quantité. Puis, à partir d’une série initialede 40 adénocarcinomes
pulmonaires ALK+ diagnostiqués par IHC/FISH sur la plateforme de génétique moléculaire du
CHU de Grenoble, nous avons recherché dans 29 tumeurs ALK+ les variantsEML4-ALK les plus
fréquents (v1 (E13;A20), v2 (E20;A20), v3a/b (E6a/b;A20), E18;A20 et E17;A20) par RTqPCRà l’aide de sondes TaqMan.
Résultats : Un variant EML4-ALK a pu être identifié dans 19 tumeurs sur 29 (65%), et
les variants les plus fréquemment détectés étaient les v1 (9/19, 47%) et v3a/b (9/19,
47%).Aucun des 5 variants n’a été détecté dans les 9 tumeurs restantes.En revanche, un cas
très rare de double variant V2 et E17;A20aété mis en évidence.De façon très intéressante,
tous les patients ayant rechuté étaient des V3a/b.
Conclusion/perspectives : La RT-qPCR est une technique sensibleet rapide, qui
nécessite une quantité très faible de matérielmais elle ne détecte un variant ALK que dans
environ 65% des cas positifs. Nous sommes donc en cours de mise au point d’une technique
innovante de PCR-inverse sur ARNm, couplée à un séquençage qui nous permettrait de
détecter tous les variants de transcription ALK et ROS1 et d’identifier aussi leur partenaire de
translocation.
- McLeer-Florin A et al. Dual IHC and FISH testing for ALK gene rearrangement in lung adenocarcinomas in a routine
practice: a French study. J ThoracOncol. 2012 Feb;7(2):348-54.
- McLeer-Florin A, Lantuéjoul S. Why technical aspects rather than biology explain cellular heterogeneity in ALKpositive non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 2012 Jun 1;4(3):240-1
- Mescam-Mancini L et al. On the relevance of a testing algorithm for the detection of ROS1-rearranged lung
adenocarcinomas. Lung Cancer. 2014 Feb;83(2):168-73.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Augmentation de la sécrétion de MMP et la
néosynthèse d’IL1-β via l’augmentation de
l’activité Nox4/p22 dans les chondrocytes
primaire humains
F. Rousset1, F. Hazane Puch2, L. Grange1,2, M. Nguyen1, C. Pinosa1, C. Combaz Lair2, B.
Burroni2, B. Rubens-Duval2, F. Morel1, B. Lardy1,2
1
Université Joseph Fourier, GREPI CNRS FRE 3405, Grenoble, FRANCE
2
CHU Grenoble, Grenoble, FRANCE.
Introduction:
L’arthrose est la pathologie articulaire la plus fréquente. Elle résulte d’un déséquilibre entre
synthèse et dégradation de la matrice extracellulaire contrôlée par le chondrocyte. Ce
déséquilibre entraine progressivement une altération biochimique et biomécanique de
l’articulation. L’inflammation par le biais de la production de dérivés réactifs de l’oxygène joue
un rôle clef dans l’arthrose. Nox4 appartient à la famille des NADPH oxydase qui en présence
de p22-phox produisent des dérives réactifs de l’oxygène. Compte tenu du rôle critique joué
par le stress oxydant dans l’arthrose, l’activité des NADPH oxydases stimulé par l’IL1-β
pourrait être impliquée dans la physiopathologie de l’arthrose.
Méthodes:
Les chondrocytes primaire humains sont isolés de tètes fémorales de patients et mis en
culture. La production de dérivés réactifs de l’oxygène est mesurée par technique Amplex
Red. Les effets de l’IL1-β, en présence ou non d’inhibiteurs de Nox4, sur la production de
MMP-1, MMP-13, ADAMTS4 et la néosynthèse d’IL1-β par les chondrocytes ont été mesurés
par RT-PCR quantitative et par Western blot.
Résultats:
Nos travaux montrent pour la première fois l’expression de Nox4 dans les chondrocytes
primaires humains, mais également que l’oxydase Nox4 est la principales source de dérivés
réactifs de l’oxygène après stimulation par la cytokine IL1-β. De plus Nox4 sous l’action de
l’IL1-β est impliquée dans la synthèse de MMP1, MMP13 et ADAMTS4, les trois principales
métalloprotéases responsables de la dégradation du cartilage. L’inhibition de l’activité Nox4
par l’Héme oxygénase (HO1) ou l’utilisation d’inhibiteur pharmacologique (DPI, GKT) entraine
une diminution de l’expression de métalloprotéases matricielles secrétées par les
chondrocytes. Il a été montré que l’IL1-β, principale cytokine proinflammatoire responsable de
l’arthrose, agit de façon paracrine sur la propre synthèse par le chondrocyte, entrainant ainsi
un cercle vicieux pathologique. Nos résultats montrent l’implication de Nox4 et sa stabilisation
par son partenaire p22 sur la néosynthèse d’IL1b.
Conclusions :
Ces travaux montrent pour la première fois sur des chondrocytes primaire humains le rôle
significatif du complexe oxydase Nox4/p22 sur l’action catabolique induite par la stimulation
cytokinique de l’IL1-β.
P a g e | 69
Journée de la Recherche Médicale 2014
Deciphering the resistance mechanisms to EGFR
Tyrosine Kinase Inhibitors in Non-Small Cell
Lung Cancer: a quantitative proteomic approach
Sylvia G. Lehmann, Amandine Hurbin, Michel Sève, Sandrine Bourgoin-Voillard
sylvia.lehmann@ujf-grenoble.fr
Plateforme de Protéomique Prométhée
Univ. Grenoble Alpes, Institut Albert Bonniot INSERM U823, CHU Grenoble
Institut de Biologie et Pathologie - CS 10219
38043 Grenoble Cedex 9
Responsable : Pr. Michel Sève
Current targeted therapies prescribed in non-small cell lung cancer (NSCLC) such as
gefitinib, are inhibitors of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase activity (EGFRTKI). As most patients developed resistances, many efforts were made to understand the
resistance mechanisms and were focused mainly on gene mutations. Last year, two studies
were published regarding respectively the effect of gefitinib treatment on the level of
expression of proteins involved in angiogenesis and invasion process (Box et al. 2013) and the
changes in phosphorylation on tyrosine residues (Tzouros et al. 2013). But there is still a lack
of a global proteomics study that would help in understanding the impact of gefitinib
treatment and the mechanism of resistance of cells.
Thus, this study aimed to identify the proteins involved in the mechanism of resistance to
apoptosis in NSCLC cell line resistant to EGFR-TKI, such as H358. To achieve this goal, we
used iTRAQ quantitative proteomics approach to determine the proteins, which were over- or
under-expressed depending on the treatment with gefitinib.
Practically, H358 cells, were treated or not with gefitinib for 96h. Apoptosis assays were
performed by a flow cytometry analysis of active caspase-3 (immunostaining). Proteomics
approach was carried out by performing trypsin digestion on extracted proteins before
labelling the resulting peptides by iTRAQ reagent. Then, peptides were fractionated by nanoHPLC and analysed by MALDI TOF/TOF in MS & MS/MS modes. The data were analyzed by
Protein Pilot software in an iTRAQ relative quantitation approach. By this way, we identified
1217 proteins with 150 proteins whose expression was modified upon gefitinib treatment. We
performed an ontology enrichment and network analysis and found some anti-apoptotic
proteins significantly upregulated after gefitinib treatment. Interestingly, the main processes
identified as dysregulated were related to mRNA processing, cell cycle and apoptosis
regulation.
These results will highlight the resistance mechanism to gefinitib in NSCLC, and therefore,
could identify new targets to overcome this resistance.
References:
Box, C et al. 2013 Eur J Cancer 49(11): 2512-21.
Tzouros M et al. 2013 Nov;12(11):3339-49.
P a g e | 70
Journée de la Recherche Médicale 2014
Microdélétion de TCF12 chez un patient
présentant une cranio-sténose coronale
associée à un retard mental secondaire à un
remaniement chromosomique maternel
complexe.
1
Pauline Le Tanno1, Charles Coutton1,2, Brice Poreau3, Francoise Devillard1, Gaëlle Vieville1,
Florence Amblard1, Pierre-Simon Jouk3, Véronique Satre1,2.
Laboratoire de Génétique Chromosomique, Département de Génétique et Procréation, Hôpital
Couple Enfant, CHU Grenoble, France
2
Université Joseph Fourier, AGIM CNRS FRE3405, Equipe "Andrologie, Génétique et Cancer",
Grenoble, France
3
Service de Génétique Clinique, Département de Génétique et Procréation, Hôpital Couple
Enfant, CHU Grenoble, France
Nous exposons le cas d’un jeune patient présentant un retard psychomoteur et une
malformation cranio-faciale due à une craniosténose coronale. Le caryotype révèle la présence
d’une translocation cytogénétiquement équilibrée entre les chromosomes 2 et 15
[t(2;15)(q21;q21.3)], héritée de sa mère.
L’étude complémentaire par analyse chromosomique sur puce à ADN (ACPA) 180K met
en évidence une délétion de novo de 3,64 Mb sur le chromosome 15 au niveau du point de
cassure de la translocation 15q21.3q22.2. La délétion est responsable d’une haploinsuffisance
du gène TCF12 pouvant expliquer la craniosténose. L’étude par FISH montre la présence chez
la mère d’un remaniement chromosomique plus complexe associant à la fois une translocation
réciproque et une insertion du segment 15q22.1 au niveau de la région télomérique du
segment transloqué du chromosome 15, sur le dérivé du chromosome 2 . Le déséquilibre chez
l’enfant peut s’expliquer par la formation d’une double boucle d’appariement lors de la méiose
avec survenue d’un crossing-over en dehors du segment inséré. L’analyse chromosomique sur
puce à ADN 1M, en précisant les points de cassure, fait émerger l’hypothèse de remaniements
médiés par la présence d’éléments transposables.
L’utilisation de l’analyse chromosomique sur puce à ADN a permis un gain diagnostic
considérable en détectant les anomalies cryptiques non visibles au caryotype y compris dans
les remaniements d’allure équilibrée. Mais ce cas illustre en plus l’importance de l’analyse par
FISH pour confirmer les résultats d’ACPA et identifier les mécanismes chromosomiques à
l’origine des déséquilibres.
P a g e | 71
Journée de la Recherche Médicale 2014
Difficulté d’interprétation de biomarqueurs
d’exposition professionnelle : exemple des
Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques
S Lutier (1), D Barbeau(1,2), L-M Michel(1), R Persoons(1,2), M Marques(1), A Maître(1,2)
(1) Equipe Environnement et Prédiction de la Santé des Populations (Pr A. Maître)
Laboratoire TIMC-IMAG (UMR 5525) UJF Grenoble
(2) Unité Médicale de Toxicologie Professionnelle et Environnementale (Pr A. Maître) – DBTP – IBP
CHU de Grenoble – CS 10217 – 38043 Grenoble Cedex 9
slutier@chu-grenoble.fr
Intérêt et cadre de la recherche : La surveillance de l’exposition professionnelle permet d’estimer
les risques sanitaires à priori et d’intervenir en amont afin de réduire l’incidence des pathologies. Alors
que la surveillance atmosphérique permet de caractériser les sources d’émission, la surveillance
biologique de l’exposition (SBE) permet de mesurer la dose interne qui a pénétré dans l’organisme en
intégrant l’ensemble des voies d’exposition. Mais pour être représentative de l’exposition et permettre
une interprétation pertinente, la SBE nécessite une stratégie de prélèvement bien élaborée avec
notamment un moment de prélèvement proche du maximum d’excrétion. Les Hydrocarbures
Aromatiques Polycycliques (HAP) sont émis en mélanges sous forme gazeuse ou particulaire dans
l’atmosphère et sont absorbés par voie respiratoire mais aussi par voie cutanée. Le 1-hydroxypyrène
(OHP) était le biomarqueur urinaire couramment analysé pour la SBE aux HAP mais c’est le métabolite
du pyrène, HAP non cancérogène. Nous avons récemment développé le dosage du 3-hydroxyBaP
(OHB), métabolite urinaire majoritaire du BaP car ce composé est classé cancérogène certain pour
l’Homme rendant indispensable le suivi de l’exposition des populations (Barbeau et al, 2011).
Objectif scientifique : Ce travail propose d’étudier les niveaux urinaires de l’OHP et de l’OHB durant
toute une semaine d’exposition professionnelle, afin de mettre en évidence les paramètres qui
peuvent influencer les concentrations des biomarqueurs et qui doivent être pris en compte dans
l’élaboration de la stratégie de mise en œuvre de la SBE.
Méthodes : Sept salariés d’une usine de production de cathodes en carbone, ont été suivis pendant
une semaine d’exposition. Les prélèvements urinaires collectés tous les jours en début de poste (DP)
et en fin de poste (FP) ont été complétés par des mesures atmosphériques journalières. Les HAP
atmosphériques et les métabolites urinaires ont été analysés en chromatographie liquide couplée à la
fluorimétrie. Les limites de quantification étaient de 0,05 ng/support pour le BaP, et le pyrène, et
respectivement de 0,05 et 20 ng/L pour l’OHB et l’OHP.
Résultats : Après une première exposition significative, les concentrations urinaires des 2
biomarqueurs ne reviennent pas au niveau basal le lendemain matin. Puis, de façon générale, les
concentrations urinaires augmentent durant la semaine pour atteindre le maximum en fin de semaine,
fin de poste (FSFP). Par contre, il n’existe pas de corrélation entre les 2 biomarqueurs ce qui peut être
expliqué par trois types de facteurs. Le premier est la variabilité de la composition des mélanges
atmosphériques en fonction des sources d’émission comme en témoignent les ratios BaP/Pyrène
moyens qui varient de 0,07 à 1,27 en fonction des postes. Au cours de la semaine, le coefficient de
variation du ratio BaP/PyrT atteint 56% pour un même travailleur indiquant une importante variabilité
du mélange selon les activités. Le deuxième facteur est une différence dans la voie d’absorption des
HAP. En effet, le BaP est majoritairement absorbé par voie cutanée car, présent sous forme
particulaire dans l’atmosphère, il est arrêté par les masques portés par les salariés. En revanche, le
pyrène est absorbé tant par la voie cutanée (comme le montrent les corrélations entre les niveaux du
1-OHP de DP avec les concentrations de pyrène de la veille), que par la voie respiratoire, car la
fraction gazeuse de ce composé n’est pas arrêtée par les masques. Ceci explique les variations de plus
fortes amplitudes de l’OHP par rapport à l’OHB. Le troisième facteur potentiel est une cinétique
d’élimination différente des deux métabolites. En effet, alors que les ratios des concentrations
urinaires du OHB/OHP mesurées en FP sont corrélés aux ratios des niveaux atmosphériques
BaP/pyrène, ceux calculés à partir des concentrations urinaires le lendemain matin ne le sont pas.
Conclusions : Pour mettre en place la SBE, il est important de connaitre : les produits utilisés qui
influent sur la composition des mélanges, ainsi que l’activité réalisée par l’opérateur et les
équipements de protection individuelle (masque et gants), facteurs impactant directement sur les
voies d’absorption. Pour la SBE aux HAP, le moment de prélèvement dans la journée ainsi que le jour
de la semaine (en fin de semaine ou après plusieurs jours d’activités polluantes) sont adaptés en
fonction de la cinétique d’élimination urinaire qui est influencée par le composé lui-même mais aussi
par ses voies d’absorption.
P a g e | 72
Journée de la Recherche Médicale 2014
Epidemiology of Invasive Aspergillosis (IA)
during Induction Therapy in Adults with Acute
Lymphoblastic Leukemia (ALL):
A GRAALL-2005 Study
Clara Mariette1, A. Thiebaut1, D. Hocquet2, A. Huynh3, F. Isnard4, F. Legrand5, V. Lheritier6, E.
Raffoux7, E. Tavernier8, JY. Cahn1 and N.Ifrah9
1
Hematology Department, UMR 5525 CNRS, Grenoble University Hospital, France, 2Infection Control
Department,Besançon University Hospital, France,3Hematology Department, Toulouse University
Hospital, France,4Hematology Department, Saint Antoine University Hospital, Paris, France, 5Hematology
Department, Nice University Hospital, France,6GRAALL coordination, Lyon, France, 7Hematology
Department, Saint Louis University Hospital, Paris, France,8Hematology Department, Saint-Etienne
University Hospital, France, 9Hematology Department, Angers University Hospital, France
Coordonnées : Service d’Hématologie Clinique CHU Grenoble CS 10217 38043 Grenoble Cedex 9
cmariette@chu-grenoble.fr
Background: IA is a major cause of morbidity and mortality for patients with hematological
malignancies and has been mainly reported in patients with acute myeloblastic leukemia (AML) and
stem cell transplantation. Much less is known about the role of IA during the treatment of
lymphoproliferative diseases like ALL. Here, we retrospectively evaluated the characteristics of
patients and the incidence of IA occurring during the induction course in adult ALL patients enrolled
in the GRAALL-2005 trial.
Methods: We collected the data of 36 patients with IA during induction chemotherapy. All were
included between May 2006 and October 2012 in the multicentric GRAALL-2005 phase III trial.
According to ALL characteristics, these patients were treated in 3 different substudies: GRAALL,
GRAALL-Rituximab (GRAALL-R) for CD20+ ALL, GRAAPH for Philadelphia (Ph) chromosome-positive
ALL. IA was defined retrospectively using the EORTC modified criteria (De Pauw, CID 2008).
Results: Among the 969 patients enrolled, 36 (3.7%) developed IA during induction therapy. The
median age was 30 years for all patients receiving induction and 47 years (range, 18 to 59) for
patients with IA. We observed 18 IA (3%) by the GRAALL protocol (593 patients enrolled), 16
(8.3%) by the GRAALL-R protocol (191 patients enrolled), and 2 (0.7%) by the GRAAPH protocol
(270 patients enrolled). In the GRAALL-R protocol, IA was diagnosed in 6 patients randomly
assigned to receive rituximab and in 10 patients treated in the control group. The median time
between first day of induction therapy and IA diagnosis was 20 days (range, -2 to 71). The median
time between the first day of neutropenia and IA diagnosis was 18 days (range, 0 to 76). At the
time of IA diagnosis, 13 patients were hospitalized in laminar airflow rooms, 10 patients in rooms
with overpressure, 1 patient in a room with high-efficiency particulate filter, 5 patients in
conventional rooms, 1 patient received home care and the type of hospitalization was unknown for
the 6 remaining patients. Four patients with IA (11%) had received antifungal drug for invasive
fungal infection (IFI) prophylaxis: one patient received fluconazole, one received caspofungin, and
two received liposomal amphotericin B. All patients with IA presented pulmonary symptoms
associated with a sinusal or cutaneous localization in 1 and 2 patients respectively. The diagnosis of
IA was classified as possible in 7 episodes (19 %), probable in 22 episodes (61%), proven in 4
episodes (11%), and indeterminate in the remaining 3 episodes. Detection of Aspergillus antigen in
serum by latex agglutination was positive in 24 cases (67%). Chest CT scans were taken for 33
patients (92%): nodules were found in 19 patients, halo sign in 20 patients, and “air crescent sign”
in 1 patient. Bronchoalveolar lavage was performed in 11 patients (31%): culture was positive in 7
of them and Aspergillus antigen was positive in 2 of them. Biopsies where positive in 4 cases: in
pulmonary biopsy in 3 patients and in cutaneous biopsy in 1 patient. Of all the Aspergillus isolates
identified to the species level, Aspergillus fumigatus was isolated from 4 patients and Aspergillus
flavus from 1 patient. Overall and IA-attributable 12-week mortality was 8 (0.8%) and 6 (16.7%)
patients respectively.
Conclusion: IA is less frequently observed during induction therapy in adult ALL as compared to
adult AML patients. However, the attributable mortality appears to be high in these patients. They
are as at risk patients for IA and should be included in prophylactic and empirical antifungal clinical
trials.
P a g e | 73
Journée de la Recherche Médicale 2014
Recherche de molécules bioactives : criblage
d’un venin de scorpion sur la mobilité
spermatique chez l’homme
G. Martinez1,3, D. Reynaud1, J. Pecher4, J. Escoffier1, M. DeWaard2, E. Schmitt3, C. Arnoult1
1 – Equipe AGC, Laboratoire AGIM, FRE 3405, 38700 LA TRONCHE
2 – Equipe Canaux claciques, fonctions et pathologies, INSERM U607, CEA : DSV/IRTSV,
Université Joseph Fourier, 39054 GRENOBLE
3 – IMV Technologies France, ZI n°1 Est, 61300 L'AIGLE
4 – Smartox Biotechnology, 570 rue de la chimie, 38400 SAINT MARTIN D’HERES
Introduction
Un homme est déclaré atteint d’asthénozoospermie lorsque son taux de spermatozoïdes
mobiles progressifs est inférieur à 32% (normes OMS 2010). Ce paramètre est un indicateur
important de la qualité du sperme car le taux de conception in vivo des patients
asthénozoospermiques sévères est directement lié à la concentration de spermatozoïdes
mobiles progressifs. On retrouve chez le spermatozoïde humain de nombreux types de canaux
ioniques ayant une importance considérable dans les processus de signalisation et dont
certains sont indispensables à la mobilité. Les venins de scorpions possèdent une forte
présence de peptides neurotoxiques ayant pour les cibles les canaux ioniques des cellules
excitables dont elles perturbent le fonctionnement. Le répertoire en canaux ioniques du
spermatozoïde étant extrêmement étendu, le screening d’un venin de scorpion pourrait
permettre de mettre à jour des molécules bioactives agissant de façon positive sur la mobilité
spermatique.
Matériel et méthodes
Le venin est fractionné en 24 fractions à l’aide d’une colonne d’exclusion par poids
moléculaire. Des recueils de sperme sont effectués de manière stérile par des donneurs
volontaires dans des récipients adaptés. Après liquéfaction 30 minutes à 37°C, les paramètres
initiaux sont évalués et le patient est inclut ou exclut selon les critères d’inclusions suivants :
>40M spermatozoïdes par ml, <1M cellules rondes par ml et une viscosité normale. Le sperme
est dilué en milieu tamponné sous huile puis exposé 10’ au venin ou au PBS pour le contrôle.
2µl sont ensuite injectés dans une chambre d’analyse Leja de profondeur 20µm et les
trajectoires d’au moins 150 spermatozoïdes mobiles sont analysées à l’aide d’un système
CASA (Computer Assisted Semen Analysis). Les données obtenues pour les sept paramètres
proposés par le logiciel sont compilées puis analysées ultérieurement.
Résultats
Les moyennes des trois paramètres les plus représentatifs d’une éventuelle augmentation de
la mobilité spermatique (vitesse selon la trajectoire moyenne ou VAP, vitesse curvilinéaire ou
VCL et amplitude du déplacement latéral de la tête ou ALH) des échantillons contrôles ont été
confrontées aux moyennes obtenues pour les échantillons exposées aux fractions de venins.
Les fractions 9 (+22% VAP ; +21% VCL ; +5%ALH) et 22 (+18% VAP ; +25% VCL ; +19%
ALH) semblent moduler positivement la mobilité spermatique. Le logiciel d’analyse permettant
une classification des spermatozoïdes en plusieurs classes au sein de chaque paramètre, nous
avons analysés les variations de population au sein des classes des trois paramètres.
L’exposition au venin induit un déplacement des populations des classes les moins rapides
vers les classes les plus rapides ainsi que l’apparition d’une nouvelle population extrêmement
rapide présentant un mouvement accrus.
Conclusion
Deux fractions d’intérêt modulant positivement la mobilité spermatique ont été mises à jour.
Dans un futur proche, leurs différents composants (peptides) seront caractérisés, synthétisés
et leurs cibles spermatiques seront identifiées. L’utilisation des molécules ainsi découvertes
pourrait permettre l’amélioration de la qualité des échantillons classés comme
asthénozoospermiques.
P a g e | 74
Journée de la Recherche Médicale 2014
Evaluation du signal de fluxmétrie laser
Doppler rétinien et de la tête du nerf optique
chez le rat sain
Marielle Mentek1
Frederic Truffer2, Mario Bernabei2, Diane Godin-Ribuot1,
Florent Aptel1,3, Martial Geiser2, Christophe Chiquet1,3
1 Laboratoire HP2 INSERM U1042, , Université Joseph Fourier, Grenoble
2 Haute Ecole de Suisse Occidentale Valais, Sion, Suisse
3 Clinique Universitaire d’ophtalmologie, Plateforme de fluxmétrie, Centre Hospitalier
Universitaire de Grenoble, Université Joseph Fourier, Grenoble
Objectifs :
Un prototype de fluxmètre laser Doppler spécialement dédié au petit animal, notamment le
rat, a été développé afin d’étudier la vasoréactivité du flux sanguin rétinien et de la tête du
nerf optique chez le rat soumis à l’hypoxie intermittente (HI), modèle expérimental du
syndrome d’apnées du sommeil (SAS). Cette stratégie de recherche a pour but de
comprendre les mécanismes responsables des altérations du flux sanguin oculaire lors de
SAS. Le but de cette étude préliminaire est d’évaluer le signal provenant des tissus oculaires
(mouvement Brownien) et celle provenant du mouvement des hématies dans les artères
rétiniennes et la tête du nerf optique. Pour cela, des mesures LDF ont été réalisées lors d’arrêt
du flux sanguin rétinien par augmentation de la pression intraoculaire (PIO) et après la mort
de l’animal.
Méthode :
Les rats Wistar anesthésiés (n=6) sont immobilisés sur une table stéréotaxique modifiée
permettant la rotation et le positionnement micrométrique du LDF. Le fond d’oeil est illuminé
à l’aide d’une lumière verte (530 nm) et l’image est capturée à l’aide d’une camera CCD.
L’animal est intubé et ventilé mécaniquement pendant la durée des mesures (air ambiant). La
chambre antérieure de l’œil gauche est canulée avec une aiguille 27G1/2 reliée à un réservoir
contenant du liquide physiologique et un capteur de pression permettant le suivi en continu de
la PIO (Powerlab (AD Instrument). La PIO de base est fixée à 15 mmHg (PIO physiologique).
Après 3 minutes d’enregistrement à 15 mmHg, la PIO est augmentée à 150 mmHg pendant 4
min pour arrêter le flux sanguin rétinien. La PIO est ensuite ramenée à sa valeur de base pour
la fin de la mesure (8 à 10 minutes). Une mesure est réalisée sur une artère rétinienne et une
sur la tête du nerf optique, espacées de 20 minutes.
Résultats :
Une augmentation de la PIO à 150 mmHg (HTIO) diminue significativement la vélocité
artérielle rétinienne de 68 ± 9 % (p<0,005). Au niveau de la tête du nerf optique,
l’augmentation de PIO n’entraine pas de variation significative de la vélocité (4 ± 19 %), du
volume (3 ± 16 %) et du flux (6 ± 29%).
Après la mort de l’animal, la vélocité artérielle rétinienne est réduite de 80 ± 2 % (p<0,005).
La réduction du signal provenant de la tête du nerf optique est moindre (-40 ± 15 % pour la
vélocité (p=0,014), -22 ± 29 % pour le volume (p=0,28), et – 56 ± 20 % pour le flux
(p=0,21)).
Conclusion : L’hypertonie intraoculaire à 150 mmHg permet de réduire la pression de
perfusion oculaire et cette expérimentation induit un arrêt circulatoire. Le signal LDF
provenant de la tête du nerf optique est modérément altéré après la mort de l’animal, ce qui
suggère qu’une grande partie de ce signal provient du tissu lui-même et non du flux sanguin.
Par contre, le signal LDF artériel rétinien est altéré de façon très similaire après la mort ou
l’HTIO. Ceci suggère que ce signal reflète principalement les variations du flux sanguin dans le
système artériel rétinien et peut être utilisé comme outil pour étudier l’impact de l’HI à ce
niveau. Les résultats obtenus sur la tête du nerf optique sont probablement liés à la faible
densité capillaire du tissu, à la contribution de la vascularisation rétinienne et ciliaire
postérieure, et aux caractéristiques du signal physique.
P a g e | 75
Journée de la Recherche Médicale 2014
iTRAQ strategy to quantify phosphorylation
level of biologically active human factor IX
used for the treatment of hemophilia B
Sylvie Michelland, Nathalie Enjolras, Yesim Dargaud, Alice Indalecio, Michel Seve
Claude Négrier, Sandrine Bourgoin-Voillard
SMichelland@chu-grenoble.fr
Plateforme de Protéomique Prométhée
Univ. Grenoble Alpes, Institut Albert Bonniot INSERM U823, CHU Grenoble
Institut de Biologie et Pathologie - CS 10219
38043 Grenoble Cedex 9
Responsable : Pr. Michel Sève
Hemophilia B patients are commonly treated with plasma-derived FIX (pdFIX) prepared from
pooled human plasma or with recombinant FIX (rFIX) produced by transfected Chinese
hamster ovary cells (CHO). Therefore, the two molecules differ in pharmacokinetic
properties, hence in vivo recovery is lower with rFIX compared to that obtained with pdFIX.
This difference observed between rFIX and pdFIX is known to be depending on posttranslational modifications (PTMs) such as phosphorylation.
The aim of this study is to better understand the reasons of the low rFIX recovery by
identifying all differences between pdFIX and rFIX molecules in terms of phosphorylation
sites as well as the level of phosphorylation.
To achieve this goal, we analysed the rFIX (Benefix®) and pdFIX (Betafact®), using iTRAQnanoLC-MS/MS strategy. The samples were purified, deglycosylated, labeled with iTRAQ and
phosphopeptide enriched prior to analysis by nanoLC-ESI-MS/MS (4000 ESI-Qtrap, AB
Sciex).
Well-known N-glycosylation sites have been identified at N157 and N167. For the first time,
we reported the presence of 2 phosphorylation sites on 3 potential sites: S158 or T159 and
T163 in pdFIX form and showed that the pdFIX form was 100% phosphorylated while no
phosphorylation was detected on rFIX form.
Our approach represents an original way to identify new phosphorylation sites and to
quantify phosphorylation level of rFIX molecules exhibiting higher degrees of
phosphorylation for a better in vivo recovery. These informations are crucial to produce
novel rFIX molecules exhibiting PTMs similar to pdFIX and increasing recovery rates in
hemophilia B patients.
P a g e | 76
Journée de la Recherche Médicale 2014
Mécanismes physiopathologiques et prévention
des effets délétères de l’hypoxie intermittente
chronique sur le développement tumoral
MINOVES Mélanie1, VOLLAIRE Julien2, BRIANCON-MARJOLLET Anne1, COLL JeanLuc2, JOSSERAND Véronique2, GODIN-RIBUOT Diane1.
1
Laboratoire HP2, Inserm U1042, UFR de Médecine-Pharmacie, Université de Grenoble, France
2
Ontogenèse et Oncogenèse Moléculaire, Inserm U823, Institut Albert Bonniot,
Grenoble, France
Objectifs : Le syndrome d’apnées obstructives du sommeil (SAOS), est une pathologie dont la
prévalence est en constante progression. Il est caractérisé par la survenue d’épisodes nocturnes
d’apnées répétées induisant une hypoxie intermittente (HI). Deux études épidémiologiques
récentes ont montré que les patients apnéiques présentaient un risque majoré de cancer, et
notamment du cancer du sein. De plus, un lien a été établi récemment chez l’animal entre l’HI
chronique et la prolifération et l’angiogenèse tumorale, mais les mécanismes de cette croissance
tumorale demeurent mal connus. L’objectif de notre étude est de démontrer que l’HI favorise le
développement de tumeurs mammaires, et d’en comprendre les mécanismes. Nous nous
intéressons particulièrement à l’implication de l’endothéline-1 (ET-1) et du VEGF sous le contrôle
du facteur de transcription HIF-1 surexprimé en condition d’HI. De plus, nous investiguons les
effets anti-tumoraux d’un antagoniste mixte des récepteurs à l’ET-1.
Méthodes : In vivo, des cellules de cancer du sein humain MDAMB-231rvluc stablement
transfectées par un gène codant pour la luciférase ont été implantées en sous-cutané sur des
souris immunodéficientes afin de suivre le développement tumoral au pied à coulisse et par
imagerie de bioluminescence. Quatre groupes ont été exposés ou non à 28 jours d’HI et traités ou
non par un antagoniste mixte des récepteurs de l’ET-1, le macitentan. La bioluminescence permet
d’évaluer l’évolution du volume de la tumeur primaire ainsi qu’un développement métastatique
éventuel entre le premier et le dernier jour d’exposition. L’expression tumorale et péri-tumorale de
HIF-1, ET-1, VEGF est quantifiée par techniques biochimiques classiques (Elisa, Western blot). De
plus, la lignée a été soumise à une hypoxie in vitro afin d’étudier les mécanismes de la réponse
cellulaire indépendamment de l’environnement tumoral. Nous avons réalisé des tests de
prolifération en présence de modulateurs pharmacologiques de la voie HIF-1/ET-1 et les
expressions cellulaires de HIF-1, ET-1, et VEGF ont aussi été quantifiées.
Résultats : Les résultats ont montré une augmentation de la bioluminescence tumorale pour les
souris soumises à l’HI par rapport aux souris soumises à la normoxie. Nous mesurons une
augmentation du signal de bioluminescence tumorale de 660 % et 285% pour les souris HI et
pour les souris normoxie respectivement (p<0.05). Le traitement par macitentan a
significativement réduit la croissance tumorale pour les souris HI (330% d'augmentation de
bioluminescence) par rapport aux souris HI non traitées (p<0.05). Aucun effet du traitement n’a
été observé en normoxie. Nous avons également mis en évidence une augmentation de la
sécrétion d’ET-1 (30%) et du VEGF (15%) par les cellules tumorales exposées à une hypoxie
soutenue par rapport au contrôle normoxique (p<0.05).
Discussion : Ces résultats confortent notre hypothèse d’une influence de l’HI sur la
cancérogénèse et de l’implication de l’ET-1 dans ce phénomène. Toutefois, le modèle animal utilisé
dans cette première étude s’est avéré inadéquat du fait d’une croissance tumorale insuffisante
pour réaliser les analyses biochimiques et immunohistochimiques nécessaires à la compréhension
des mécanismes physiopathologiques et moléculaires en cause (implication de HIF-1, ET-1 et
VEGF). C’est pourquoi une nouvelle étude est actuellement en cours sur une lignée de cancer du
sein murin invasif (4T1-rvluc) implantée en intra-mammaire sur des souris immunodéficientes. Ce
modèle orthotopique a été choisi car sa cinétique de développement est bien caractérisée et qu’il
est scientifiquement plus pertinent qu’un modèle sous-cutané.
Conclusion : Nous espérons ainsi confirmer que le développement tumoral est majoré par les
effets de l’HI via l’activation de la voie HIF-1/ET-1. Ceci permettra de mettre en évidence un
mécanisme pro-tumoral spécifique des patients souffrant de SAOS, afin de proposer à terme une
approche thérapeutique innovante par l’antagonisme systémique du système HIF-1/ET-1.
P a g e | 77
Journée de la Recherche Médicale 2014
Caractérisation du profil de pousse spontanée
des progéniteurs érythroïdes et
mégacaryocytaires de patients TE et MFI en
fonction de leur statut moléculaire CALR
Julie Mondet1, Christophe Marzac2, Serge Carillo,3 Laurence Lodé 4, Claude-Eric Bulabois,5
Pascale Cony-Makhoul,6 Selim Corm,7 Benoit Polack,1,2 Jean-Yves Cahn,1,5 and Pascal Mossuz1,2
1
Institut de Biologie et Pathologie, Laboratoire d’hématologie cellulaire, CHU Grenoble,
Grenoble, 2Laboratoire d’hématologie, Hôpital Saint Antoine, Paris 3Laboratoire de cytologie
clinique et cytogénétique, CHU Carémeau, Nîmes; 4Institut de Biologie, CHU Nantes,
Nantes 5 Centre Hospitalier Universitaire, Unité d'Hématologie, Grenoble;
6
Centre Hospitalier d'Annecy, Service d'hématologie, Pringy;
7
Centre Hospitalier, Service d'hématologie, Chambéry.
La pousse spontanée de progéniteurs érythroides et/ou mégacaryocytaires est une caractéristique
fonctionnelle des néoplasmes myéloprolifératifs (NPM). Le lien avec certaines mutations
somatiques acquises été clairement établie pour la mutation JAK2V617F présente dans plus de
95% des polyglobulies de Vaquez. Très récemment, une nouvelle mutation somatique affectant le
gène de la calréticuline (CALR) a été décrite dans les NPM. La forte prévalence de ces mutations
CALR dans les thrombocytémies essentielles (TE), les myélofibroses primitives (MFP) et les
anémies réfractaires sidéroblastiques avec thrombocytose (ARS-T) suggère une association
particulière entre ces mutations et la production excessive de plaquettes, et par conséquence,
entre les mutations CALR et la pousse spontanée de progéniteurs mégacaryocytaires. D’autre
part, les mutations CALR, JAK2 et MPL sont mutuellement exclusives, suggérant que ces différents
génotypes de patients pourraient présenter des profils de pousse spontanée mégacaryocytaire
(EMC) et érythroïde (EEC) différents. En particulier, pour les 15 à 25% des patients TE ou MFP
triples négatifs (JAK2-/MPL-/CALR-) se pose la question de l’apport des pousses spontanées de
progéniteurs hématopoïétiques.
Objectif scientifique : Nous avons analysé chez 288 patients atteints de TE, de MFP ou de ARS-T
les relations entre leur statut moléculaire JAK2, MPL et CALR et leur profil de pousse spontanée de
progéniteurs érythroïdes et mégacaryocytaires.
Méthodes : La culture de progéniteurs a été réalisée à partir de prélèvements sanguin et/ou
médullaire selon une technique standardisée. Les mutations JAK2V617F et MPL ont été détectées
sur l’ADN des polynucléaires neutrophiles, par PCR de type ARMS et analyse haute résolution des
courbes de fusion respectivement. L’analyse des mutations CALR est réalisée chez les patients
JAK2 négatif par analyse de taille de fragments de PCR puis par séquençage Sanger.
Résultats : Nous avons retrouvé une pousse spontanée mégacaryocytaire (EMC) chez 76.5% des
patients CALR mutés. Comparativement les patients JAK2 et MPL mutés présentaient une pousse
spontanée mégacaryocytaire dans 84.9% et 76.5% des cas respectivement, sans différence
significative par rapport aux patients CALR mutés. Toutefois, l’étude de la prolifération des
progéniteurs érythroïdes montre une pousse spontanée de progéniteurs érythroïdes (EEC)
significativement plus fréquente chez les patients porteurs de la mutation JAK2V617F (p
value<0.05) que chez les patients CALR ou MPL mutés. Le calcul du ratio EEC/EMC (nombre de
patients EEC+ sur nombre de patients EMC+) confirme cette différence de profil de prolifération
entre d’une part, les patients JAK2 mutés et d’autre part, les patients CALR ou MPL mutés. Les
patients triples négatifs (JAK2-/MPL-/CALR-) présentaient une pousse d’EMC et d’EEC dans
seulement 27.5% et 4.3% des cas (p value<0.05 versus patients mutés).
Conclusion : Les mutations de CALR sont responsables de pousse spontanée de progéniteurs
hématopoïétiques confirmant leur rôle activateur sur les voies de signalisation associé à la
prolifération des progéniteurs hématopoïétiques. Les profils de pousses endogènes sont différents
selon le statut moléculaire des patients, suggérant que la nature du gène muté impact
préférentiellement le compartiment érythroïde (pour JAK2V617F) ou mégacaryocytaire (MPL,
CALR).
P a g e | 78
Journée de la Recherche Médicale 2014
Zinc regulates endothelial cell motility and
endothelin-1 secretion through HIF-1α
activation.
Jessica Morand, Irina Korichneva, EmelineLemarié, Sandrine Cachot, Anne Briançon-Marjollet and
Diane Godin-Ribuot
Laboratoire HP2, INSERM U 1042, Hypoxie : Physiopathologies
Faculté de Médecine et Pharmacie
Domaine de la merci
38706 La Tronche
France
Intermittent hypoxia (IH), one of the major components of Obstructive Sleep Apnea
Syndrome (OSAS), is at the origin of an oxidative stress responsible for deleterious
cardiovascular alterations (1, 2). We have previously shown that the Hypoxia-Inducible
Factor-1 (HIF-1) and one of its target genes, endothelin-1 (ET-1) a potent vasoactive peptide
secreted by endothelial cells, were key players in these alterations. The role of reactive
oxygen species in regulating HIF-1 activity is at least as important as hypoxia per se (3) and
redox-signalling pathways have been linked to changes in zinc homeostasis. Indeed, redox
signalling promotes zinc release from zinc-binding domains of proteins resulting in functional
changes, a phenomenon called “zinc redox switch” (4). This discovery has led to the
development of the unique concept that, in addition to serving a structural function in
proteins, zinc ions were likely to play a dynamic signalling regulatory role. Therefore, the aim
of this study was to observe whether perturbations of zinc homeostasis might modulate HIF-1
activity and ET-1 secretion, thereby leading to the cardiovascular alterations seen in OSA. This
is supported by a recent study showing that severity of apneas and oxidative stress in OSA
patients were associated with decreased zinc plasma levels (5).
In this study we tested whether changes in intracellular zinc content could modulate ET-1
secretion by human microvascular endothelial cells (HMVECs) through redox-dependent HIF-1
activity. Moreover, we investigated the effects of zinc chelation by N,N,N’,N’-Tetrakis(2pyridylmethyl)-ethylenediamine (TPEN) and ET-1 on endothelial cell migration using a woundhealing assay.
Using TPEN, we have observed that a decrease in intracellular zinc concentration induced both
ET-1 secretion and HMVEC motility (p<0.05 and p=0.056 respectively, versus control, twoway ANOVA with Bonferonni post-hoc comparisons, n=8 per group). We also demonstrated
that TPEN activated the translocation of the HIF-1α subunit from the cytosol to the nucleus
(p<0.01 versus control, t-test) where binding to the HIF-1 unit results in active HIF-1 and
transcription of target genes. Finally, using siRNA directed against the HIF-1α subunit, we
confirmed that HIF-1α was the mediator of the zinc-dependent ET-1 secretion and HMVEC
migration. Indeed, the effects of TPEN and ET-1 were significantly reduced in HIF-1α neg cells
compared to scrambled siRNA cells (p<0.001, two-way ANOVA with Bonferonni post-hoc
comparisons, n=6 per group).
These data uncover a novel regulatory role of zinc in HIF-1 activation by oxidative stress that
could be particularly important in cardiovascular pathologies associated with OSA and other
oxidative stress-related disorders.
P a g e | 79
Journée de la Recherche Médicale 2014
Role of EG-VEGF (endocrine gland derived
endothelial growth factor) in the human fetal
membranes.
T. Mouchet, W. Traboulsi, C. Dunand, S. Brouillet, J Guibourdenche, P. Hoffmann, M.
Benharouga, JJ. Feige and N. Alfaidy.
Biologie du Cancer et de l’Infection (BCI)
CEA Grenoble, iRTSV, BCI, INSERM U1036 17 rue des Martyrs – F-38054 Grenoble cedex 9 Tél
33 (0)4 38 78 47 27 – fax 33 (0)4 38 78 50 58 e-mail : U1036@inserm.fr
Objectives: We recently demonstrated that EG-VEGF and its receptors PROKR1 and PROKR2
are highly expressed in the human fetal membranes (FMs), with proposed protective role
during late pregnancy. Here, we investigated its effects on the amnion epithelial cells and
examined the effects of potential stressors such as deregulated osmolality, and infection on its
expression. The aims of this study were: to 1) determine the levels of EG-VEGF in the amniotic
fluid (AF) and in the hydramnios condition; 2) determine its effects on the permeability of the
amniotic layer; 3) assess the effect of the osmolality on EG-VEGF and its receptors expression
and 3) determine the effect of LPS (lipopolysaccharide) on its expression and that of its
receptors.
Methods: Amniotic fluids and sera were collected from pregnant women during the second
and the third trimesters. Human amniotic cell lines, WISH an FL were also used. ELISA was
employed to quantify EG-VEGF levels. RT-qPCR, western blotting and immunohistochemistry
were used to determine the effect of LPS and osmolality on EG-VEGF and its receptors
expression. Permeability test, western blotting and immunofluorescence were used to assess
EG-VEGF effect on amnion epithelial resistance and on the expression of junctional proteins,
respectively.
Results: We demonstrated that i) EG-VEGF is abundantly present in the AF throughout
pregnancy, ii) Its levels were 5 times higher in the AF compare to age matched sera, and it is
increased in the hydramnios condition iii) EG-VEGF increases the amniotic layer permeability
via PROKR1 and PROKR2 receptors, iv) hypotonicity but not hypertonicity increases PROKR1
and PROKR2 expression in amnion cells; and v) LPS significantly increased EG-VEGF, PROKR1
and PROKR2 expression.
Conclusion: These results demonstrate that EG-VEGF/ PROKRs is a new regulatory system
that might play key role in the homeostasis of the AF and its surrounding amniotic layer.
P a g e | 80
Journée de la Recherche Médicale 2014
Dysfonction diaphragmatique lors du sevrage
ventilatoire en cas de neuromyopathie de
réanimation : incidence et devenir.
P.-H. Moury 1, 2, F. Galia 2, M. Conseil 2, N. Claviéras 2, G. Chanques 2, B. Jung 2,S. Jaber 2
1
Pôle Anesthésie-Réanimation, CHU Grenoble, Grenoble, 2DAR St Eloi, Montpellier, France
PHMoury@chu-grenoble.fr; 10 place du St Eynard 3
HOPITAL SAINT ELOI ET INSERM U-1046 – PR S. JABER- CHU MONTPELLIER 80,
AVENUE AUGUSTIN FLICHE34295 MONTPELLIER CEDEX 5
Introduction :
La neuromyopathie de réanimation (NMR) est une complication fréquente et multifactorielle
qui contribue à la morbi-mortalité et à une réhabilitation difficile des patients. La NMR est
explorable chez un patient éveillé et coopérant par le Medical Research Council score (MRC
score) en évaluant la motricité périphérique. Il n’explore pas pour autant la fonction
diaphragmatique.
Objectif scientifique :
L’objectif principal était de déterminer l’incidence de la dysfonction diaphragmatique chez les
patients ayant une NMR (MRC<48/60). Les objectifs secondaires étaient d’évaluer les valeurs
de stimulation diaphragmatique, mécanique ventilatoire, et d’échographie diaphragmatique
chez les patients extubés avec succès.
Matériel et méthodes:
Etude monocentrique prospective observationnelle physiologique incluant consécutivement
tous les patients intubés présentant une NMR définit par un MRC score <48 le jour de la
première épreuve de ventilation spontanée. On évaluait la contraction du diaphragme par la
mesure de la pression trachéale après stimulation phrénique magnétique bilatérale (Ptr : une
Ptr inférieur à 11cmH20 définissant la dysfonction diaphragmatique) (1), et par échographie
du diaphragme. Ont été recueillis : démographie, force de contraction du diaphragme, MRC
score, échec ou succès à l’épreuve de ventilation spontanée et de l’extubation. En échographie
du diaphragme pendant une épreuve de ventilation spontanée ont été mesurée la course du
diaphragme, la taille du diaphragme en fin d’expiration (Tee), d’inspiration (Tei) et le calcul de
la fraction d’épaississement (Tei - Tee)/Tee x 100). Des tests non paramétriques et le calcul de
coefficients de corrélation ont été réalisés, p<0,05 était significatif.
Résultats
40 patients ont été inclus en 6 mois (à l’admission, IGS II : 51[42-60], SOFA 10[7-14], durée
de séjours de 25j[15-35] avec une Ptr à 6.5cmH20[3-10] et un MRC était de 31[20-36]. 32
patients (80%) avaient une Ptr inférieur à 11cmH20. Le coefficient de corrélation était de (R=0.01;p=0.9). La course du diaphragme était de 0.85[0.8-1.3] (82% inférieur à 1cm)(2);
l’épaisseur(Tee) était de 2.2[2-3]et la fraction d’épaississement (FE) était de 15.9[12-24] (
70% des patients inférieur à 20%)(3). 20 patients ont été extubés avec succès (50%). MRC
score et FE étaient significativement plus bas dans le groupe échec d’extubation (soit 35[3038] vs et 26[18-33] et 21.4% [15-36] vs 13.6%[10-18];p<0.05).
Conclusion :
Dans notre série, près de 80% des patients atteints d’une NMR ont une dysfonction
diaphragmatique mais 50% ont été extubés avec succès. Le lien entre l’intensité de l’atteinte
diaphragmatique et l’intensité de la NMR n’est statistiquement pas avéré. Dysfonction
diaphragmatique et NMR ne doivent pas systématiquement retarder l’extubation du patient
critique et peuvent être dépistés.
Référence :
1.
Jaber S, AJRCCM. 2 sept 2010;183(3):364‑371.
2.
Kim WY, CCM. 2011;39(12):2627.
3.
Matamis D, ICM 2013
Déclaration d’intérêt : Aucun
P a g e | 81
Journée de la Recherche Médicale 2014
SWAN-iCare : prise en charge des plaies de pied
diabétique par Pression Négative et monitoring
à distance de la cicatrisation.
Auteurs : Isabelle Texier1, Marc Correvon3, Natascha Bue4, Massimo Laurenza5,7, Leonidas
Lymperopoulos6, Dimitrios Soudris8, Carl Saxby9, Thierry Navarro10, Fabio di Francesco11,
Marco Romanelli12, Marie Muller2, Pierre-Yves Benhamou2
(1) Commissariat à l’Energie Atomique et aux Energies Alternatives (CEA). (2) CHU Grenoble
(3) Centre Suisse d’Electronique et de Microtechnique SA. (4) European Wound Management
Association Secretariat. (5) Euroresearch. (6) EXUS S.A. (Coordinateur). (7) Heamopharm
Biofluids. (8) Institute of Communications and Computer Systems. (9) Smith & Nephew.
(10) SWISSINNOV. (11) Università di Pisa
Coordonnées 1
er
auteur : Dr Marie Muller. Service de Diabétologie. CHU de Grenoble.
Mmuller@chu-grenoble.fr
Introduction :
La télémédecine s’étend à tous les domaines de la santé, dont la cicatrisation des plaies
chroniques. Les plaies de pied diabétique et les ulcères veineux représentent une part
importante de ces plaies.
Méthodes :
Description préliminaire du projet Européen FP7-ICT-2011-8 visant à élaborer un système de
soins pour plaies chroniques intitulé SWAN-iCare.
Résultats :
De septembre 2012 à septembre 2016, un consortium de cliniciens et de scientifiques va
élaborer un nouveau système de prise en charge des plaies chroniques : le système SWANiCare, dédié principalement aux plaies de pied diabétique et aux ulcères veineux.
Ce système reposera sur un traitement par pression négative réalisable au domicile du
patient, couplé à un monitoring à distance de la cicatrisation à partir :
- de capteurs situés au voisinage de la plaie pour mesurer certaines caractéristiques physicochimiques de l’exsudat impactant sur la cicatrisation (pH, taux de protéases, …).
- de mesure de la pression plantaire pour les plaies de pied diabétique ou de la dorsiflexion
pour les ulcères veineux, ou encore d’un suivi de l’oxygénation de la plaie.
Le but est d’offrir pour des plaies dites « difficile à cicatriser» un outil de monitoring pour le
centre de cicatrisation en charge du patient, afin d’améliorer la prise en charge globale de ces
plaies de pronostic incertain.
Les résultats présentés ici tracent les grandes lignes de ce projet, dans les limites du respect
de la propriété intellectuelle.
Conclusion :
Dans un avenir proche, on peut s’attendre au développement du traitement par pression
négative pour les plaies chroniques, associé à des systèmes de monitoring à distance reposant
sur des capteurs de différentes caractéristiques des plaies concernées.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
MeCP2 Is Critical for Maintaining Mature Adult
Neuronal Networks and Global Brain Anatomy
Minh Vu Chuong Nguyen1, 4, Fang Du1, Christy A. Felice1, Xiwei Shan1, Aparna Nigam1, Gail
Mandel3, John K. Robinson2 and Nurit Ballas1
Departments of 1Biochemistry and Cell Biology, and 2Psychology, Stony Brook University, Stony Brook,
New York, 11794. 3Vollum Institute and Howard Hughes Medical Institute, Oregon Health and Science
University, Portland, Oregon 97239. 4Université Joseph Fourier, GREPI AGIM FRE 3405, CNRS, EPHE,
Grenoble.
Intérêt et cadre de la recherche: Le syndrome de Rett est un désordre neurologique lié à
l’X causé par le dysfonctionnement du facteur de transcription MeCP2 (methyl CpG binding
protein 2) qui touche aléatoirement une fille sur 10 000 à 23 000. Après une période de
développement normal, les patientes démontrent un retard mental lié à l’autisme associé à
une perte du langage et des capacités motrices, une microcéphalie et un syndrome de
détresses respiratoires. L’emploi de modèles animaux invalidés pour le gène Mecp2, qui
rassemblent l’ensemble des caractéristiques du RTT, a permit d’établir que la maladie résulte
principalement du dysfonctionnement de MeCP2 dans le cerveau. Semblable au déroulement
de la maladie chez l’homme, les souris males déficientes pour Mecp2 connaissent une période
de croissance normale avant de développer les symptômes caractéristiques entrainant ainsi
une mort précoce. Les mécanismes entrainant la maladie ne sont pas clairement définis.
Objectif scientifique: Etant donné que chez ces souris ko, l’absence de MeCP2 se fait au
niveau des cellules germinales et que la maladie se déclare seulement qu’au stade juvénile, la
question se pose alors à savoir à quelle période MeCP2 est le plus nécessaire au
fonctionnement cérébral.
Méthodes: Pour déterminer si MeCP2 est nécessaire au bon fonctionnement du cerveau
adulte ou si le syndrome de Rett est causé seulement dans les phases précoces du
développement, nous avons utilisé un modèle murin permettant d’induire l’excision du gène
Mecp2 par la recombinase Cre, activée suite à l’injection du tamoxifen, à différents âges.
Résultats: Nos données montrent que l’absence de MeCP2 à 5 semaines (stade où le cerveau
est en cours de développement) ou à 10 semaines (stade où le cerveau a atteint globalement
sa maturité) entraine une cinétique de développement des symptômes similaire à celui des
souris ko conventionnelles, y compris une mort prématurée. Nous montrons pour la première
fois que suite à la suppression de MeCP2, le cerveau et l’ensemble de ces structures
rétrécissent progressivement, accompagnés par une augmentation anormale de la densité
neuronale. Tout ceci s’accompagne d’une régression progressive de la complexité dendritique
des neurones ainsi qu’une diminution de la densité des épines dendritiques (reconstruction 3D
des neurones) ; suggérant une élimination active de synapses. On assiste aussi à une
diminution drastique des protéines synaptiques telles que CaMK2α/β, des récepteurs AMPA
and NMDA ainsi que Vglut1 et synapsin, qui jouent un rôle clé dans l’organisation et la
fonction de la structure synaptique. Alors que ces symptômes et anomalies neuronales
surviennent entre 10 à 20 semaines lorsque MeCP2 est éliminée à l’âge de 5 et 10 semaines,
les mêmes déficits, y compris une mort précoce, apparaissent seulement 1 à 2 semaines
après que MeCP2 soit supprimée à l’âge de 15 semaines (stade où le cerveau a atteint sa
maturité) ou au delà.
Conclusions: Ainsi, ces travaux ont permis de montrer une implication grandissante de
MeCP2 au cours du développement, qui devient essentielle à l’âge adulte en particulier à partir
de la 15ème semaine de vie chez la souris. Nos données suggèrent donc un rôle crucial de
MeCP2 dans la maintenance des structures et des fonctions neuronales matures et par
conséquent à la survie de l’animal. Ceci implique également qu’un futur traitement efficace
contre le syndrome de Rett devrait être maintenu tout au long de la vie de la patiente.
Nguyen M.V., Du F, Felice C, Shan X, Nigam A, Mandel G, Robinson J.K and Ballas N. MeCP2 is critical for
maintaining mature neuronal networks and global brain anatomy during late stages of postnatal brain development
and in the mature adult brain. 2012. Journal of Neuroscience. 32:10021-34.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Standardized delivery can be associated with
resistance to bevacizumab
Guillaume Nugue, Marie Bidart, Marie Arlotto, Mireille Mousseau,
François Berger,Laurent Pelletier
INSERM U836 – Equipe 7 « nanomédecine et Cerveau »
Responsable d’équipe : Pr F. Berger
Grenoble Institut des Neurosciences (GIN)
Chemin F Ferrini
38700 La Tronche
Context
Bevacizumab is a monoclonal antibody targeting Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)
applied in oncology to limit tumor vascularization. It is administrated as targeted therapeutic
agent, but lacks biomarkers for a entering into a personalized strategy. As a result, the
efficacy or side effects associated with this treatment appear to be sporadic. Mechanisms
underlying resistance to bevacizumab are largely misunderstood.
Aim
We investigated whether bevacizumab pharmacokinetics could at least partially be responsible
for inter-patient discrepancies.
Methods
We developed a bevacizumab assay with a broad sensitivity range to measure blood
bevacizumab concentrations.
Results
The bevacizumab administration schedule results in a high inter-individual variability in terms
of blood concentrations. The comparison with clinical data indicates that blood concentrations
above the median are associated with side effects, whereas values below the median favor
inefficacy.
Conclusion
In conclusion, bevacizumab-based therapy could benefit from a personalized administration
schedule including follow-up and adjustment of circulating bevacizumab concentrations.
Reference
Monitoring monoclonal antibody delivery in oncology: the example of bevacizumab.
Nugue G1, Bidart M, Arlotto M, Mousseau M, Berger F, Pelletier L.
PLoS One. 2013 Aug 12;8(8):e72021. doi: 10.1371/journal.pone.0072021.
P a g e | 84
Journée de la Recherche Médicale 2014
Interaction NADPH oxydase et glycolyse dans le
neutrophile stimulé : rôle de la 6phosphofructokinase 2
Athan Baillet 1, Marc-André Hograindleur 1, Jamel El Benna 2, Alexei Grichine3, Sylvie
Berthier 1, Françoise Morel 1, Marie-Hélène Paclet 1,4 *
1
Université Joseph Fourier, GREPI - AGIM FRE3405 CNRS, Grenoble, France.
2
INSERM, U773, CRB3, Université Paris 7, Paris, France.
3
Platform ‘Optical microscopy-cell imaging’, UJF/Inserm U823, Institut Albert Bonniot, La
Tronche, France.
4
Lab. Biochimie des Enzymes et Protéines, C.H.U. Grenoble, Grenoble, France.
La NADPH oxydase phagocytaire (Nox2) est un complexe enzymatique responsable de la
production endogène de radicaux oxydants. Son activité est déclenchée par la translocation de
facteurs cytosoliques régulateurs sur le centre catalytique membranaire, le cytochrome b558.
Pour mieux comprendre les mécanismes de régulation de l’activité de cette enzyme et
identifier de nouveaux partenaires, nous avons précédemment isolé à partir des fractions
cytosolique et membranaire de neutrophiles, le complexe de la NADPH oxydase sous une
forme constitutivement active. L’analyse protéomique a permis de mettre en évidence dans ce
complexe une enzyme participant au métabolisme du glucose, la 6-phosphofructokinase-2
(PFK-2).
Dans ce travail, l’objectif était : 1) de vérifier la spécificité d’interaction de PFK-2 avec la
NADPH oxydase et 2) de caractériser le rôle de PFK-2, une enzyme régulant la glycolyse, dans
la régulation de l’activité NADPH oxydase des neutrophiles.
Des expériences de microscopie confocale ont montré une co-localisation de PFK-2 avec le
cytochrome b558 et les radeaux lipidiques dans les neutrophiles stimulés. Dans sa forme
active, PFK-2 est responsable de la production de fructose-2,6-diphosphate, le régulateur
allostérique de la phosphofructokinase-1 (PFK-1), l’enzyme limitante de la glycolyse. La
stimulation des cellules induit la phosphorylation de PFK-2 et l’augmentation de la glycolyse.
L’inhibition pharmacologique de la phosphorylation de PFK-2 (phosphorylation qui induit son
activation) dans les neutrophiles stimulés induit une inhibition de la glycolyse (mesurée par la
vitesse de la réaction catalysée par la PFK-1) mais également une diminution de l’activité de
Nox2. De manière inattendue, l’inhibition de Nox2 est corrélée à une diminution de la
glycolyse dans les cellules stimulées.
Ce travail montre que la PFK-2 phosphorylée, c’est-à-dire la forme active de la kinase est
associée au complexe de la NADPH oxydase. Cette association est spécifiquement retrouvée
dans les neutrophiles, dont la fonction est de produire massivement des radicaux oxydants,
en réponse à un stimulus inflammatoire. D’autre part, les neutrophiles, comme les cellules
tumorales, utilisent la glycolyse comme source principale d’énergie (à la différence de la
plupart des cellules qui utilisent la voie aérobie).
Les données montrent que dans les neutrophiles, en réponse à un stimulus inflammatoire :
1) Les enzymes impliquées dans le métabolisme énergétique sont relocalisées proche du
complexe de la NADPH oxydase membranaire ce qui favorise la production locale d’énergie
nécessaire pour le fonctionnement de l’enzyme ;
2) L’activité de Nox2 est nécessaire pour augmenter l’activité glycolytique ;
3) PFK-2 devient un carrefour entre deux voies importantes du neutrophile : la glycolyse et
l’activation de Nox2.
PFK-2 apparaît comme une nouvelle cible thérapeutique pour moduler l’activation de Nox2
dans des situations pathologiques.
P a g e | 85
Journée de la Recherche Médicale 2014
Modified informed consent documents do not
improve patients understanding in biomedical
research while decreasing the rate of final
enrolment, the LISYCOM study. A randomized
control multicenter study performed
in real conditions
Adeline PARISa, Béatrice DEYGASb, Catherine CORNUc, Claire THALAMASd, Patrick MAISONe, Christian
DUALEf, Maty KANEa, Enkelejda HODAJa, Jean-Luc CRACOWSKIa
a
Centre d'Investigation Clinique, GRENOBLE cedex9 - FRANCE, b Centre d'Investigation Clinique, SAINTETIENNE - FRANCE, c Centre d'Investigation Clinique, LYON - FRANCE, d Centre d'Investigation Clinique,
TOULOUSE - FRANCE, e URC, CRETEIL - FRANCE, f Centre d'Investigation Clinique, Clermont-Ferrand FRANCE
Interest
Many methods to improve informed consent in biomedical research have been performed, but
there is still no consensus due to the lack of large randomized controlled trials in a real setting.
Objective
In our study, we aimed at evaluating the impact of an improved informed consent document
on subject’s comprehension and on the final agreement to participate to the clinical trial.
Patients and Methods
Patients recruited for eligibility in real clinical studies, more than 18 years old, were recruited
in 6 French centres ( Clermont-Ferrand, Créteil, Grenoble, Lyon, Saint-Etienne and Toulouse).
The studies selected were randomised therapeutics studies. The patients were informed either
with an original or a modified consent form. All the modified and original consent forms were
beforehand approved by an ethic committee. Briefly after information, patients were asked to
answer a questionnaire which evaluates comprehension (QECIEM). Our primary end-point was
the score of objective comprehension and analyses were performed in intention to treat after
completing missing data with multiple imputation. We also assessed the final rate of enrolment
in the clinical trial as a secondary endpoint.
Results
Four hundred eighty one patients were included between 08 April, 2009 and 13 March, 2013.
Patients characteristics are given in table 1.
Main objective: In the intention to treat analysis, there was no difference between the 2
groups for the score of objective comprehension (72.7 (IC95%: 71.3-74.1) for the standard
versus 72.5 (IC95%: 71.0-74.0) for the modified document; p=0.810).
Secondary objectives: In the per protocol analysis, there was no difference between the 2
groups for the score of objective comprehension (72.5 (IC95%: 71.3-74.1) for the standard
versus 72.5 (IC95%: 71.0-74.0) for the modified document; p=0.83). Final rate of enrolment
was higher in the original group.
A univariate analysis showed that women had a better comprehension than men, that age was
inversely and school level directly correlated with the score of objective comprehension.
Finally, the fact that a patient works or worked in medical/paramedical area was associated
with an improved comprehension.
In a multivariate analysis, female gender and high school level were the only parameters
associated with a better objective comprehension.
Conclusion
Improving informed consent form in term of readability and applying the recommendations of
good practice to write an informed consent form were not associated with a better
comprehension in our population, but decreased the rate of final enrolment.
Bibliography
Informed consent document improvement does not increase patients' comprehension in biomedical research. Paris A,
Brandt C, Cornu C, Maison P, Thalamas C, Cracowski JL. Br J Clin Pharmacol. 2010 Mar;69(3):231-7.
Improvement of the comprehension of written information given to healthy volunteers in biomedical research: a
single-blind randomised controlled study. Paris A., Nogueira Da Gama Chaves D. et al. Fund Clin Pharmaco 2007, 21:
207-214
P a g e | 86
Journée de la Recherche Médicale 2014
Modélisation des expositions aux mélanges
d’hydrocarbures aromatiques polycycliques
pour une meilleure estimation
des risques sanitaires
1
Pascal Petit1, Dominique J. Bicout1,2, Renaud Persoons1,3, Anne Maître1,3
Equipe Environnement et Prédiction de la Santé des Populations, Laboratoire TIMC-IMAG (UMR 5525)
UJF Grenoble (Dr P. Cinquin), Faculté de Médecine, Domaine de la Merci, 38700 La Tronche
2
Unité Biomathématiques et Epidémiologie, VetAgro Sup, Campus vétérinaire de Lyon, 1 avenue
Bourgelat, 69280 Marcy l’Etoile (Dr S. Martinot)
3
Unité Médicale de Toxicologie Professionnelle et Environnementale (Pr Anne Maître) - DBTP – IBP
CHU de Grenoble - CS 10217- 38043 Grenoble Cedex 9
pascal.petit@imag.fr, dominique.bicout@imag.fr
Intérêt et cadre de la recherche : Des millions de travailleurs sont exposés aux
Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) dans divers secteurs industriels (Aluminium,
Bitumes…). Dans l’atmosphère, les HAP se retrouvent toujours sous forme de mélanges
complexes de gaz et de particules dont la composition est variable et dépend surtout des
sources d’émission (combustion ou distillation de dérivés pétroliers ou de charbon). Les HAP
sont des polluants ciblés comme prioritaires du fait de la cancérogénicité pour l’homme de
certains composés particulaires (benzo[a]pyrène, BaP). L’estimation des risques sanitaires des
travailleurs exposés se heurte au manque de connaissances des expositions et de la
composition chimique des mélanges.
Objectif: Afin de caractériser précisément les mélanges d’exposition aux HAP dans le but
d’évaluer ultérieurement les risques des travailleurs, nous avons développé une approche
pour déterminer des groupes ayant des fonctions d’exposition aux HAP similaires.
Méthodes : Depuis 1995, les concentrations atmosphériques d’HAP (gaz et particules) sont
mesurés pendant 3 durées (<2H, 2-5H, >5H) et enregistrées dans la base Exporisq-HAP pour
différentes entreprises. Chaque entreprise appartient à un secteur industriel qui est divisé en
postes de travail, lesquels sont subdivisés en activités professionnelles. L’approche a consisté
à regrouper les secteurs dont les fonctions d’exposition présentent des caractéristiques
similaires, créant ainsi une matrice activité industrielle-source d’exposition. Pour chaque
durée, des classifications hiérarchiques ascendantes ont été réalisées sur chaque poste et
activité en utilisant les distributions des concentrations individuelles de 16 HAP. La coupure
des dendrogrammes résultants (réalisée pour un degré d’homogénéité ≥70%) a permis
l’identification des groupes. Ces expositions d’HAP ont ensuite été modélisées en termes de
distributions des HAPs.
Résultats : Parmi les 1000 prélèvements individuels d’HAP collectés dans 9 secteurs
industriels, 12 groupes ont été identifiés : 3 pour les prélèvements <2H, 4 pour ceux de 2-5H
et 5 pour ceux >5H. Aucun des secteurs ne se retrouve dans un seul groupe du fait de la
variabilité des postes et activités. Par exemple, les postes de production de silicium
(chargement du four en matières premières et coulée) sont dans un groupe différent des
postes d’entretien des électrodes composites d’alimentation du four. Parmi ces postes, les
activités de chargement de pâte de brai et de soudage des viroles sont dans un groupe
différent de l’activité de nipplage. Ceci souligne qu’il est indispensable de connaître le poste du
salarié et même le détail de ses activités professionnelles pour caractériser précisément son
exposition. Quel que soit le groupe, le naphtalène est de loin le composé majoritaire de la
phase gazeuse mais il est peu corrélé avec les HAP gazeux et encore moins avec les HAP
particulaires. Par contre au sein de la phase particulaire, aucun composé n’est largement
dominant mais les différents HAP sont corrélés entre eux. Plusieurs de ces composés (ex. :
fluoranthène) sont corrélés au BaP tout en étant en plus grande quantité que ce dernier au
sein du mélange. Leurs intérêts pour discriminer l’exposition sont donc des pistes à explorer.
Conclusions : Les matrices activité industrielle-source d’exposition ainsi créées permettent
de fournir les profils des niveaux d’exposition attendus pour les travailleurs à partir de leur
activité professionnelle. Ces résultats vont être utilisés pour évaluer les risques sanitaires des
différents groupes identifiés dans cette étude et soulignent que l’interrogatoire par le médecin
du travail est primordial.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Is soluble VE-cadherin a biomarker of targeted
herapies? First study with Sunitinib
Helena Polena1.2.3, Julie Creuzet1.2.3, Adama Sidibé1.2.3, Caroline Roelants1.2.3, Odile Filhol1.2.3,
Claude Cochet1.2.3, Ellen Blanc5, Céline Ferlay-Segura5, Bernard Escudier6, Sylvie Négrier5,
IsabelleVilgrain1.2.3
1
INSERM, Unit 1036, Biology of Cancer and Infection, Grenoble, F-38054, France ; 2UJFGrenoble 1, Biology of Cancer and Infection, Grenoble, F-38041, France ; 3CEA, DSV/iRTSV,
Biology of Cancer and Infection, Grenoble, F-38054, France ; 4Grenoble University Hospital,
Division of Internal Medicine, Grenoble, F-38043, France ; 5Unicancer, University of LyonCentre Léon Berard, Lyon, F-69373, France ; 6Department of Medical Oncology, Gustave
Roussy, Villejuif, France.
The development of targeted agents has substantially improved the prognosis of
patients with metastatic renal cell carcinoma (mRCC). These agents are targeting the vascular
endothelial growth factor (VEGF) pathway. In order to better identify the patients who are
likely to benefit from a particular agent, biomarkers need to be developped. Because these
molecules target signaling pathways in endothelial cells in order to inhibit capillary network
growth in tumors, and thus tumor growth, the aim of this study was to analyze the effects of
these therapies on endothelial cells. Vascular endothelial (VE)-cadherin is the major
endothelial protein specifically expressed in all vascular endothelial cells and is responsible for
endothelium integrity. Its adhesive properties are regulated by post-translationnal processing,
including tyrosine phosphorylation in its cytoplasmic domain, and cleavage of its extracellular
domain (called sVE). We thus analyzed (a) the effects of antiangiogenic molecules on VEGFinduced VE-cadherin structural modifications (phosphorylation and cleavage), (b) the mRCC
cells secreted proteases, and their potency to induce VE-cadherin cleavage, and (c) the level
of sVE in mRCC patients serum treated with targeted therapies such as Sunitinib. We
demonstrate that VEGF-induced VE-cadherin phosphorylation at site Y685 and cleavage was
almost completely suppressed by Sunitinib treatment, but not by Temsirolimus, suggesting
that VE-cadherin tyrosine phosphorylation is a prerequisite for sVE generation. Furthermore,
we found that MMP2 and MMP9 secreted by mRCC cells are involved in the release of sVE. In
addition, mRCC patients (n=115) sera showed an increased levels of sVE as compared to
healthy donors (n=95). In patient treated with Sunitinib, a decrease of sVE levels was
observed in 76.2% of the patients after 15 days of treatment and in 83.3% after 40 days.
Interestingly, these observations followed the same variation of sVE levels obtained at the
cellular level. Altogether, our data strongly suggest for the first time that VE-cadherin is a
target for Sunitinib but not Temsirolimus, and that sVE might represent a potential candidate
for use as a biomarker in mRCC clinical management. Prospective validation of sVE levels in
mRCC is now required.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Première étude fonctionnelle de mutations
d’ECEL1, un nouveau gene
d’arthrogrypose distale
Brice POREAU, Klaus Dieterich, Nicole Monnier, Isabelle Marty, Julien Fauré
Equipe Muscle et Pathologies, Dr Isabelle MARTY, INSERM U836, Grenoble Institut des
Neurosciences, BP170, 38042 Grenoble Cedex 09, France
Email : bporeau@chu-grenoble.fr
Intérêt et cadre de la recherche : L’arthrogrypose congénitale multiple (AMC) est définie
comme une limitation articulaire congénitale de deux niveaux d’articulations au minimum. Une
personne sur 3000 à 12000 en est atteinte. Elle est la conséquence d’une réduction des
mouvements fœtaux. Récemment des études menées au laboratoire de Biochimie et
Génétique Moléculaire du CHU de Grenoble ont élargi le répertoire de mutations d’ECEL1
(endothelin-converting enzyme like 1) associées à un type d’arthrogrypose distale spécifique.
Ce gène a été associé à ce type d’AMC en 2013 par Dieterich et al. (Service de Génétique,
CHU de Grenoble). Les mutations conduisant à une perte de fonction (non-sens, épissage)
sont majoritaires, mais trois mutations faux-sens sont dorénavant recensées en amont du
domaine enzymatique. Nous allons entreprendre la première étude fonctionnelle de ces
mutations faux-sens ainsi que d’une mutation incluse dans le domaine d’activité enzymatique.
Objectif scientifique : Etudier l’impact de chacune des 4 mutations sur l’expression et la
localisation de la protéine ECEL1 par analyse in vitro sur des modèles cellulaires et mettre en
place un test enzymatique pour évaluer l’activité enzymatique si la localisation et l’expression
ne sont pas affectées.
Méthodes : Après élaboration des plasmides, les formes mutées ont été exprimées dans
deux types de lignées cellulaires, les cellules COS-7 et les cellules HEK293. A l’issue des
transfections, une observation par microscopie confocale a été effectuée pour la localisation
ainsi qu’une analyse d’expression en Western Blot. Le test d’activité enzymatique a été mis en
place, en adaptant un test utilisé pour une enzyme de la même famille (endopeptidase), basé
sur la coupure d’un court peptide disponible commercialement produisant une réaction
colorimétrique détectable par spectrophotométrie (lecture de l’absorbance à 405nm).
Résultats : Pour les quatre mutants avec quatre transfections indépendantes (n=4),
l’expression protéique n’est pas diminuée (p>0,05). De même, la localisation est identique.
Le test enzymatique a été mis en place. Une diminution de l’activité de la mutation
p.Cys760Arg (n=4, p<0,001), incluse dans le domaine d’activité enzymatique, a été détectée.
L’activité n’est pas diminuée pour les trois autres mutations suggérant d’autres mécanismes
physiopathologiques.
Conclusion : Un nouveau test d’activité enzymatique de l’endopeptidase ECEL1 a été mis au
point. Il pourra être adapté à une activité de diagnostic au laboratoire Biochimie et Génétique
Moléculaire. Un déficit d’activité enzymatique a été retrouvé confirmant l’étiologie de
l’arthrogrypose chez ces patients par un mécanisme perte de fonction. Il s’agit de la première
étude aboutissant à ce résultat.
Bibliographie sélective :
Dieterich K., Quijano-Roy S., Monnier N., Zhou J., Fauré J., Avila Smirnow D., Carlier R.,
Laroche C., Marcorelles P., Mercier S., Mégarbane A., Odent S., Romero N., Sternberg D.,
Marty I., Estournet B., Jouk P. S., Melki J., Lunardi J. (2013) The neuronal endopeptidase
ECEL1 is associated with a distinct form of recessive distal arthrogryposis, Human Molecular
Genetics, 22(8):1483-92.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Nouvelle stratégie préventive anti-HIV: vers le
développement d'un microbicide prometteur
Vanessa Porkolab,1 Eric Chabrol,1 Michel Thépaut,1 Ieva Sutkeviciute,1 Stefania Ordanini,2 Norbert
Varga,2 Anna Bernardi,2 Franck Fieschi.1
1
Université Joseph Fourier, Institut de Biologie Structurale (IBS), Grenoble, France
2
Università degli Studi di Milano, dipartimento di Chimica, Milano, Italie
Institut de Biologie Structurale
6 rue Jules Horowitz
38000 Grenoble
directrice: Mme Pebay-Peyroula Eva
Ce projet fait parti du développement de nouveaux microbicides contre le VIH. Certains
microbicides développés auparavant utilisant des anticorps ou inhibiteurs de transcriptase,
inhibent jusqu'à 39 % le risque d'infection au VIH, ce qui est insuffisant. Les microbicides ainsi
testés sont jusqu'alors pas assez efficaces pour être retenu en terme de prévention.
La capture et les premières étapes de transmission du virus des muqueuses vers les
organes lymphoïdes, où commence de manière productive l’expansion virale, sont sous la
dépendance de récepteurs lectines de type C (CLRs) présent à la surface des cellules
dendritiques, cellules sentinelles de l'immunité. Parmi ces récepteurs, DC-SIGN est impliquée
dans le transfert du virus vers les lymphocytes T. Inversement la Langerine, autre lectine, a
un effet protecteur en internalisant le virus dans des granules de "Birbeck" où ils seront
dégradés in fine.
Lors de la phase primo-infection, l'accroche du virus se fait par la reconnaissance de motifs
polysaccharidiques exprimés à la surface de la glyprotéine viral GP120 avec les récepteurs
lectines (DC-SIGN et Langerine) présentés à la surface des cellules dendritiques.
A partir de ces observations, l'idée soutenue et validée a été de développer des inhibiteurs
dirigés contre DC-SIGN avec un accent particulier sur l’optimisation de l’affinité et de la
sélectivité de ces inhibiteurs pour DC-SIGN (et éliminant tout effet sur la Langerine).
Dans notre laboratoire, et plus largement au sein de notre consortium, des inhibiteurs
hautement sélectifs pour DC-SIGN (vs la Langerine) ont été obtenus tout récemment. La
recherche de la structure de présentation multivalente adéquate pour maximiser cette
inhibition permettra d'utiliser ces nouveaux composés comme potentiels médicaments
thérapeutiques susceptibles d'intéresser les firmes pharmaceutiques.
Des résultats préliminaires avaient été obtenus, par notre équipe, sur des explants
vaginaux montrant une inhibition de l'infection proche de 80-90%. (Berzi et al, AIDS 2012,
26:127-137). Ces résultats sont prometteurs pour la suite de ce projet.
La synthèse des inhibiteurs est assurée par des collaborateurs italiens (Groupe de Anna
Bernardi, Università di Milano, Italie).
L'étude structurale de l'interaction mais aussi la détermination de l'affinité de ces molécules
avec les protéines impliquées dans l'infection est faite dans notre laboratoire.
Et pour finir, les études pré-cliniques permettant de tester les inhibiteurs sélectionnés, dans
des test cellulaires ou sur des explants vaginaux, sont assurés par le département des sciences
biomédicales et technologies, Università di Milano, sous la direction de Pr. Mario Clerici.
Cette recherche d'un nouveau microbicide anti-VIH est encadrée par des équipes
compétentes et pluridisciplinaires alliant leur connaissance pour le développement d'un outil
thérapeutique prometteur.
P a g e | 90
Journée de la Recherche Médicale 2014
Suivi de l’oxygénation profonde de tissus in vivo
à l’aide de l’imagerie optique : résultats
précliniques sur rats
Agathe Puszka1, Marion Aribert2, Anne Planat-Chrétien3, Michel Berger3, Jean-Marc Dinten3, Jean-Luc
Coll1, Georges Bettega2
1
IAB, La Tronche
2
CHU, Grenoble
3
CEA, LETI, Grenoble
L’imagerie optique proche infrarouge permet d’être sensible à la proportion d’hémoglobine
oxygénée (HbO2) et non oxygénée (Hb) présente dans un tissu et peut donc potentiellement
détecter une occlusion veineuse ou artérielle dans ce tissu. Dans le cadre de nos recherches,
nous étudions la possibilité de confirmer la pertinence de telles mesures en profondeur avec
une sonde optique dédiée à la tomographie optique diffuse endogène. Cette sonde compacte
regroupe toutes les fibres sources et détecteurs sur un disque de 2.5 cm de diamètre. Pour
augmenter la sensibilité en profondeur dans cette configuration à faibles distances entre
sources et détecteurs, une approche résolue en temps est mise en œuvre. Cette sonde est
couplée à une baie comportant un laser pulsé et des détecteurs de photons uniques associés à
une carte de comptage TCSPC (time-correlated single-photon counting).
Les distributions de temps de vol des photons mesurées par tous les couples sourcedétecteur sont ensuite exploitées par un algorithme de tomographie optique diffuse pour
reconstruire des cartes des coefficients d’absorption à chaque longueur d’onde d’excitation
(750, 800 et 850 nm) puis des cartes de concentration d’Hb et HbO2 dans le tissu. Cet
algorithme basé sur la transformée de Mellin-Laplace [1] tire parti des informations aux
différents temps de vol des photons afin d’obtenir la distribution en profondeur des
concentrations en Hb et HbO2.
Des mesures ont été effectuées in vivo sur modèles animaux à une profondeur
subcentimétrique. Elles confirment la possibilité de détecter, différencier et calculer les
variations de concentration moyenne en Hb et HbO2 dans le tissu. Les perspectives de ce
travail consistent maintenant à montrer la possibilité de détecter des occlusions pour un tissu
enfoui, en tirant parti de l’atout de sensibilité et de sélection en profondeur des mesures
résolues en temps. Ces résultats ouvriront alors la voie à la conception d’un instrument
adapté à une étude clinique pour le contrôle de la vascularisation de lambeaux.
Référence :
[1] A. Puszka, L. Hervé, A. Planat-Chrétien, A. Koenig, J. Derouard, and J-M. Dinten, ”Timedomain reflectance diffuse optical tomography with Mellin-Laplace transform for experimental
detection and depth localization of a single absorbing inclusion,” Biomedical Optics Express,
4(4), 569-83 (2013).
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Evaluation pilote de l’algorithme
d’insulinothérapie en boucle semi-fermée
Diabeloop en période prandiale (étude SP6-0)
M.A. Quémerais1, M. Doron5, F. Dutrech5, V. Melki2, S. Franc3, 4, M. Antonakios5, H. Hanaire2,
G. Charpentier3, 4, P.Y Benhamou1
Services de diabétologie: 1. CHU de Grenoble, 2. CHU de Toulouse, 3. CHU Corbeil-Essonnes
CERIDT (Centre d’études et de recherches pour l’intensification du traitement du diabète)
5.
CEA-Leti (Laboratoire d’électronique et de technologie de l’information)
Correspondance: MAQuemerais@chu-grenoble.fr
4.
Intérêt et cadre de la recherche : La délivrance en boucle fermée de l’insuline (« pancréas
artificiel ») est un système d’autorégulation de la glycémie reposant sur les récentes
innovations technologiques destinées aux patients diabétiques de type 1. A partir de la
mesure en continu de la glycémie interstitielle par capteur sous cutané (SC), un algorithme
détermine les doses d’insuline à délivrer par pompe à insuline. Les objectifs attendus d’un tel
système (en cours de validation ambulatoire par les équipes de recherche les plus avancées)
sont d’améliorer l’équilibre glycémique et ainsi réduire l’incidence des complications
métaboliques tout en améliorant la qualité de vie. [1,2]
Objectif scientifique : L’étude SP6.0 correspond à la première évaluation in vivo de
l’algorithme « Diabeloop » V.1 mis au point au CEA-LETI. L’efficacité et la sécurité de
l’algorithme ont été étudiées en période postprandiale.
Méthodes : Un essai clinique bicentrique (Centres d’Investigation Clinique des CHU de
Grenoble et Toulouse) a comparé en cross-over le profil des glycémies interstitielles (capteur
DexCom G4) sur 2 périodes de 5 heures après la prise d’un déjeuner calibré. Le jour témoin,
l’insulinothérapie délivrée par pompe SC était déterminée selon les paramètres habituels du
patient. Le jour test, une amorce de 50 ou 75% du bolus repas théorique était délivrée, tandis
que l’algorithme, informé des apports glucidiques, proposait des modifications du débit basal
ou des bolus toutes les 15 minutes selon la modélisation prévisionnelle des glycémies. Le
critère de jugement principal était le pourcentage de temps passé avec une glycémie
interstitielle comprise entre 70 et 180mg/dl.
Résultats : 12 adultes diabétiques de type 1 (9 hommes, âge 35.6 (±12.7) ans, durée de
diabète 19.8 (±12.7) ans ; HbA1c 7.3 (±0.8) %) ont été inclus. Le temps passé dans la cible
est de 84.5 ± 20.8 (jour test) versus 69.2 ± 33.9 % (jour témoin) (p= 0.11). Le temps passé
en hypoglycémie <70mg/dl est de 0.2 ± 0.8 (jour test) versus 4.4 ± 8.2 % (jour témoin)
(p=0.18). La glycémie à la fin de l’épreuve (5h) est de 127.5 ± 40.1 (jour test) versus 146 ±
53.5 mg/dl (jour témoin) (p=0.25). Les doses d’insuline sont indistinctes. Les amorces à 50
ou 75% n’ont pas eu d’effet différentiel.
Conclusions : Dans une configuration semi-fermée, avec amorce manuelle du bolus
(réduction de 25 ou 50%), l’algorithme Diabeloop V1 a été aussi performant que la
détermination manuelle du bolus repas dans la période postprandiale, sans exposer à un surrisque hypoglycémique. Cela autorise la conduite d’essais contrôlés de plus large effectif sur
des périodes d’observation plus longues.
Références :
1- Hovorka R. Closed-loop insulin delivery: from bench to clinical practice. Nat Rev Endocrinol 2011; 7: 385–395.
2- Renard E., Cobelli C, Kovatchev BP. Closed loop developments to improve glucose control at home. Diabetes Res
Clin Pract. 2013 Nov ;102(2):79-85
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Journée de la Recherche Médicale 2014
La GEO-ZAPE des pathologies professionnelles
Rieutort D., Porcheron H., de Gaudemaris R., Bicout DJ.
Environnement et Prédiction de la Santé des Populations - Laboratoire TIMC-IMAG UMR 5525
UJF Grenoble (Dr P Cinquin) - Faculté de Médecine, Domaine de la Merci, 38700 La Tronche
delphine.rieutort@imag.fr, dominique.bicout@imag.fr
La surveillance des maladies professionnelles et des expositions potentiellement associées est
un enjeu majeur de santé publique. En effet, de nombreux travailleurs sont soumis dans
l’exercice normal de leur activité à des expositions d’origine et nature physiques, chimiques ou
biologiques, qui peuvent avoir un impact sur le développement des pathologies. Selon
certaines études, de l’INCA par exemple [1], les travailleurs ne sont pas tous égaux face aux
expositions professionnelles et on note une hétérogénéité géographique dans l’incidence ou
prévalence des pathologies professionnelles. Dans une perspective de surveillance,
d’identification de menaces sanitaires, et de prévention pour les travailleurs, il est important
d’avoir une vision claire de la répartition géographique des pathologies. Pourquoi une
pathologie serait-elle plus prévalente dans une région que dans une autre ? Concernant les
pathologies professionnelles, l’un des facteurs clef est l’exposition professionnelle issue de
l’activité professionnelle ; faisant ainsi le lien entre pathologies professionnelles et activités
professionnelles associées. Or, les bassins d’activités professionnelles en France ne sont pas
équivalents, certains sont orientés industries, d’autres agricoles par exemple. C’est dans cette
optique que nous avons développé la notion de ZAPE, Zone d’Activité Professionnelles
Equivalentes, pour décrire l’hétérogénéité des pathologies professionnelles.
Les ZAPE sont construites à partir du regroupement des départements français selon leur
profil d’activité dominante (et non selon leur délimitation administrative) produisant ainsi un
espace d’expositions professionnelles. Pour ce faire, nous avons utilisé les données de l’INSEE
[2] sur le nombre de salariés dans chaque département et secteur d’activité, à partir
desquelles nous avons construit 7 profils caractéristiques des bassins d’activités français dont
trois principaux : industrie, agriculture, et tertiaire ; trois composites issus de ces activités :
industrie/agriculture, industrie/tertiaire, agriculture/tertiaire ; et un profil neutre, sans
surexpression d’un quelconque secteur. Nous avons ensuite construit la carte des ZAPE au
niveau national. Enfin, afin de réaliser la géographie ZAPE (Géo-ZAPE) des pathologies
professionnelles, nous avons utilisé les données du Réseau National de Vigilance et de
Prévention des Pathologies Professionnelles (RNV3P) [3] pour projeter les cas de pathologies
professionnelles dans l’espace des ZAPE. Comme illustration de la pertinence des ZAPE, nous
avons analysé la distribution des tumeurs des tissus lymphoïdes ou hématopoïétiques dans
l’espace des ZAPE. Il apparaît que les ZAPE les plus prévalents de ces tumeurs sont ceux de
l’industrie et du tertiaire. Certaines catégories de ces tumeurs comme les leucémies
monocytaires sont même totalement absentes des ZAPE orientées agriculture.
Ainsi, à partir des données de l’INSEE et du RNV3P nous avons généré une cartographie de la
probabilité de présence des tumeurs des tissus lymphoïdes et hématopoïétiques en fonction
des ZAPE. Il serait intéressant de pousser ces investigations au niveau des nuisances
potentiellement responsables présentes dans les différentes ZAPE et ainsi encore mieux
caractériser la Géo-ZAPE de ces pathologies professionnelles.
[1] Institut National du Cancer (INCA). La situation du cancer en France en 2012: Institut
National du Cancer; 2012.
[2] Institut National de la Statistique et des Etudes Economiques. Données de l’emploi
département et sectoriel (1989-2011). Date de dernière consultation le 07/04/2014 :
http://www.insee.fr/fr/themes/detail.asp?reg_id=99&ref_id=irirsoceds2011&page=irweb/IRSOCEDS2011/dd/irsoceds2011_emploi.htm
[3] Bonneterre V, de Gaudemaris R, Celse M, et al. Réseau national de vigilance des
pathologies professionnelles: premier bilan et perspectives. Arch Mal Prof Env 2006;5:719-23.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Evaluation du statut nutritionnel, lors du
diagnostic, des patients traités pour un cancer
des voies aéro-digestives supérieures (VADS)
Righini Christian Adrien, Atallah Ihab, Junet Philippe, Bertolo Alexandra, Emile Reyt
Clinique Universitaire d’ORL, Pôle TCCR, CHU de Grenoble
Objectifs - Evaluer l’état nutritionnel, lors du diagnostic, des patients traités pour un cancer
des VADS.
Matériel et méthodes - Etude prospective monocentrique. Le bilan nutritionnel comportait :
un interrogatoire, un examen clinique, un bilan biologique. L’interrogatoire portait sur : le
poids de référence, l’alimentation, la quantité de calories ingérées, les causes de la perte de
poids, la prise ou non de compléments alimentaires (CE). Au terme de l’interrogatoire, une
évaluation globale subjective de la nutrition était établie (indice de Detsky). Les patients
étaient mesurés et pesés. L’albuminémie était dosée. Ensuite étaient calculés : la perte de
poids, l’indexe de masse corporelle, l’indice de Buzby. Nous avons distingué 2 groupes de
patients dénutris : modérément dénutris (gpe1), sévèrement dénutris (gpe2). La comparaison
des variables a été faite grâce au test du Chi2.
Résultats - 169 patients ont été inclus. 145 étaient ethylo-tabagiques. 82 (48,5%) étaient
dénutris dont 47 appartenaient au gpe1. Tous les patients du gpe1 avaient une alimentation
normale ou mixée. 21(69%) patients du gpe2 avaient une alimentation mixée-liquide.
L’apport calorique moyen était de 31 Kcal/Kg/24h pour le gpe1 et 20 Kcal/Kg/24h pour le
gpe2. Les principales causes de perte de poids étaient la douleur et la dysphagie. Aucun
patient du gpe1 ne prenait de CE et 4 (13 %) du gpe2 en prenaient un. La concordance entre
l’indice de Detsky et l’état nutritionnel objectif était de 92% pour la population globale. Le
nombre de patients dénutris était significativement plus élevé chez les hommes (p=0.01), les
consommateurs d’alcool (p=0.02), les sujets âgés (p=0.01), en cas de tumeur pharyngée
(p=0.03), en cas de stade tumoral avancé (p=0.01).
Conclusion – La prévalence de la dénutrition pour les cancers des VADS est élevée.
L’évaluation de la dénutrition et sa prise en charge adaptée, doit faire partie du bilan initial
de ces cancers.
Mots clés : cancer des voies aéro-digestives supérieures, nutrition, prévalence.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Contribution à l’étude anatomique des kystes
congénitaux dérivés du proentéron :
corrélations anatomo-radio-chirurgicales
Laurent Selek
(1)
, Sylvie Lantuejoul
(2)
, Pierre Simon Jouk
(3)
, Christian Piolat
Yohann Robert (1),
, Philippe Chaffanjon (1)
(4)
1. Laboratoire d’anatomie des Alpes Françaises, Université Joseph Fourier,
2. Département d’Anatomie et de Cytologie Pathologiques, CHU
3. Département de génétique et procréation, CHU
4. Clinique Universitaire de Chirurgie Pédiatrique, CHU
Grenoble,
Grenoble,
Grenoble,
Grenoble,
France.
France.
France.
France.
Introduction : Les kystes congénitaux dérivant du proentéron (KCDP) comportent des
pathologies à priori bien distinctes, les kystes bronchogéniques, et les duplications
œsophagiennes et gastroduodénales.
Objectif : Argumenter une origine embryologique commune.
Matériel et méthode : Etude rétrospective unicentrique anatomique et histologique de 25
KCDP pris en charge de 2004 à 2014, à partir de données radiologiques, chirurgicales, et
histologiques.
Résultats : Les auteurs rapportent 25 KCDP, 2 cervicaux, 12 thoraciques (6 médiastinaux
postérieurs, 2 médiastinaux moyens, 3 hilaires, et 1 intra parenchymateux), et 11 intra
péritonéaux (2 œsophagiens, 5 gastriques, et 4 duodénaux). A l’étage thoracique, un
épithélium bronchique a été observé pour 3 KCDP inclus dans la musculeuse œsophagienne
(dont 1 cervical), pour 4 retrouvés au contact de l’œsophage en peropératoire, pour le
deuxième KCDP cervical (en position pré hyoïdienne), ainsi que pour 1 KCDP œsophagien
abdominal. Le deuxième KCDP œsophagien présentait un épithélium mixte, digestif et
respiratoire. Les duplications gastroduodénales avaient un épithélium digestif, mais pouvaient
être porteuses d’hétérotopie (2/9). De plus, leur analyse immuno-histo-chimique peut rendre
compte d’une différenciation plus complexe, pouvant être respiratoire.
Discussion : Une embryologie commune peut tout à fait expliquer ces malformations, par un
bourgeon ectopique issu d’un dérivé du proentéron, probablement durant la phase
pseudoglandulaire entre la 6ème et la 16ème semaine de développement. En effet cette phase
est caractérisée par une activité de bourgeonnement bronchique intense à l’origine de l’arbre
trachéo-bronchique. Concernant l’hypothèse d’un bourgeonnement ectopique sur le versant
digestif du proentéron, ce bourgeonnement est admis pour expliquer les séquestrations
pulmonaires. De plus une atrésie secondaire au bourgeonnement peut expliquer l’isolement
définitif de la lumière du KCDP par rapport à la lumière du dérivé du proentéron dont il est
issu. Concernant le versant respiratoire du proentéron les atrésies sont connues pour
expliquer la formation des malformations adénomatoïdes kystiques pulmonaires. Concernant
le versant digestif du proentéron, l’activité apoptotique entre la trachée et l’œsophage en
formation peut expliquer l’isolement définitif du KCDP.
Conclusion: Kystes broncho-géniques, duplications œsophagiennes et duplications
gastroduodénales semblent être une même entité malformative, soit des duplications
proentériques. Ainsi leur actuelle dénomination partagée par tous les chirurgiens pédiatres,
n’est que le qualificatif de la localisation d’une même pathologie dont le traitement est la
résection chirurgicale. Une embryologie commune peut tout à fait expliquer ces
malformations, par un bourgeon ectopique issu d’un dérivé du proentéron, probablement
durant la phase pseudoglandulaire entre la 6ème et la 16ème semaine de développement.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Reprise du sport après ostéotomies de
valgisation dans la gonarthrose médiale sur
genu varum : A propos d’une série
de 83 patients.
ROUCHY René-Christopher*, SARAGAGLIA Dominique*
*Clinique Universitaire de Chirurgie Orthopédique et de Traumatologie du Sport. CHU de
Grenoble, Hôpital Sud. 38130, Échirolles.
L’objectif de cette étude était d’évaluer la reprise des activités physiques et sportives après
ostéotomie de valgisation pour arthrose fémoro tibiale médiale sur genu varum.
Matériel et Méthodes
La série initiale était composée de 95 patients (97 genoux), opérés entre janvier 2005 et
décembre 2008. 14 ont été exclus (2 décès et 12 perdus de vue) si bien que notre série
comporte en fait 83 patients (83 genoux), 27 femmes et 56 hommes âgés en moyenne de
50,4 +/- 9,53 ans (21-67 ans) au moment de l’intervention. Nous avons retrouvé, avant qu’ils
commencent à souffrir de leur genou, 4 sportifs de compétition (4,8 %), 44 sportifs réguliers
(53 %), 17 sportifs occasionnels (20 %) et 18 patients non sportifs mais actifs (21,6 %). 41
patients (49,4%), pratiquaient des sports de marche, 31 (37,3%), des sports de glisse (ski de
piste et de fond), 43 (51,8%), des sports en apesanteur (natation, vélo), 20 (24,1%), la
course à pied et 14 (16,8%), pratiquaient des sports à base de course et de sauts (basket,
football, tennis, etc.).
Nous avons réalisé 62 ostéotomies tibiales d’ouverture médiale et 21 doubles ostéotomies
associant une fermeture fémorale latérale et une ouverture tibiale médiale. Les ostéotomies
d’ouverture ont été fixées par une cale de Biosorb® (société SBM, Lourdes) et une plaque
vissée à têtes de vis verrouillées, et les ostéotomies de fermeture fémorale par une plaque
vissée en T de l’AO. Toutes les interventions ont été réalisées avec assistance par ordinateur
(Orthopilot®, B-Braun-Aesculap, Tuttlingen, Allemagne).
Résultats
Au recul moyen de 5,75 +/- 1,3 ans (5-9 ans), 71 patients (85,5%) avaient pu reprendre une
activité physique et 66 (79,5%) estimaient avoir retrouvé un niveau sportif égal à leur niveau
antérieur à la chirurgie. Le score de Lysholm moyen était passé de 62,51+/-15,53 points (30100) en préopératoire à 90,49 +/- 8,62 points (55-100) (p<0,001). Les scores préopératoires
de Tegner et de l’UCLA n’ont pas diminué significativement après chirurgie (4,53 et 7,14 en
préopératoire versus 4,1 et 6,55 en postopératoire, p= 0,07et 0,09). Le score KOOS moyen
post opératoire était de 73,52 +/- 17,20. La fréquence des séances sportives par semaine
(2,36 +/-1,6) n’a pas diminué significativement après chirurgie (2,13 séances : p= 0,34). Par
contre, la durée des activités a diminué significativement passant de 4,68h/semaine +/- 4,25
à 3,48h/semaine (p= 0,04). 85 % des patients qui pratiquaient la course à pied avant
l’intervention ont pu reprendre cette activité (17 sur 20).
Conclusion
Cette étude démontre que les ostéotomies du genou autorisent la reprise d’activités physiques
soutenues telles que le jogging ou le ski de descente chez une majorité de patients.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Three Dimension Fluoroscopy-Based Navigation
For Dorsal Percutaneous Instrumentation In
Traumatic Vertebral Fractures.
Sebastien Ruatti, Gael Kerschbaumer, Alexandre Moreau Gaudry, Emilie Chipon, Caroline
Dubois, Jerome Tonetti, Michel Milaire, Philippe Merloz.
Univ Dept Orthopaedic Surgery, CIC-IT, Grenoble, France
Introduction: In recent years internal fixation of the spine by using posterior approach with
minimal-invasive and percutaneous technique were increasingly used in trauma. The
percutaneous surgery lose information and navigation is supposed to provide better data
because the lost information is found again. We hypothesize that a percutaneous minimal
invasive dorsal procedure by using 3D intra-operative imaging for vertebral fractures allows
short operating times with correct screw positioning and does not increase radiation exposure.
Objectives: The aim of this study was to perform a prospective, monocentric, randomized,
comparative and controlled trial study between three dimension (3D) fluoroscopy-based
navigation (3D fluo) and conventional 2D fluoroscopy surgical procedure (CP) in order to
check the effectiveness of 3D fluoroscopy-based navigation in terms of accuracy, radiation
exposure and operative running time.
Methods: 59 patients were included in this study. 29 patients (108 implants) were operated
on by using conventional surgical procedure (CP) and 30 patients (72 implants) were operated
on by using a 3D fluoroscopy-based navigation system (3D fluo). In the two groups, a
percutaneous approach was performed for transpedicular vertebroplasty or percutaneous
pedicle screws insertion. In the two groups surgery was done from T4 level to L5 levels.
Patients (54 years old on average) suffered trauma fractures, fragility fractures or
degenerative instabilities. Evaluation of screw placement was done by using post-operative CT
scan with two independent radiologists that used Youkilis criteria. Operative and radiation
running time were also evaluated.
Results: With percutaneous surgery, the 3D fluo technique was less accurate with 13.88% of
misplaced pedicle screws (10/72) compared with 11.11% (12/108) observed with CP. The
radiation running time for each vertebra level (two screws) reached on average 0,56 mSv with
3D fluo group compared to 1,57 mSv with the CP group. The time required for
instrumentation (one vertebra, two screws) with 3D fluo was 19,75 minutes compared with CP
group 9,19 minutes. The results were statistically significant in terms of radiation dose and
operative running time (p < 0,05), but not in terms of accuracy (p=0,24).
Discussion and Conclusion: The operative running time with 3D fluo group is much longer
than with CP procedure. This fact can be explained by navigation tools set up, calibration and
image acquisition. The low radiation dose observed with 3D fluo group (as compared with CP
group) can be explained by the fact that image acquisition allows for implantation of three
vertebral levels. The difference in terms of precision is not significant. With percutaneous
procedures, 3D fluoroscopy-based navigation system has no superiority in terms of operative
running time and to a lesser degree in terms of accuracy, as compared to 2D conventional
procedure, but the benefit in terms of radiation dose is important. Other advantages of the 3D
fluo system are twofold: up-to-date image data of patient anatomy and immediate availability
to assess the anatomical position of the implanted screws. On a clinical point of view, the
advantages of dorsal percutaneous pedicle screw insertion for the patient are the chances of
early mobilization and reduction of postoperative pain. With the development of new
percutaneous instrument systems short mono- segmental or bi-segmental instrumentations
can be performed in addition to long percutaneous instrumentations.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Anticipation certaine et incertaine de la douleur
viscérale dans la maladie de Crohn - étude IRMf
A.Rubio1,2,3, C.Delon-Martin1,2, S.Pellissier1,2,4, N.Mathieu1,2,6, G.Huynh5, L.VanOudenhove5,
J.Tack5, B.Bonaz1,2,6
1. INSERM, U836, F-38000 Grenoble, France
2. Univ. Grenoble Alpes, GIN, F-38000 Grenoble, France
3. CHU de Grenoble, Hôpital Couple Enfants, F-38000 Grenoble, France
4. Univ. Savoie, F-73000 Chambery, France
5. Department of Clinical and Experimental Medicine, Translational Research Center for
Gastrointestinal Diseases, University of Leuven, B-3000 Leuven, Belgium
6. CHU de Grenoble, Clinique d’Hepatologie et Gastroenterologie, F-38000 Grenoble, France
Introduction : Dans la maladie de Crohn (MC), le caractère incertain et non prédictible de la
survenue d’une crise douloureuse ou d’une rechute inflammatoire peut induire une
appréhension et une anxiété anticipatrice marquées. En effet le cerveau répond à la fois avant
(par anticipation) et pendant l’application d’un stimulus douloureux.
Objectifs : Nous avons recherché si des patients ayant une MC en rémission, par rapport à
des sujets volontaires sains: i) présentaient une modification de la sensibilité rectale et si
celle-ci était corrélée à un déséquilibre de la balance sympatho-vagale et/ou à une
dépression/anxiété ; ii) présentaient des différences d’activité cérébrale au cours de
l’anticipation certaine et incertaine d’une douleur viscérale sur distension rectale.
Méthodologie : Onze patients ayant une MC en rémission et 11 volontaires sains ont été
inclus. Le seuil de distension rectal retenu pour les sessions d’IRMf était le volume provoquant
un inconfort d’au moins 70% et la survenue d’une douleur rectale. La session d’IRMf
consistait en 6 séries fonctionnelles de 12 essais chacune. Chaque essai comprenait une
période d’anticipation certaine ou incertaine de la survenue ou non d’une distension, la
distension rectale éventuelle et une période de cotation de l’anxiété et de l’inconfort perçus.
Les images ont été acquises sur un scanner 3.0 Tesla. Le traitement des images reposait sur
l'analyse de la différence moyenne de signal entre les différentes conditions. La composante
basse fréquence de la variabilité cardiaque (LF-HRV) a été insérée en tant que régresseur
dans le modèle d’analyse des données d’IRMf («modèle LF-HRV»).
Résultats : Nous avons montré que les patients ayant une MC en rémission avaient une
hyposensibilité à la distension rectale, associée à un tonus vagal effondré, une baisse de la
réactivité sympathique et des scores de symptomatologie dépressive et d’anxiété
significativement plus élevés que les contrôles.
Chez les sujets contrôles, nous avons mis en évidence en IRMf : 1) une activation unique du
cortex cingulaire antérieur sub-génual (sgACC) lors de l’incertitude, corrélée à l’anxiété liée à
la douleur du sujet ; 2) l’activation du sgACC et du cortex préfrontal médian, et la
désactivation de l’amygdale, insula, thalamus, aire somatosensorielle secondaire (S2), aire
motrice accessoire et cervelet lors de l’anticipation incertaine d’une distension. Enfin, nous
avons montré que la quasi-totalité de l’activité cérébrale lors de l’anticipation des distensions
rectales était liée à l’activité du système nerveux autonome (SNA).
Chez les patients, nous avons mis en évidence en IRMf : 1) une désactivation de la région
antérieure de l’ACC lors de l’incertitude ; 2) une désactivation de l’ACC supra-génual lors de
l’anticipation incertaine d’une distension.
Discussion/conclusion : Les patients ayant une MC en rémission ont une hyposensibilité
viscérale, associée à un fonctionnement cérébral significativement différent des sujets
contrôles au cours de l’anticipation d’une douleur viscérale par distension rectale, notamment
au niveau des zones impliquées dans la gestion des émotions, de la douleur, de l’anxiété par
rapport à une situation de danger. Cette différence est associée à un effondrement du tonus
vagal.
P a g e | 98
Journée de la Recherche Médicale 2014
Effet neuroprotecteur du mannitol sur
l'oxygénation cérébrale dans un modèle de
traumatisme crânien diffus
Clotilde Schilte* 1, 2, 3, Anne Millet2, 3, 4, Perrine Boucheix1, 2, 3, Pierre Bouzat1, 2, 3, Karin
Pernet-Gallay2, 3, Emmanuel Barbier2, 3, Jean-François Payen1, 2, 3
1
Anesthésie Réanimation, CHU Grenoble, 2U836, Inserm, 3Université Joseph Fourier, Grenoble
Institut des Neurosciences, 4Réanimation pédiatrique, CHU Grenoble, Grenoble, France
Introduction: L’hypoxie cérébrale post-traumatique peut s’expliquer par un trouble de la
diffusion de l’oxygène dû à un œdème péri-vasculaire (Crit Care Med. 2013). Le mannitol par
son action osmotique devrait améliorer l’oxygénation cérébrale. Néanmoins les études
cliniques sur l’oxygénation cérébrale par méthode globale ou locale après perfusion de
mannitol sont discordantes (J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2011). Nous avons étudié l’effet
du mannitol sur l’oxygénation cérébrale dans un modèle expérimental de traumatisme crânien
(TC) diffus en utilisant différentes méthodes de mesure : IRM, pression partielle tissulaire en
oxygène (PtiO2), saturation en oxygène du sinus longitudinal supérieur (SsO2).
Matériel et Méthodes: Trente minutes après un TC diffus (modèle d’impact accélération),
une solution intraveineuse était administrée soit de mannitol (1g/kg) (TC-mannitol), soit de
sérum salé isotonique (TC-saline). Des groupes contrôles (sham-saline et sham-mannitol) ne
subissaient pas de TC. Trois séries d’expériences étaient réalisées 2 heures après le TC. La
première série d’expérience évaluait l’effet du mannitol sur l’œdème cérébral par le coefficient
de diffusion de l’eau (ADC) en IRM, ainsi que la mesure de la saturation locale du parenchyme
cérébral en oxygène (lSO2) (n=10 par groupe). Cette méthode IRM de mesure de
l’oxygénation cérébrale combine l’effet BOLD qui dépend localement du rapport entre
l’oxyhémoglobine et la déoxyhémoglobine, avec la mesure du volume sanguin cérébral. Une
deuxième série d’expérience étudiait l’effet du mannitol sur la PtiO2 et la SsO2 (n=5 rats par
groupe). Enfin une troisième série d’expérience s’intéressait à l’étude de l’ultrastructure
corticale (n=1 par groupe) au moyen de la microscopie électronique.
Résultats: En comparaison avec le groupe sham-saline, les rats TC-saline présentent une
diminution significative de leur delta ADC (1,9±9,1% vs -10,4±3,7%, p<0,05), de la lSO2
(82,1±4,8% vs 75±8,9%, p<0,05) ainsi que de la PtiO2 (50,6±6,6mmHg vs 20,9±2,1mmHg,
p<0,05) et de la SsO2 (84,9±3,3% vs 69,6±7,9%, p<0,05). Cela est associé à l’apparition
d’œdème périvasculaire sur plus de 50% de la surface du capillaire en microscopie
électronique à H2 pour 50% des capillaires étudiés dans le groupe TC Saline. Le traitement
par mannitol montre une diminution de l’œdème cérébral en IRM (delta ADC à 7,0±9,6% dans
le groupe TC mannitol vs -10,4±3,7% dans le groupe TC saline p<0,05), mais aussi en
microscopie électronique où seulement 16,7% des capillaires sont entourés d’œdème dans le
groupe TC mannitol. Cette diminution de l’œdème est associée à une normalisation des
valeurs de lSO2 (83,3±5,1%, p=0,06 vs TC saline), PtiO2 (41,9±5,8 mmHg, p<0,05 vs TC
saline) et SsO2 (83,3±5,1, p<0,05 vs TC saline).
Discussion: Le mannitol en diminuant l'oedeme perivasculaire limite l'ischemie
microcirculatoire et ainsi restaure l'oxygenation cérébrale par une diminution de la distance de
diffusion de l'O2.
Références:
Crit Care Med. 2013 May;41:1316-24
J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2011 ; 82 :378-8
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Prédiction du besoin transfusionnel chez le
patient traumatisé hémodynamiquement stable
par la mesure du lactate capillaire au
déchocage.
Clotilde Schilte* 1, Marc Vinclair1, Julien Brun1, Pierre Albaladejo1, Pierre Bouzat1, JeanFrançois Payen1
1
Pole Anesthésie Réanimation, CHU Grenoble, Grenoble, France
Introduction: 25 % des patients traumatisés graves hémodynamiquement stables sont
transfusés, avec une augmentation de leur morbi-mortalité. Le lactate sanguin est un
marqueur reconnu de la prédiction de transfusion sanguine, mais nécessite un abord veineux
ou artériel. Des appareils de mesure portatifs au lit du malade de lactate capillaire montrent
une bonne corrélation avec les mesures de laboratoire. (Crit care. 2008)
L'objectif de notre étude était d'évaluer l'impact d'un lactate capillaire supérieur à 3,5mmol/L,
mesuré par une méthode délocalisée pour la prédiction transfusionnelle de 4CGR ou plus dans
les 48 premières heures dans cette population.
Matériel et Méthodes: Etude prospective observationnelle portant sur 120 patients inclus
entre août 2011 et février 2013 admis au déchocage du CHU de Grenoble. 2 mesures de
lactate capillaire étaient réalisées à l'arrivée du patient au déchocage de manière
concomitante à une hémoglobine capillaire. Une mesure de lactate capillaire était réalisée, 2
heures après l'admission pour déterminer la clairance du lactate capillaire. (Anesthesiology.
2012).
Résultats: Une différence significative a été retrouvée entre le groupe hyperlactatémie
capillaire (62 patients) et le groupe normolactatémie capillaire (58 patients) concernant la
transfusion sanguine de 4 CGR ou plus (19,4% vs 0%, p<0,001) (figure), la nécessité
d'embolisation (6,5% vs 0%, p<0,01) et la durée moyenne de séjour (17 jours [10-23]
IC95% vs 10 jours [5-19] IC95%, p<0,01). La courbe ROC du lactate capillaire a été établie
pour le seuil de 4 CGR, la meilleure sensibilité et spécificité étaient retrouvées pour la valeur
3,5 mmol/L respectivement 100% (73,5-100% IC 95%) et 52,8% (42,9-62,4% IC 95%). La
valeur prédictive négative était de 100 % pour le seuil de 3,5mmol/l, pour une valeur
prédictive positive de 19%. Les patients dont la clairance était de 50% diminuaient leur risque
transfusionnel de 17,1% à 1,8% (p<0,05).
Figure. Nombre de CGR transfusés dans le groupe
lactate capillaire<3,5mmol/l et le groupe lactate
capillaire≥3,5mmol/l. Chaque point représente un
patient. **p<0,01, médiane et interquartiles.
Discussion: Le lactate capillaire pourrait donc être un outil intéressant dans l'évaluation du
risque de saignement des patients traumatisés graves hémodynamiquement stables accueillis
au déchocage
Références:
Anesthesiology. 2012 ;117(6):1276-1288
Crit Care. 2008;12(6):R160.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Apport de la technique des oscillations forcées
dans l’évaluation ex-vivo de poumons de porc
reperfusés
M-H. Schmidt*, S. Bayat***; S. Gennai*; M. Maignan*; R. Briot*
* Laboratoire Techniques de l’Ingénierie Médicale et de la Complexité (TIMC) ; UMR 5525
Responsable P. Cinquin ; Université Joseph Fourier ;
Faculté de Médecine, Domaine de la Merci, 38700 La Tronche
Ecole Doctorale : EDISCE
SAMU 38, CHU Grenoble, CS 10217 38043 Genoble Cedex 9
mhschmidt@chu-grenoble.fr
***Université de Picardie Jules Verne, Département de Physiologie, DMAG EA 390, Amiens,
France
Intérêt et cadre de la recherche
Le faible nombre de greffons disponibles est un problème majeur en transplantation pulmonaire.
Cette pénurie pousse les équipes de transplantation à tenter de requalifier des poumons dits
marginaux (initialement récusés) pour pouvoir les transplanter.
La perfusion pulmonaire ex-vivo (EVLP) permet l’évaluation, en dehors de l’organisme, de ces
poumons marginaux. En clinique, des paramètres hémodynamiques et gazométriques sont
utilisés lors de l’EVLP pour estimer la sévérité des lésions d’ischémie reperfusion.
La technique des oscillations forcées (FOT) permet, en calculant l’impédance de l’appareil
respiratoire, de quantifier les propriétés mécaniques du poumon. L’objectif de ce travail est de
tester la corrélation entre les paramètres mécaniques mesurés par FOT et les marqueurs
d’ischémie reperfusion mesurés lors de l’EVLP.
Matériel et méthode
L’étude a été réalisée sur poumons de porc prélevés après arrêt cardiaque. Les greffons
pulmonaires (n=5), refroidis et stockés à 4°C pendant 30mn, sont ensuite progressivement
réchauffés, perfusés et ventilés selon la méthode classique de l’EVLP. L’évaluation est réalisée
après 45mn d’un état stable de perfusion et ventilation. Sont mesurés les gaz du sang
(PaO2/FiO2) et la pression moyenne dans l’artère pulmonaire (mPAP).
Les mesures d’impédancemétrie sont effectuées grâce à un dispositif placé en dérivation sur le
circuit respiratoire. A partir de l’impédance d’entrée du système respiratoire, un modèle
mathématique permet d’estimer la résistance (Raw) et l’inertance (Iaw) des voies aériennes et les
paramètres tissulaires : résistance (G) et élastance (H).
Résultats
Iaw est corrélée avec mPAP (p<0.05;R2=0.798) et Raw avec PaO2/FiO2 (p<0.05;R2=0.812).
Le ratio résistance/élastance tissulaire (G/H) est corrélé positivement de façon significative avec
mPAP (p=0.04; R2=0.805) et PaO2/FiO2 (p=0.03; R2=0.812).
Conclusions
Les mesures d’impédance sont corrélées aux paramètres utilisés lors de l’EVLP.
La technique des oscillations forcées présente 2 intérêts :
- C’est une méthode non invasive qui permet des mesures répétées
- Elle permet d’évaluer séparément les voies aériennes et le parenchyme pulmonaire, partie
la plus précocement atteinte par les lésions d’ischémie reperfusion.
D’autres études seront nécessaires, en particulier sur poumons humains, pour valider l’utilisation
de la FOT dans l’évaluation des greffons pulmonaires « marginaux ».
Bibliographie
1. Effects of cyclosporine A in ex vivo reperfused pig lungs
Gennai S, Souilamas R, Maignan M, Brouta A, Pison C, Fontaine E, Briot R.
Microcirculation. 2014 Jan ; 21(1) : 84-92
2. Cyclosporine A : from immunomodulation to prevention of ischemia-reperfusion injuries
Gennai S, Pison C, Briot R.; Ann Fr Anesth Reanim. 2013 Dec; 32(12): 886-7
3. How to increase availability of grafts in lung transplantation: ex vivo lung reconditioning –
cardiac death donors –high emergency list
Souilamas R, Saueressing M, Pison C, Briot R.; Rev Pneumol Clin. 2010 Feb; 67(1): 50-6
P a g e | 101
Journée de la Recherche Médicale 2014
CX-4945, un nouvel agent anticancéreux ciblant
la protéine kinase CK2. Evaluation préclinique
de son activité dans le cancer du rein.
Laure Schoutteten, Maysoun Kassem, Sofia Giacosa, Caroline Roelants, Claude Cochet, Jean Luc
Descotes, Jean Jacques Rambeaux, Valentin Arnoux, Mélanie Tadj, Jean Boutonnat,
Mathieu Laramas, Odile Filhol
INSERM U1036, iRTSV/BCI CEA Grenoble, 17 rue des Martyrs, 38054 Grenoble cedex 9
odile.filhol-cochet@cea.fr ; tel:33 (0)4 38 78 56 45 ; Fax : 33 (0)4 38 78 50 58
Le cancer du rein est le sixième cancer solide le plus fréquent en France et a conduit à 3840
décès en France en 2011. Dans 75 % des cas, il s’agit de carcinome rénal à cellules claires et
dans 60% des cas, il existe une mutation du gène Von Hippel Lindau.
La prolifération et la survie des cellules tumorales sont basées sur des voies moléculaires
impliquant des kinases qui sont des acteurs incontournables. Le cancer du rein métastatique
connait une révolution thérapeutique avec l'émergence de thérapies (sunitinib, sorafenib,
axitinib) ciblant certaines protéines kinases. Toutefois, leur efficacité sur la survie globale des
patients reste modeste.
La protéine kinase CK2 (sérine / thréonine kinase) est une enzyme multifonctionnelle
impliquée dans la régulation du cycle cellulaire, la survie, la différenciation et les mécanismes
de réparation de cassures de l'ADN. CK2 phosphoryle plusieurs substrats essentiels impliqués
dans l'expression génique et la croissance cellulaire. Au niveau moléculaire, il s'agit d'un
tétramère constitué de deux sous-unités catalytiques α et deux sous-unités régulatrices de β.
Dans un premier temps, nous allons vérifier le niveau d’expression des sous unités de CK2
dans une cohorte de carcinome rénales à cellules claires métastatiques du CHU de Grenoble.
Puis, nous évaluerons l’effet du CX-4945, un inhibiteur de CK2, compétitif de l'ATP, dans un
modèle préclinique de culture de cellulaire.
L’analyse en immunohistochimie d’une vingtaine de carcinomes rénaux à cellules claires
révèle une expression modifiée des sous unités de CK2.
Pour le modèle pré clinique, nous avons utilisé les lignées cellulaires 786-O VHL + et VHL –
(lignées rénales tumorales) traitées par 7.5µM de CX-4945 pendant une durée allant de 1h à
10 jours. Des photos ont été prises, et l’expression des différentes voies de signalisation
impliquant CK2 ont été étudiées, ceci pour chaque temps de traitement.
Macroscopiquement, on visualise l’apparition de vacuoles évocatrices d’autophagie à partir de
6 heures de traitement puis la mort cellulaire à partir de 24h de traitement. Néanmoins, entre
1 jour et 10 jours de traitement, les cellules poursuivent leur croissance indiquant un
mécanisme de résistance.
Les résultats concernant les voies de signalisations impliquées dans le blocage de CK2 ainsi
que la conclusion seront présentés.
Nous remercions la ligue régionale contre le Cancer qui soutient activement ce projet.
P a g e | 102
Journée de la Recherche Médicale 2014
Activité fonctionnelle de C1 Inhibiteur
plasmatique : contrôle de la kininoformation
Pauline Sellier1, Arije Ghannam1,2, Federica Defendi1,2, Bertrand Favier1, Delphine
Charignon1,2, Denise Ponard2, Christian Drouet1,2
1
Université Joseph Fourier, CNRS, GREPI/AGIM FRE 3405, CHU Grenoble CS10217 F-38043
Grenoble France
2
Laboratoire Angioedème CREAK Centre National de Référence de l’Angioedème, CHU
Grenoble CS10217 F-38043 Grenoble France
Intérêt et cadre de la recherche : C1 Inhibiteur (C1Inh) contrôle l’activation du
complément, de la phase contact (prékallicréine et facteur XII), de la voie de coagulation
(facteur XI) et de la fibrinolyse. En outre, C1Inh exerce un contrôle majeur vis-à-vis de la
phase contact, il contrôle la conversion de la prékallicréine (pKK) en kallicréine, le mécanisme
impliqué dans la physiopathologie de l’angioedème. La fonction serpine de C1Inh est mesurée
actuellement dans le plasma par l’activité résiduelle de C1s protéase, une cible non impliquée
dans le processus pathologique de l’angioedème.
Objectif : Application d’une nouvelle méthode d’exploration de la fonction de C1Inh (1)
fondée sur l’activation de la phase contact et adaptée au diagnostic biologique sur les
échantillons plasmatiques.
Méthode : La phase contact est reconstituée in vitro en utilisant les composants purifiés en
présence de l’échantillon de plasma ; la cinétique de l’activité amidase est suivie à l’aide du
substrat chromogène Pro-Phe-Arg-pNA. Les conditions du test rendent le résultat indépendant
de l’α2-macroglobuline, l’autre serpine de contrôle de la phase contact (35%). Le teste
s’affranchit de l’activité amidase excessive par application d’un inhibiteur irréversible de
protéase à Sérine.
Résultats : Le test engage un faible volume de plasma (1 µl). Sur une calibration avec le
standard (2), la fonction de C1Inh dans l’échantillon est déterminé en unité fonctionnelle/µl.
Les valeurs de référence présentent des différences entre les donneurs féminins (n=44) et
masculins (n=67) examinés (p≤ 0.001), avec des valeurs médianes de 0.95 et 0.81 U/µL,
respectivement. Sur l’appui des données issues des patients (n=77), les courbes ROC
indiquent des valeurs de sensibilité et de spécificité de 100 et 99% pour les sujets masculins
et de 92 % et 98 % pour les sujets féminins.
Conclusion : La performance du test a été évaluée avec une grande sensibilité et une grande
spécificité. Ce test est adapté à une application en routine de laboratoire pour le diagnostic de
l’angioedème en utilisant un faible volume de plasma. Fondé sur le système de formation des
kinines et spécifique du processus pathologique, le présent test devrait remplacer
avantageusement l’ancienne méthode basée sur l’activité résiduelle de la cible de la protéase
C1s (3).
(1) Ghannam A, Defendi F, Favier B, Drouet C. Dosage de la capacité de contrôle de C1
inhibiteur. INPI No BR071761/HL/ADA (patent application 2011 ; ID FR1160851 ;
international extension)
(2) Thelwell C, Rigsby P, Longstaff C; ISTH-SSC Subcomm Factor XI & Conta (C Dr ouet).
WHO C1 inhibitor International standard: An international collaborative study to
establish the WHO 1st international standards for C1-inhibitor, plasma and concentrate.
J Thromb Haemost. 2011; 9: 2097-9
(3) Wagenaar-Bos IGA, Drouet C, Aygören-Pursun E, Bork K, Bucher C, Bygum A, Farkas
H, Fust G, Gregorek H, Hack CE, Hickey A, Joller-Jemelka HI, Kapusta M, Kreuz W,
Longhurst H, Lopez-Trascasa M, Madalinski K, Naskalski J, Nieuwenhuys E, Ponard D,
Truedsson L, Varga L, Nielsen EW, Wagner E, Zingale L, Cicardi M and Van Ham M.
Functional C1-inhibitor diagnostics in hereditary angioedema; assay evaluation and
recommendations. J Immunol Methods. 2008; 338: 14-20
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Maladie de Crohn et Neurostimulation Vagale
Etude pilote
V. Sinniger2,3, N. Mathieu3, D. Clarençon1,, D. Tartry3, D. Hoffmann4, S. Pellissier2,O David2,
L. Vercueil2.4, C. Trocmé5, P. Faure5, N. Gonnet6, JL.Cracowski6 et B. Bonaz2,3
1. Institut de Recherche Biomédicale des Armées (IRBA), Service de Santé des Armées,
Brétigny-sur-Orge
2. Grenoble Institut des Neurosciences (GIN), Centre de Recherche INSERM 836 UJF-CEACHU, Grenoble
3. Clinique Universitaire d’Hépato-Gastroentérologie, CHU de Grenoble
4. Pôle Neurologie, Département de Neurochirurgie, CHU de Grenoble
5. Institut de Biologie, CHU Grenoble
6. Centre d’Investigation Clinique, CHU de Grenoble
La maladie de Crohn (MC) est une affection chronique qui atteint le tube digestif et évolue
par poussées inflammatoires entrecoupées de périodes de rémission. Elle constitue un
problème de santé publique du fait de l’augmentation de sa prévalence, de son fort
retentissement sur la qualité de vie et de son coût de santé non négligeable. Le stress est un
facteur important dans le déclenchement et l’entretien de cette pathologie (1). Le système
nerveux autonome, représenté par les systèmes nerveux sympathique et parasympathique,
est très impliqué dans les relations cerveau-système digestif (1) : ainsi au cours d’un stress
aigu, il existe une activation du système sympathique et une inhibition du système
parasympathique, en particulier du nerf vague. La NSV à haute fréquence (30Hz) est
classiquement utilisée dans le traitement de l’épilepsie et la dépression (2). En 2000, l’équipe
de Tracey a mis en évidence le rôle anti-inflammatoire des efférences vagales (20% des
fibres) en décrivant la voie cholinergique anti-inflammatoire (3). En effet, l’acétylcholine,
libérée à l’extrémité du nerf vague inhibe la libération de TNFα par les macrophages via des
récepteurs α7 nicotiniques. Chez le rongeur, la neurostimulation du nerf vague (NSV) à basse
fréquence (5Hz) stimule préférentiellement les efférences vagales (4), mais aussi les
afférences (5) ; elle améliore une colite expérimentale (4). La NSV à basse fréquence
pourrait donc être utilisée chez l’Homme en alternative au traitement médicamenteux des
MICI (5-aminosalicylés, corticoïdes, immunosuppresseurs, biothérapies), et notamment aux
anti-TNF. Dans cette perspective, une étude pilote utilisant la NSV à visée anti-inflammatoire
chez des patients présentant une maladie de Crohn a débuté en 2012, dans le cadre d’un
appel à projet de recherche clinique translationnelle DGOS-INSERM, incluant la Clinique
Universitaire d’Hépato-Gastroentérologie, l’IRBA, les équipes 8 et 11 du GIN, le CIC, le pôle
de Neurologie (Dpt de Neurochirurgie) et l’institut de Biologie. Cette étude étant toujours en
cours, nous présentons ici les résultats des 4 premiers patients. Les différents critères
d’inclusion étaient les suivants: MC en poussée modérée à sévère avec un index d’activité
(CDAI) compris entre 220 et 450, un score d’activité endoscopique (CDEIS) >7, une CRP
>5mg/L et une calprotectine fécale >100µg/g. Les patients inclus ont fait l’objet d’un suivi
multi paramétrique: examen clinique, iléo-coloscopie, marqueurs biologiques sanguins
(cytokines, cortisol, CRP…), biopsies, exploration de la balance sympatho-vagale (réalisée
par l’analyse de la variabilité cardiaque: HRV). L’effet potentiel de la NSV sur le SNC, via les
afférences vagales, a été exploré par un enregistrement EEG haute résolution. La VNS a bien
été tolérée par les patients (mise en place et activation). L’étude est terminée pour deux
patients et a été stoppée pour deux autres en raison de complications digestives
indépendantes de la NSV. La NSV est cependant toujours en cours chez les 4 patients,
demandeurs de la poursuite de la stimulation. Il est apparu que le critère de sévérité de la
maladie lors de l’inclusion des patients est un paramètre important à prendre en compte.
L’analyse des résultats met en évidence une amélioration clinique et paraclinique (CDAI;
CDEIS; calprotectine; catecholamines ; HRV) pour deux patients. La phase de rémission de
la maladie a été augmentée pour deux patients puisqu’ils n’ont pas rechuté depuis plus d’un
an (12 et 17 mois).
1/Bonaz, Gastroenterology 2013. 2/Bonaz, Neurogastroenterol Motil.2013. 3/Borovikova, Nature
2000. 4/Meregnani, Auton Neurosci 2011. 5/Reyt, Neuroimage 2010.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Peut-on prédire le besoin d’une opération
différée au début du traitement non opératoire
des traumatismes sévères du foie ?
N. Taton1, J. Abba1, A. Amariutei1, J-L Quesada2, C. Arvieux1, C. Létoublon1
1
Clinique Universitaire de Chirurgie Digestive et de l’Urgence
2
Département scientifique - Délégation de la Recherche Clinique et de l’Innovation
CHU de Grenoble
Objectif :
Depuis les années 1990 le traitement non opératoire des traumatismes fermés du foie est
devenu un standard dans la prise en charge du patient hémodynamiquement stable ou
stabilisé. Une opération différée (OD) peut être nécessaire en raison du trauma hépatique.
Notre objectif était de rechercher des facteurs prédictifs de réalisation d’OD dans la prise en
charge non opératoire initiale des traumatismes hépatiques fermés.
Matériel et Méthodes :
L’analyse des dossiers médicaux de tous les patients admis au CHU de Grenoble sur 10ans
pour traumatisme hépatique a permis le recueil de données concernant la démographie de la
population, le mécanisme lésionnel, la biologie sanguine et hépatique à l’entrée, le grade
AAST de la lésion hépatique et la nécessité d’artérioembolisation (AE).Les groupes OD et non
OD ont été comparés en termes d’effectifs et pourcentages. Ces paramètres ont été comparés
par les tests t de Student et de Mann-Whitney. Des modèles uni-variés et multi-variés de
régressions logistiques ont été utilisés pour évaluer le rôle des facteurs prédictifs d’opération
différée sous forme d’Odds-Ratio avec leur intervalle de confiance à 95%.
Les performances du modèle ont été étudiées à l’aide de l’aire sous la courbe ROC (AUROC)
ainsi que les caractéristiques statistique du test élaboré en privilégiant la sensibilité.
Résultats :
L’analyse comparative des 2 groupes retrouvait les transaminases, le grade AAST et l’AE
significativement plus élevés (p<0.05) dans le groupe OD : ASAT=822 vs 381UI/L, ALAT=875
vs 419UI/L; AAST=3.21 vs 2.26, AE n=19(44.2%) vs n=10(10.9%). En analyse univariée une
baisse de l’hémoglobine et du TP, une élévation de la cytolyse, du grade AAST et l’AE
s’associaient significativement (p<0.05) à un risque plus élevé d’OD : ORHb=0.97 [0.95-0.99],
ORTP=0.96 [0.94-0.982], ORASAT=1.21 [1.07-1.36], ORALAT=1.14 [1.03-1.27], ORAAST=5.76
[2.97-11.19], ORAE=6.49 [2.66-15.82]. En analyse multivariée les facteurs significativement
associés (p< 0.05) à l’OD étaient une hémoglobine basse, une élévation des ASAT et du grade
AAST : ORHb=0.974 [0.950-0.998], ORASAT=1.56 [1.08-2.26], ORAAST=5.03 [1.92-13.18].
L’analyse des performances du modèle retrouvait une AUROC de 88.1%. Le test établi en
privilégiant la sensibilité avait une sensibilité de 87.1% et une spécificité de 70.2% avec
75.5% de patients bien classés.
Conclusion :
Une élévation du grade AAST, d’ASAT et une hémoglobine basse à l’entrée sont
significativement associés à plus d’OD. La réalisation d’OD fait partie intégrante de la stratégie
non opératoire initiale des traumatismes fermés du foie. L’évaluation du risque pourrait
permettre une meilleure surveillance initiale de ces patients non opérés en intégrant le risque
élevé de la nécessité d’une OD entre le 3ème et le 7ème jour le plus souvent.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Cancers bronchiques oligométastatiques : une
survie proche des maladies localement avancées
1,2
2
TOFFART Anne-Claire, 1,2,3NAGY-MIGNOTTE Hélène, 2SAKHRI Linda, 2DURUISSEAUX Michaël,
BRICHON Pierre-Yves, 3VILLA Julie, 4HOFFMAN Dominique, 3GUILLEM Pascale, 1TIMSIT Jean-François,
1,2
MORO-SIBILOT Denis
1
Equipe 11 Institut Albert Bonniot-UJF-INSERM U823, La Tronche
2
Pôle Thorax et Vaisseaux, CHU de Grenoble
3
Pôle Urgences Médecine Aiguë, CHU de Grenoble
4
Pôle Tête et Cou et Chirurgie Réparatrice, CHU de Grenoble
Intérêt et cadre de la recherche : Les cancers bronchiques non à petites cellules (CBNPC)
sont classés entre stade 0 (in situ), stade I (localisé), stades II et III (localement avancés) et
stade IV (métastatique). Les patients porteurs d’un CBNPC de stade IV ne sont habituellement
éligibles qu’à un traitement palliatif par chimiothérapie et leur survie est très brève (de 6 à 12
mois). Les maladies oligo-métastatiques (OM) peuvent bénéficier d’un traitement à visée
curative à la fois au niveau pulmonaire et sur le/les sites métastatiques.

Objectif scientifique : Cette étude compare la survie des patients porteurs d’une maladie OM
avec métastase unique à celle des patients des autres stades évolutifs et ceux de stade IV
multimétastatique.

Méthodes : Nous avons analysé rétrospectivement les données issues de la réunion de
concertation pluridisciplinaire d’oncologie thoracique du CHU de Grenoble entre 1993 et 2012.
Les patients porteurs d’un CBNPC non carcinoïde de stade I à IV ont été inclus. Ceux de stade
IV avec métastase unique ont été considérés comme OM. Les caractéristiques des patients ont
été comparées à l’aide d’un test du chi-2 et les survies par un test du log-rank.

Résultats : Les données de 4917 patients ont été étudiées, 18 ont été exclus pour données
manquantes sur le stade tumoral. Cent dix patients présentaient une métastase unique, 1044
étaient de stade I, 464 de stade II, 1769 de stade III et 1512 de stade IV avec plus d’une
métastase. La métastase unique était cérébrale pour 70 (64%) patients et surrénalienne pour
16 (15%) patients. L’âge médian des patients de la cohorte était de 65 ans [interquartile
(IQR), 56-73 ans], 61.3 ans [IQR, 56-68 ans] pour les OM. Les adénocarcinomes étaient le
plus souvent associés à des maladies métastatiques et les carcinomes épidermoides à des
maladies localisées (p<10-4). Les patients avec une maladie OM ont un meilleur état général
que les autres patients métastatiques (p<10-4).
La médiane de survie sans progression des patients OM était de 12.2 mois [IQR 8.2-29.1
mois].
La médiane de survie globale des patients OM était de 18.8 mois [IQR, 9.8-34.6 mois]. Elle
était de 6.3 mois [IQR, 2.4-14.1 mois] pour les patients avec plus d’une métastase et de 15.8
mois [IQR, 6.7-40.0 mois]) pour les patients de stade III. Parmi les OM, les patients ayant pu
bénéficier d’un traitement à visée curative (chirurgie et/ou radiothérapie) sur les 2 sites
(n=70, 64%) avaient une survie médiane de 24.9 mois [IQR 13.7-41.3 mois] alors qu’elle
était de 15.8 mois [IQR 5.8-51.6 mois] pour ceux n’ayant pas pu en bénéficier (p=0.11). Les
patients ayant pu être opérés sur les 2 sites de façon complète (n=55, 50%) avaient une
médiane de survie globale de 25.7 mois [IQR 14.1-41.5 mois], meilleure que les autres
(médiane 12.4 mois [IQR 5.2-24.9 mois]) (p=10-3).

Conclusions : La survie des patients porteurs d’un CBNPC avec métastase unique est bien
meilleure que celle des patients porteurs d’une maladie avec plus d’une métastase. Cette
différence est encore plus marquée si la maladie tumorale est éligible à un traitement curatif
sur les 2 sites. Les maladies OM doivent donc plutôt être considérées comme une maladie
localement avancée éligible à un traitement curatif, chirurgical dans la mesure du possible.
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Journée de la Recherche Médicale 2014
Azole antifungals: therapeutic drug monitoring
and/or bioassay?
J. Tonini1, S. Bailly1,2, E. Gautier-Veyret1,2,3, M. Cornet1,2, H. Pelloux1,2,
F Stanke-Labesque1,2,3, D. Maubon1,2
1 Centre Hospitalier Universitaire, F-38043 Grenoble, France
2 Université Grenoble Alpes, F-38041 Grenoble, France
3 INSERM U1042, HP2, F-38041 Grenoble, France
Contact : jtonini@chu-grenoble.fr
Background
As the incidence of invasive fungal infection is constantly growing, failure of antifungal
treatment remains a concern. Azole antifungals present high variability of their plasmatic
concentrations (Cmin), justifying their therapeutic drug monitoring (TDM). Nevertheless, the
Cmin cannot certify the effective antifungal activity expected for each patient.
Objectives
The aim of this study was to develop a bioassay allowing the determination of in vitro growth
inhibition diameter (ID), to assess the influence of plasma on ID and to correlate ID to Cmin in
antifugal- treated patients.
Methods
The bioassay consists of the determination of ID on Candida parapsilosis using disk diffusion
method. Standard curves were determined for pozaconazole (PZC) and voriconazole (VRC) in
water and 45% of plasma to assess the influence of plasma on ID. Plasma of patients
currently undergoing TDM for PZC (n=74) or VRC (n=78) were prospectively collected for ID
determination. The best fit of the Cmin plotted against ID was obtained with a cubic regression
for both antifungals.
Results
In water, plasma and patient samples, cubic regression between ID and Cmin indicated R2
values of 0.997, 0.999 and 0.819 for PZC and of 0.996, 0.990 and 0.925 for VRC (p<0.001
for each curve). Standard curves of VRC or PZC without or with plasma adjunction did not
differ (Wilcoxon-test: p=0.79 for VRC, p=0.87 for PZC), suggesting that plasma protein has
no effect on antifungal activity in the proposed disk method. For VRC, Cmin of 1 mg/L and 4.7
mg/L corresponded to 54% and 90 % of maximal ID respectively. For PZC, Cmin of 0.5 mg/L,
0.7 mg/L and 1 mg/L respectively corresponded to 26%, 40% and 53% of maximal ID.
Conclusion
ID determined with the bioassay could be useful to better characterize antifungal therapeutic
range for each fungal species, particularly the lower one for PZC and the upper one for VRC.
To conclude, bioassay brings additional information to complete TDM interpretation in patients
for which Cmin remains insufficient to adjust antifungal dosage.
Jourdil J-F et al 2013. Simultaneous quantitation of azole antifungals, antibiotics, imatinib, and raltegravir in human
plasma by two-dimensional high-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. B
919–920:1–9.
Tonini J et al 2012. Therapeutic Drug Monitoring of Posaconazole in Allogeneic Hematopoietic Stem Cell
Transplantation Patients Who Develop Gastrointestinal Graft-versus-Host Disease. Antimicrob. Agents Chemother.
56:5247–5252.
P a g e | 107
Journée de la Recherche Médicale 2014
EG-VEGF and its receptors are deregulated in
complete hydatiform moles: Potential role in
placental tumor development.
W. Traboulsi, H. Bouffetal, T Aboussaouira, N. Samouh, M. benharouga,
JJ feige and N. Alfaidy.
Laboratoire Biologie du Cancer et de l'Infection. iRSTV/BCI, 17 rue des Martyrs, CEA Grenoble,
38 054 Grenoble Cedex, France
Wael.traboulsi@cea.fr
AIMS AND OBJECTIVES: Complete hydatiform moles (CHM) are benign placental
precancerous lesions that develop in 20% of cases into choriocarcinoma, a real malignant
invasive cancer. The mechanism underlying choriocarcinoma progression remains
uncharacterized. Involvement of angiogneic factors in this process is proposed. Here, we
investigated the role of EG-VEGF (endocrine gland derived endothelial growth factor), a new
circulating placental angiogenic factor in this process. EG-VEGF acts via two GPCR receptors,
PROKR-1 and PROKR-2.
MATERIALS AND METHODS: Two approaches were used. An In vitro approach using JEG3
cells, a human choriocarcinoma cell line and normal first trimester trophoblast cells (NTC).
Cells were compared for their levels of expression of PROKR1 and PROKR2 and for their
responses to EG-VEGF in the proliferation, migration and invasion assays. A clinical approach
that used sera and placental samples collected from CHM (n=15) and normal samples (n=18)
during the first trimester of pregnancy. EG-VEGF circulating levels were measured by ELISA.
Placental expression of EG-VEGF and its receptors was assessed by immunohistochemistry.
RESULTS: We demonstrated that EG-VEGF circulating levels were significantly higher in CHM
compared to normal patients and confirmed this increase in the CHM placental specimens.
PROKR1 and PROKR2 were also highly expressed in CMH. In vitro studies demonstrated
differential responses of JEG3 and NTC to EG-VEGF in regards to PROKR1 and PROKR2
expression. We also demonstrated that low EG-VEGF concentrations (5-10 ng/ml) induced the
migration and invasion on JEG3 cells, whereas higher EG-VEGF concentrations (50-100ng/ml)
inhibit these processes. No effect of EG-VEGF was observed on JEG3 proliferation.
CONCLUSIONS: We demonstrate that EG-VEGF controls key placental tumor processes and
that the EG-VEGF/PROKR1 and PROKR2 system is deregulated in a CHM. These findings
suggest a direct involvement of EG-VEGF in placental tumor progression. Further studies are
ongoing to better characterize its role.
P a g e | 108
Journée de la Recherche Médicale 2014
Intérêt de l’élastographie quantitative pour
caractériser les nodules thyroïdiens :
peut-on diminuer le nombre de cytoponctions
de nodule bénin ?
VARENNES Lionel(1), MOREAU GAUDRY Alexandre(2), MEDICI Maud(2),
CHIPON Emilie(2), CHABRE Olivier(3), BRICAULT Ivan(1,2)
(1) Service de Radiologie et Imagerie médicale
(2) Centre d’investigation clinique – Innovation technologique
(3) Service d’endocrinologie et diabétologie – Maladies de la nutrition
CS 10217-38043 Grenoble Cedex 09
lvarennes@chu-grenoble.fr
Intérêt et cadre de la recherche :
L’augmentation constante du nombre de nodules thyroïdiens détectés est un véritable
problème de santé publique, et induit un nombre croissant de demandes de cytoponction.
Avec la démarche actuelle de sélection basée sur de simples critères échographiques
morphologiques, seuls 5% des nodules prélevés s’avèrent être des cancers. L’élastographie
quantitative ultrasonore « SWE » est une nouvelle technique d’imagerie permettant de mieux
caractériser les nodules en mesurant leur « dureté » ; son intérêt pour sélectionner ceux
justifiant une cytoponction est à évaluer.
Objectif scientifique :
Le but de notre étude était de définir des critères échographiques et élastographiques
permettant de choisir les nodules qui doivent être ponctionnés, sans risquer de méconnaitre le
moindre cancer.
Méthodes :
Entre décembre 2010 et aout 2012, 125 patients adressés pour cytoponction ou chirurgie
thyroïdienne ont été inclus après consentement dans une étude diagnostique, monocentrique, prospective, réalisée au CHU de Grenoble. Pour chaque nodule, nous avons recueilli
une mesure élastographique quantitative SWE, ainsi que les critères échographiques
morphologiques permettant de classer le nodule selon le score d’imagerie TI-RADS. Les
résultats cytologiques ou histologiques ont permis de classer les nodules en deux catégories :
bénins ou suspects/malins.
Résultats :
131 nodules thyroïdiens ont été analysés ; 111 étaient bénins, et 20 suspects ou malins.
Les critères échographiques standards utilisés par la dernière version du score TI-RADS n’ont
pas permis une bonne discrimination des nodules bénins : AUC=0,54 [0.41 ; 0.68].
L’élastographie quantitative ultrasonore a été une méthode reproductible, avec un coefficient
intra-classe à 0.89 [0.86 ; 0.91]. L’acquisition était rapide, avec une durée moyenne de 2,3
minutes. La performance diagnostique de l’élastographie seule s’est avérée significativement
supérieure à celle du TI-RADS (p=0,004) : AUC=0,79 [0.66 ; 0.91]. Sur notre population, le
critère composite : « Valeur élastographique < 27 kPa et Echogénicité  à celle des muscles
cervicaux » aurait permis d’éviter 25 des 111 cytoponctions de nodule bénin (23%), sans
méconnaitre le moindre cancer.
Conclusion :
Ce critère simple écho-élastographique pourrait permettre de réduire de près d’un quart le
nombre de prélèvements de nodule bénin. Il méritera d’être validé de façon prospective sur
une population plus large.
P a g e | 109
Journée de la Recherche Médicale 2014
Les résumés EDISCE & EDCSV sélect ionnés pour communicat ions orales P a g e | 111
Journée de la Recherche Médicale 2014
La résection tumorale guidée par l’imagerie en
fluorescence proche infrarouge des cancers des
VADS dans un modèle animal orthotopique,
améliore le taux de survie sans rechute
Ihab Atallah1-3, Clément Milet2-3, Henry Maxime2-3, Véronique Josserand2-3, Emile Reyt1-2,
Jean-Luc Coll2-3, Christian Adrien Righini1-3*, Amandine Hurbin2-3*
1-Clinique universitaire d’ORL, CHU de Grenoble
Courriel : IAtallah@chu-grenoble.fr
2-Université Joseph Fourier, Grenoble I
3-Unité Inserm U823, Institut Albert Bonniot, Grenoble
* les deux auteurs ont contribué à ce travail d’une façon égale
Intérêt et cadre de la recherche : La chirurgie est le traitement de référence des cancers des
VADS. Elle doit permettre l'exérèse complète de la tumeur avec des marges de sécurité
suffisantes. Dans la pratique chirurgicale, les marges d’exérèse des cancers des VADS sont
définies macroscopiquement par l’opérateur avec l’aide de l’examen anatomopathologique
extemporané qui est parfois discordant avec les résultats histologiques définitifs.
Objectifs : Étudier l’apport de l’imagerie optique en fluorescence proche infrarouge dans
l’optimisation des marges d’exérèse dans la chirurgie des cancers des VADS chez un modèle
animal orthotopique et analyser son impact sur la rechute tumorale.
Matériel et méthodes : Des cellules de cancer des VADS d’origine humaine ont été testées in
vitro pour l’expression de l’intégrine αvβ3. Ces cellules ont été implantées au niveau de la cavité
buccale de la souris nude. Nous avons réalisé des injections intraveineuses chez la souris, du
RAFT-c(RGD)4 , un peptide qui cible spécifiquement l’intégrine αvβ3. Ce peptide a été couplé à
un fluorophore afin de détecter sa liaison aux tumeurs orthotopiques, par une caméra
d’imagerie en fluorescence proche infrarouge. Une fois les tumeurs développées, nous avons
réalisé des résections tumorales à J30 post-implantation en comparant l’exérèse macroscopique
et l’exérèse guidée par l’imagerie en fluorescence. Les souris ont été suivies
macroscopiquement et en imagerie en bioluminescence afin de détecter une rechute tumorale
Résultats : Des reliquats fluorescents détectés par l’imagerie optique en fluorescence proche
infrarouge ont été identifiés chez les souris qui ont bénéficié d’une résection tumorale guidée
par l’optique. L’analyse histologique de ces reliquats (n=23) a permis la mise en évidence de
cellules tumorales au sein de 91,3 % de ceux-ci. La détection de ces foyers tumoraux résiduels
avait un impact positif sur la survie sans rechute chez les souris qui ont bénéficié de l’exérèse
tumorale guidée par l’imagerie optique en fluorescence (n=6) par rapport à celles qui ont
bénéficié d’une exérèse macroscopique sans guidage optique (n=6). Le taux de survie sans
rechute était de 66,7% à 2 mois post-résection tumorale, dans le premier groupe par rapport à
16,7 % dans le deuxième groupe.
Conclusion : L’imagerie optique en fluorescence offre un contraste en temps réel entre le tissu
sain et le tissu tumoral ce qui améliore la qualité d’exérèse tumorale des cancers des VADS avec
une augmentation de 50 % de survie sans rechute dans notre modèle animal orthotopique.
Cette étape préclinique est indispensable avant de tester cette technique chez l’être humain.
Références :



Keramidas M, Josserand V, Righini CA, Wenk C, Faure C, Coll JL. Intraoperative near-infrared image-guided surgery
for peritoneal carcinomatosis in a preclinical experimental model. Br J Surg. 2010 May;97(5):737-43.
Wenk CH, Ponce F, Guillermet S, Tenaud C, Boturyn D, Dumy P, et al. Near-infrared optical guided surgery of highly
infiltrative fibrosarcomas in cats using an anti-alpha(v)ss(3) integrin molecular probe. Cancer Lett. 2012 Nov 27.
Gioux S, Coutard JG, Berger M, Grateau H, Josserand V, Keramidas M, et al. FluoSTIC: miniaturized fluorescence
image-guided surgery system. J Biomed Opt. 2012 Oct;17(10):106014.
P a g e | 112
Journée de la Recherche Médicale 2014
Etude de la réaction inflammatoire dans un
modèle murin d’intoxication par un pesticide
organophosphoré.
Nom des auteurs : Baccus Benjamin (EDCSV), Testylier Guy, Depaulis Antoine, Dorandeu Frédéric
Laboratoires : Grenoble institut des neurosciences – Inserm U836 – UJF,
Institut de recherche biomédicale des armées – Service de santé des armées – Ministère de la défense
Coordonnées : Benjamin Baccus
Grenoble institut des neurosciences – BAT E Saffra – Equipe 09 – 38700 LA TRONCHE
benjamin.baccus@irba.fr
Les composés organophosphorés (OP) se subdivisent en agents létaux (neurotoxiques OP ou
NOP) et en agents phytosanitaires (pesticides OP ou OPP). Les OPP sont impliqués dans
plusieurs millions d’intoxications par an dans le monde à l’origine de plus de 300.000 décès
[1]. La menace d’une utilisation détournée ou d’une exposition accidentelle à des OPP
nécessite de mieux connaître les mécanismes physiopathologiques aigus et chroniques des
intoxications par ces agents chimiques.
Les OP ont une action neurotoxique à la fois sur le système nerveux central et périphérique
par inhibition d’une enzyme (l’acétylcholinestérase) dégradant un neurotransmetteur
(l’acétylcholine). La gravité de la symptomatologie centrale repose sur l’hypercholinergie
initiale pouvant induire une crise comitiale et évoluer vers un état de mal [2].
A ce jour, ces mécanismes ont été essentiellement étudiés sans prendre en compte le
contexte dans lequel intervient l’intoxication. En particulier l’influence de la réaction
inflammatoire sur la réponse du système nerveux central aux OPP n’a pas été étudiée. De
nombreuses activités ou pathologies peuvent moduler la réaction inflammatoire et sont
susceptibles de modifier la réponse au neurotoxique : stress, sommeil [3], activité physique,
infection, etc.
Nous nous sommes intéressés à l’évolution de la réaction inflammatoire qui succède 1) à une
intoxication par un OPP à dose convulsivante, 2) à une privation aigüe totale de sommeil chez
la souris congénitale C57Bl/6. Notre travail comprend une étude immunohistochimique de la
réaction des cellules gliales (GFAP, Iba1) et une étude de la cinétique de protéines
inflammatoires (IL-1b, IL-6, TNF-a, TGFb) dans les suites de l’intoxication et de la privation de
sommeil. Nous souhaitons caractériser la réaction inflammatoire qui succède à ces 2
agressions afin d’évaluer l’influence de la privation de sommeil sur la réponse centrale au
toxique dans ce modèle expérimental murin.
Notre projet scientifique a pour ambition de mieux comprendre les mécanismes
physiopathologiques de l’intoxication par un OPP en prenant en compte le contexte
inflammatoire. Les résultats obtenus, toute réserve gardée, pourraient nous permettre
d’optimiser la prise en charge médicale de ces intoxications chez l’homme, pour qui une telle
étude ne peut éthiquement être envisagée.
[1]. Gunnell D, Eddleston M, Phillips MR, Konradsen F. The global distribution of fatal pesticide
self-poisoning: systematic review. BMC Public Health 2007; 7: 357.
[2]. Masson P. Evolution of and perspectives on therapeutic approaches to nerve agent
poisoning Toxicology Letters 206 (2011) 5–13.
[3]. Mullington JM, Haack M, Toth M, Serrador JM, Meier-Ewert HK. Cardiovascular,
inflammatory, and metabolic consequences of sleep deprivation. Prog Cardiovasc Dis.
2009;51:294–302.
P a g e | 113
Journée de la Recherche Médicale 2014
99m
Tc-cAbVCAM1-5 imaging is a sensitive and
reproducible tool for the detection of inflamed
atherosclerotic lesions in mouse
DUMAS laurent1,_11 rue du rachais, 38240 Meylan,laurent.dumas.ujf@gmail.com,
MSc; Broisat Alexis1,, PhD; Jakub Toczek1, ; Mitra Ahmadi1, Phd; Sandrine Bacot1, PhD;
Pascale Perret1, PhD; Lotfi Slimani, PhD1; Barone-Rochette G, MD PhD1; Audrey Soubies1;
Nick Devoogdt2, PhD; Tony Lahoutte2,3, MD PhD; Daniel Fagret1, MD PhD; Laurent M. Riou1,
PhD; Catherine Ghezzi1, PhD
1
Radiopharmaceutiques Biocliniques, INSERM, 1039, Université de Grenoble, La Tronche,
France
2
In vivo Cellular and Molecular Imaging Laboratory, Vrije Universiteit Brussel (VUB), Brussels,
Belgium
3
Nuclear Medicine Department, UZ Brussel, Brussels, Belgium
Introduction. Atherosclerosis constitutes a worldwide health challenge. Despite major
advances in imaging technologies (Libby et al., 2010), a major need for imaging probes
targeting vulnerable plaques (VP) still exists. 99mTc-cAbVCAM1-5 is a single-domain antibody
fragment directed against mouse/human Vascular Cell Adhesion Molecule 1 (VCAM-1) which
has recently been proposed as a new imaging agent for the detection of inflamed
atherosclerotic lesions1. Indeed, in a mouse model of atherosclerosis, 99mTc-cAbVCAM1-5
specifically bound to VCAM-1 positive lesions, thereby allowing their identification on SPECT
images. The purpose of the present study was to investigate 99mTc-cAbVCAM1-5 imaging
sensitivity using a reference statin therapy.
Methods. Thirty (30) ApoE-deficient mice fed a western-type diet were used. First, the
relationship between the level of VCAM-1 expression and the uptake of 99mTc-cAbVCAM1-5
was evaluated in 18 mice using immunohistochemistry and autoradiography (ARG),
respectively. Second, longitudinal SPECT/CT imaging was performed on control (n=9) or
atorvastatin-treated (0.01% w/w) mice (n=9), followed by ex vivo analysis.
Results. 99mTc-cAbVCAM1-5 uptake in atherosclerotic lesions correlated with the level of
VCAM-1 expression (P<0.05). Atorvastatin exerted significant anti-atherogenic effects, and
99m
Tc-cAbVCAM1-5 lesion uptake was significantly reduced in 35 weeks-old atorvastatintreated mice, as indicated by ex vivo gamma-well counting and ARG (p<0.05). Contrast-CT
based SPECT imaging quantification was reproducible (inter experimenter ICC = 0.97, intra
experimenter ICC = 0.90), and yielded results that were highly correlated with tracer
biodistribution (r=0.83; P<0.0001). Therefore, in accordance with ex vivo data, reduced
99m
Tc-cAbVCAM1-5 uptake in atorvastatin-treated mice was successfully monitored noninvasively by in vivo SPECT/CT imaging (0.87 ± 0.06 %ID/cm3 vs 1.11 ± 0.09 %ID/cm3 in
control group, P<0.05) (Figure 1).
Conclusions. 99mTc-cAbVCAM1-5 imaging allowed the specific, sensitive and reproducible
quantification of VCAM-1 expression in mice atherosclerotic lesions. 99mTc-cAbVCAM1-5
therefore exhibits suitable characteristics for its clinical evaluation as a vulnerable coronary
atherosclerotic plaque imaging agent
Broisat, A., Hernot, S., Toczek, J., De Vos, J., Riou, L.M., Martin, S., Ahmadi, M., Thielens, N.,
Wernery, U., Caveliers, V., et al. (2012). Nanobodies targeting mouse/human VCAM1 for the
nuclear imaging of atherosclerotic lesions. Circ. Res. 110, 927–937.
P a g e | 114
RC01
Journée de la Recherche Médicale 2014
Impact des antifongiques sur la résistance des
principales espèces de Candida en réanimation
– Evolution et tendances sur 10 ans
, Maubon D,2,3, Cornet M2,3, Fournier P 2,3, Pelloux H 2,3, Schwebel C2,3,
Chapuis C2,3, Foroni L2,3, Timsit JF1,2,3
1 Institut Albert Bonniot – Inserm U823 / Université Joseph Fourier, Equipe 11 , F-38706 La Tronche
2 Centre Hospitalier Universitaire, F-38043 Grenoble
3 Université Grenoble Alpes, F-38041 Grenoble
Bailly S
1,2,3
Introduction : Les levures du genre Candida représentent la cause la plus fréquente d’infection fongique
humaine et l’incidence des infections à Candida augmente depuis plusieurs années. Cette tendance est
d’autant plus importante chez les patients critiques en réanimation qui sont à haut risque d’infection
opportuniste à Candida. Depuis 2003, de nouvelles molécules antifongiques ont été introduites, notamment
les échinocandines qui présentent un spectre d’action plus large pour les Candida incluant les espèces C.
glabrata et C. krusei. Les pratiques de prescription des antifongiques incluant les échinocandines ont été
évaluées en 2010 avec un faible recul et ont mis en évidence un lien entre la prescription d’antifongique et
l’évolution des CMI.
Objectif : L’objectif de cette étude est d’évaluer l’effet de la prescription d’antifongiques sur la sensibilité
des espèces Candida au service de réanimation médicale de Grenoble sur une période de 10 ans (2004 –
2013).
Méthode : la consommation d’antifongique a été déterminée en nombre de doses journalières pour 1000
jours d’hospitalisation. La distribution des espèces Candida sur une période de 10 ans (2004 – 2013) et les
CMI des antifongiques sur la période 2007 – 2013 a été déterminée. Une analyse des séries
chronologiques a été effectuée pour estimer les relations entre la consommation d’antifongiques, la
distribution des Candida spp. et les changements de CMI dans le temps.
Résultats : Sur 30498 échantillons de
4512 patients, 2410 étaient positifs à
Candida. Candida albicans reste
l’espèce majoritaire (53.1%) suivie de
Candida glabrata (16.2%) et Candida
parapsilosis
(7.9%).
Candida
parapsilosis suit une augmentation
significative de 5.8% en 2004 à 8.4%
en 2013 en prenant en compte les
fluctuations temporelles (p=0.02).
L’utilisation
de
la
caspofungine
augmente significativement entre 2004
(17.9 DDDs/1000HD) et 2013 (58.8
DDDs/1000HD) (p=0.001). Entre 2007
Figure1 : Consommation mensuelle de caspofungine et
et 2013, l’augmentation de la
CMI de la caspofungine observée et prédite pour C.
consommation de caspofungine est
significativement
corrélée
à
l’augmentation de la CMI de C. parapsilosis (p=0.04), C. glabrata (p=0.0005) et C. albicans (p=0.04). La
consommation d’amphotéricine B est significativement corrélée à une augmentation de la CMI de C.
glabrata (p=0.046) et montre une tendance non significative à l’augmentation de la CMI de C. albicans
(p=0.058). Les consommations de voriconazole et de fluconazole ne montrent pas de corrélation avec une
hausse de la CMI dans un délai de 6 mois.
Conclusion :
Cette étude confirme l’association observée entre la consommation d’antifongique, notamment la
caspofungine et l’augmentation de la CMI au sein des espèces Candida observées.
Fournier P, Schwebel C, Maubon D, Vesin A, Lebeau B, Foroni L, et al. Antifungal use influences Candida species
distribution and susceptibility in the intensive care unit. J Antimicrob Chemother. 2011; 66(12): 2880-6.
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