創薬ターゲット・Gタンパク質共役型受容体(GPCR) β α γ β-Arrestin β α γ AC GPCR創薬研究開発の総合ソリューション DiscoveRxのGPCR評価アッセイ系 xxx Adenylyl Cyclase PLC Stimulation & Binding Gα ATP ProLink Tag (PK) Gαθ α2 α1 Substrate Light β-Arrestin & Enzyme Acceptor (EA) IP3 cAMP Ca2+ 1 2 HitHunter® セカンドメッセンジャーアッセイ最適化された検出試薬と検証済み細胞株を用いて、シグナル伝達系の過程で産出されるセカンドメッセンジャー（cAMPおよ PathHunter® β-アレスチンアッセイ Gタンパク質に非依存的なβ-アレスチンの補充を検出することから GPCRの脱オーファン化やリガンドバイアスの研究にも最適びカルシウム）を測定 Pharmacochaperone EA PK EA Endosome Membrane-EA Format EA Golgi PK EA Stabilized EA EA Substrate PK EA PK Light ER EA Endosome-EA Format Substrate 3 Light PathHunter GPCR内在化アッセイ抗体やイメージング技術、放射性物質を使わずにGPCR内在化を直接的かつ定量的に測定 tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142 Misfolded Receptor PK 4 PK EA PathHunter 薬理的シャペロン・トラフィッキングアッセイタンパク質のフォールディングおよびトラフィッキングの異常を修正する薬理的シャペロン機能をもつ化合物の同定および最適化 e | japansupport@discoverx.comwww.discoverx.com セカンドメッセンジャーアッセイ xxx Adenylyl Cyclase PLC Gα ATP Stimulation & Binding ProLink Tag (PK) Gαθ α2 α1 Substrate Light β-Arrestin & Enzyme Acceptor (EA) IP3 cAMP Ca2+ DiscoveRxでは、細胞内cAMPの蓄積やカルシウム濃度変化を検出する機能的セカンドメッセンジャーアッセイを提供しています。これらのアッセイは、ナチュラルなカップリング状態を保った全長のGPCRを安定発現させた細胞株と、検出試薬によって構成されます。信頼性の高い検証済みプラットフォームを用いることで、スクリーニングを迅速かつ簡便に行うことができるだけではなく、アッセイ樹立にかかる時間を削減することができます。 Calcium No WashPLUS を用いたカルシウムの検出細胞内のカルシウム濃度を測定することで、GPCRやイオンチャネルの活性状態を測定することができます。HTS化が容易なDiscoveRxのカルシウム検出アッセイには、化学発光を利用したCalcium No WashPLUS と発光タンパク質を利用したCoelenterazine hがございます。洗浄ステップが不要なCalcium No WashPLUSキットは、従来のアッセイ方法と比べて、迅速・確実・低コストを実現しています。 HitHunter® テクノロジーを用いたcAMPの検出 a) 幅広いアッセイウィンドウ b) 少ない細胞数でアッセイ可能 c) 高い血清耐性 d) HTSアッセイフォーマットに対応（3456ウェルまで微量化可能） e) 標準的なルミノメーターによるシグナル検出上記のような特長を持つHitHunter cAMPアッセイは、バイオ医薬品(ペヒトGPCR（既知およびオーソログ）発現細胞株目的の薬理研究やCalcium No WashPLUSキットによるカルシウム動態の評価用に最適化された、Gq 共役型GPCR安定発現細胞株です。 HitHunter IP3アッセイおよびcGMPアッセイもございますプチドや抗体)、完全または部分的アゴニスト、アンタゴニスト、インバースアゴニスト、アロステリックモデュレーターなど、幅広い分子クラスの評価に用いることができます。特長 • 400件以上の査読された文献による実績 Gs /Gi 共役型cAMP Hunter™ 細胞株 DiscoveRxでは、115種類を超える非強制的カップリングの手法で作成された Gs /Gi 共役型GPCR安定発現細胞株を提供しております。本細胞株は、薬理研究やHitHunter cAMPアッセイを用いた機能的cAMP • ホモジニアスで簡便なアッセイ方法 • 高い信頼性と再現性応答の評価用に最適化されていますので、アッセイ樹立の時間と手間を削 • 高感度かつ幅広いアッセイウィンドウ減できます。 • 確実かつ迅速な検出方法 • 低分子化合物やバイオ医薬品に対応 tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142 e | japansupport@discoverx.com www.discoverx.com β-アレスチンアッセイ xxx Adenylyl Cyclase PLC Gα ATP Stimulation & Binding ProLink Tag (PK) Gαθ α2 α1 Substrate Light β-Arrestin & Enzyme Acceptor (EA) IP3 cAMP Ca2+ 多様なGPCRを評価可能とするプラットフォーム PathHunter® β-アレスチンアッセイは、DiscoveRx独自のEnzyme Fragment Complementation (EFC)技術を用いて活性化GPCR へのβ-アレスチンの結合をモニターします。リガンドによる刺激を受けると、Gi 、 Gs およびGq 共役型GPCRにβ-アレスチンが結合します。アレスチンの補充はGタンパク質シグナル伝達に対して非依存的であるため、PathHunter™ β-アレスチンアッセイは、多様なGPCRに対して利用できる万能なアッセイでアロステリックモデュレーター・リガンドバイアス・バイオ医薬品などの評価簡便でワンステップの化学発光を利用したPathHunterアレスチンアッセイは、完全または部分的アゴニスト、インバースアゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体およびアロステリックモデュレーターなど多様な薬理作用に対応できます。cAMPやカルシウム動態などを検出するセカンドメッセンジャーを利用したアッセイと組み合わせることで、多様なシグナル経路を平行して検証するこあるといえます。本アッセイでは、受容体の活性化に伴い、化学発光シグナルとができることから、複数のシグナル経路が関与するリガンドの同定も可能でが直線的に増加するため、化学量論的な情報を得ることができます。す。その結果、新規の化合物クラスの発見にもつながります。ヒトGPCR（既知およびオーソログ）発現細胞株ヒトおよびオーソログGPCRを含む400種類以上の検証済み細胞株を取り揃えているDiscoveRxでは、業界最大級のセレクションを誇る機能的 GPCRセルベースアッセイを提供しています。これらのアッセイは新規医薬品候補化合物のカウンタースクリーニングや力価試験、免疫原生試験、構造活性相関(SAR)評価にご活用いただけます。PathHunter β-アレスチン・特長 • 90種類以上のオーファンGPCRを含む、400種類以上の検証済みGPCRアッセイ • HTSスクリーニングにも対応可能なワンステップのプロトコルオーソログGPCRアッセイでは、推定リード化合物のより詳しい情報を得た • QCとしても有用な確実で迅速な検出方法り、選択性や特異性のプロファイリング、リガンドの有効濃度を決定することができます。 • Gタンパク質非依存的なアッセイ法は、リガンドバイアスの研究にも最適 GPCR脱オーファン化研究 • 新規薬理作用の探索やアンタゴニストスクリーニングに適した幅広いアッセイウィンドウ PathHunterアレスチンオーファンGPCRアッセイは、GPCRの脱オーファン化の研究に最適なスクリーニングプラットフォームです。Gタンパク質に依存しない検出方法である本アッセイは、確実かつ高感度のスクリーニングであることから、セカンドメッセンジャーのシグナルを確かめることなく、リガンド＝受容体の新規の組み合わせを明らかにすることが可能です。タグ付けされたGPCR が活性化された際に発せられるシグナルを検出するため、内在性の受容体や偽シグナルの影響を最小限に抑えることができます。 tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142 e | japansupport@discoverx.comwww.discoverx.com 内在化・トラフィッキングアッセイ Pharmacochaperone Endosome EA PK EA Membrane-EA Format EA Golgi PK EA Stabilized EA EA Substrate PK EA PK Light ER EA Endosome-EA Format Substrate PK Light Misfolded Receptor PK EA PathHunter® GPCR内在化アッセイ PathHunter 薬理学的シャペロン・トラフィッキングアッセイの内在化を測定することができます。イメージング技術や抗体を使ったそのを持った分子(化合物)を薬理学的シャペロン (pharmacochaperone) 他の内在化アッセイとは異なり、セルベースの本アッセイは簡便かつ放射性と呼びます。PathHunter薬理学的シャペロン・トラフィッキングアッセイはセ物質が不要です。化学発光を利用するため、HTSにも適しています。受容ルベースのアッセイであり、薬理学的シャペロンの同定や最適化に用いること体のリサイクリング経路を区別することで、新規の阻害剤を同定したり、候補ができます。ミスフォールディングによるタンパク質輸送や内在化が関与する化合物の薬理作用や選択性を確認することが可能です。疾患において、目的化合物の薬理学的性質や機能阻害を簡便かつ定量 PathHunter GPCR内在化アッセイでは、直接的かつ定量的にGPCR タンパク質のミスフォールディングを修正し、正しいタンパク質輸送を促す機能的に測定することが可能となります。業界最大級のGPCR安定発現細胞株のラインナップ DiscoveRxの野生型カップリングGi /Gs /Gq 細胞株GPCR安定発現細胞株は、セカンドメッセンジャー・アレスチン補充・受容体内在化およびタンパク質輸送を検出することにより、GPCRシグナル伝達を評価するために構築されました。600種類を超えるGPCRアッセイ(ヒトまたはオーソログ)から、お客様の目的に合ったアッセイをお選びいただけます。GPCRを創薬ターゲットとしたアッセイは、DiscoveRxにお任せください。 cAMP and Calcium Detection β-Arrestin Recruitment Deorphanization GPCR 特長 • 受容体生物学研究やリード化合物の同定、構造活性相関(SAR)評価に最適 • 幅広いアッセイウィンドウと高い再現性 Custom Assay Development Screening and Profiling Services • Gタンパク質非依存的なアッセイ法 • 特異的・簡便・非放射性 Trafficking tel | 1.866.448.4864 GPCR Endocytosis and Recycling tel | +44.121.260.6142 • HTSに適したワンステップのプロトコル e | japansupport@discoverx.com www.discoverx.com スクリーニング＆プロファイリング試験サービス 600種類以上の非強制的カップリングGPCR安定発現細胞株のコレクションがLeadHunterSM GPCR試験サービスのベースとなってお特長り、GPCR活性応答として複数の下流シグナルを検証することができま • 600種類を超える非強制的カップリングGPCRアッセイす。LeadHunter サービスをご活用いただくことで、リード化合物の同定や選 • 複数の機能アッセイを網羅（β-アレスチン・cAMP・カルシウム・内在化）択性、構造活性相関(SAR)評価など、あらゆるステージのGPCR創薬研究において、時間とコストを削減することができます。 • 既成のパネルとカスタムパネルから選択可能 GPCRscan GPCR創薬ソリューション • 70種類を超えるオーファンGPCRを含むパネルは、GPCRの脱オーファン化に最適 gpcrMAX パネルにより、リガンド＝受容体の特異的な結合を明らかにします。スクリーニングにより同定されたヒット化合物候補は、DiscoveRxの複 • gpcrMAXパネル：アゴニストとアンタゴニストを同時に評価数の機能アッセイを用いて確実に検証をすることができます。 Primary Screen Hit Confirmation 100 100 80 60 40 20 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 cAMP Hunter™ 120 Reference Test Normalized Signal (%) 120 Normalized Signal (%) % Activity PathHunter® Arrestin 120 80 60 40 20 0 10-11 GPCR # 10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 10-5 Reference Test 100 10-4 80 60 40 20 0 10-11 10-10 10-9 [Compound] (M) 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 [Compound] (M) GPCRパネルによるプロファイリングを特定のリガンド濃度により実施し、潜在的な相互作用を検出した (左) PathHunterアレスチンアッセイおよびHitHunter cAMPアッセイを用いて、ターゲットGPCRに対するリガンドの結合能力が評価され、新規のリガンドが同定された（中・右） GPCRscan サービスおよびパネルのご紹介パネル内容 gpcrMAX 165種類以上のGPCR(60種類のリガンドファミリーを網羅)を搭載したフルパネル。アゴニストとアンタゴニストを同時解析。 orphanMAX クラスAおよびクラスBオーファン受容体を網羅した70種類以上のオーファンGPCRを搭載。アゴニストモードのみ対応。 gpcrELECT 既知、オーファンおよびオーソログGPCR細胞株の中からターゲットを自由にご選択いただけるカスタムパネル。 gpcrE/IC50ELECT ご指定のGPCRscanセルベースアッセイを用いた定量的な機能評価。 Chemokine Panel 20種類のケモカイン受容体を網羅するパネル。アゴニストとアンタゴニストを同時解析。 Therapeutic Panels 13種類の疾患別パネル (Cancer, Neurological, Inflammation, Pain and Addiction, Metabolic, Cardiovascular, Digestive and Renal, Reproductive, Respiratory, Ocular, Dermatology, Auditory and Otology, and Post-Traumatic Stress Disorder) Functional Selectivity Index 構造活性相関やリード化合物の評価に最適な、機能選択性およびリガンドバイアスの定量的評価。 β-アレスチン・cAMP・カルシウム・内在化の機能アッセイを使用。 Positive/Negative Allosteric Modulator Screening GPCRセルベースアッセイ(β-アレスチンまたはcAMP)を用いた、ポジティブおよびネガティブアロステリックモデュレーターの定量的評価。 tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142 e | japansupport@discoverx.comwww.discoverx.com OPPRK11 O RD OP RM1 1 OP BWR 2 NP BWR NP TR1 SS TR4 SS TR2 SS R3 SST R5 SST R GPE P3 RXF P4 RXF L1 AGTR GPR25 GPR15 AGTR1 AGTR2 BDKRB1 BDKRB2 CXCR7 GPR182 CCBP2 XCR1 CCRL2 CX3CR1 CCR8 CCR4 CCR1 CCR3 CCR2 CCR5 CXC CXC R1 CXC R2 CCR R5 CX 10 CX CR3 CXCCR4 CC R6 CC RL1 CC R9 CC R6 G R7 G PR1 GPPR1061 G R8 1 M PR5 4 M TN 0 GPTNRR1A G R 1B G PR 151 G PR 82 G PR 14 GP PR 160 1 G R 1 G P 1 48 G P R1 49 C A R1 53 G AS BBR 62 PR R 2 C 6A GPCR創薬研究ポートフォリオ Class A Class C Internalization Ortholog Pharmacotrafficking アッセイ >135 セカンドメッセンジャー >345 アレスチン 1 M R 5 G RM M2 3 G R G RMM6 G R M7 G R 4 G M 8 1 GRRM BR G AB CR L G AL CR C L 1 CARHRR2 C RH R C LP2 R G P1 GLCGR G IPR 1 G HR PT HR2 PT RHR P1R1 GH CYA AD R2 VIP TR SC R1 VIP R146 GP C DAR 176 GPR 22 GPR 7 GPR337L1 GPR A EDNR B EDNR BRS3 GRPR NMBR GPR103 GPR120 GPR19 GPR45 A O AD DO RA R 2 G OR A A G PR A1 3 P N R 5 NT TS 21 2 R M SR 2 L 1 N GH NR NMMU2SR GP U1 R R R G TR 39 GPPR1 HR 4 R PP 1392 NP YR NP Y1R1 PR Y5R GP LHR N R83 NP PY2R NP FFR2 HCRFFR1 HCR TR2 T TAC R1 TAC R3 TACRR1 CCKB 2 CCKA R R OXTR AVPR1B AVPR1A AVPR2 GNRHR NPSR1 PROKR2 PROKR1 GPR63 1 9 11 2B RA Class B Arrestin 2nd Messenger >95 内在化 >5 トラフィッキング種 >225 ヒト >105 オーソログ GPCRファミリー Acetylcholine Galanin Neurotensin Adenosine Ghrelin Opioid Adrenoreceptor Glucagon Orexin Anaphylotoxin Glutamate Purinergic Receptor (P2Y) Angiotensin Glycoprotein Hormone Receptor Peptide P518 Receptor Apelin Gonadotrophin-releasing Hormone Receptor Platelet-activating Factor Bile Acid Receptors Histamine Prokineticin Bombesin Hydroxycarboxylic Acid Receptors Prolactin Releasing Peptide Receptor Bradykinin KISS1-derived Peptide Receptor Prostanoid Calcitonin Leukotriene Protease activated Calcium-sensing Receptors Lysophospholipid PTH receptor Cannabinoid Melanin-concentrating Hormone Receptor Relaxin Chemokine Melanocortin Rhodopsin Cholecystokinin Melatonin Serotonin Class A Orphan Metabotropic Glutamate Somatostatin Corticotropin Motilin Tachykinin Dopamine Neuromedin U Trace Amine Receptor Endothelin Neuropeptide B and W Thyrotropin-releasing Hormone Receptor Formylpeptide Neuropeptide F Urotensin Free Fatty Acid Neuropeptide S Vasopressin GABAB Receptor Neuropeptide Y VIP and PACAP 新規ターゲットが随時加わっております。最新のGPCRターゲットリストは、DiscoveRxウェブサイトにてご確認ください。 www.discoverx.com/gpcrs tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142 e | japansupport@discoverx.com www.discoverx.com GPCR創薬研究開発の総合ソリューション Cholinergic Receptor, Muscarinic 2 (CHRM2)を複数の機能アッセイで評価セカンドメッセンジャー β-アレスチンの補充受容体の内在化 20000 10000 Acetylcholine Carbachol Oxo-M 100000 75000 7500 RLU RLU 10000 125000 RLU Acetylcholine Carbachol Oxo-M 15000 5000 Acetylcholine Carbachol Oxo-M 50000 5000 2500 25000 0 10 -10 0 10 -11 10 -10 10 -9 10 -8 10 -7 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 10 -8 10 -6 10 -4 10 -2 0 10 -10 10 -9 10 -8 10 -7 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 10 -2 Agonist [M] + 10 µM Forskolin [M] [M] 135種類以上の野生型カップリング 415種類以上の検証済み細胞株 95種類以上のネイティブな受容体を Gi /Gs /Gq 細胞株 (オーファンおよびオーソログを含む）発現したセルベースアッセイ各種製品およびサービスアッセイキット安定発現細胞株受託サービスカスタムアッセイ Ready-to-useの凍結細胞各種GPCR安定発現細胞株 DiscoveRxの経験と専門性全ての技術に対応検出試薬検証済みの培養試薬多様なサービスの選択肢 R&Dチームとの連携 HTSスクリーニング対応 200プロジェクト以上の実績培養試薬(培地およびプレート) 製品・サービスの詳細情報および最新のGPCRターゲットリストは、DiscoveRxウェブサイトをご参照ください。 www.discoverx.com/gpcrs 本社所在地: 42501 Albrae Street, Fremont CA 94538 USA 所在地: 〒135-0016 東京都江東区東陽2-2-20東陽駅前ビル URL: http://www.discoverx.com/ 電話: +1-510-979-1415 (内線123 日本語可) FAX: +1-510-979-1650 Eメール: 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