No.20 山口他 - 日本有機地球化学会

Res. Org. Geochem. 25, 71­83 (2009)
〔有機地球化学会 30 周年記念事業 地球・環境有機分子検索マニュアル No.20〕
技術論文
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の
GC/MS による解析 *
,
,
山口保彦 ** *** ****・力石嘉人 ****・横山祐典 **
,
***, ****・大河内直彦 ***, ****, *****
(2008 年 12 月 12 日受付,2009 年 4 月 6 日受理)
きた(e.g. Meierhenrich et al. 2004)
。ただしアミノ
1. はじめに
GC/MS によるアミノ酸の分析手順は , 一般的に,
(1)試料の酸加水分解,
(2)精製と誘導体化,
(3)
GC/MS による測定で構成される。アミノ酸に揮
発性を持たせるために様々な誘導体化法が用いら
れており,tert-ブチルジメチルシリル化(tBDMS:
MacKenzie et al. 1987)
,トリフルオロアシル / イソ
プロピルエステル化(TFA/iPr: Engel et al. 1990)
,
ペンタフルオロアシル / イソプロピルエステル化
酸同位体組成分析への応用例は少なく,しかもそ
の多くが 15N や 13C のラベル実験の分析であり(e.g.
Montigon et al. 2001; Godin et al. 2007)
,同位体の
天然存在度分析に用いられた研究は,我々の知る
限り数例が見られるのみである(Sacks and Brenna,
2005; Pan et al. 2007)
。
本誘導体化の長所としては,20 種のタンパク性
アミノ酸のうち,グルタミンやアスパラギン,ト
リプトファンなど,他の手法では誘導体化が難し
(PFA/iPr: Pelz et al. 1998)
,ピバロイル / イソプロ
ピ ル エ ス テ ル 化(Pv/iPr: Metges et al., 1996)
,エ
いアミノ酸を含む,19 種が誘導体化可能という点
トキシカルボニル / エチルエステル化(EtOC/Et:
Montigon et al. 2001)などが一般的である。
イミノ基に対して反応が進まず,誘導体化ができ
が挙げられる。例外としてアルギニンは,側鎖の
ない。また,本誘導体化のもう一つの大きな長所
本報で注目するアミノ酸のエトキシカルボニル /
エチルエステル誘導体化は,Husek et al. (1991) に
として,処理の簡便さが挙げられる。他の誘導体
よって初めて導入され,主に食品・医療などの研
水の存在下では反応が進まないなど,処理や準備
究分野でアミノ酸の定性・定量分析に用いられて
に手間がかかることが多い。一方で本誘導体化は,
常温・水層における 1 段階反応である上,反応そ
きた。地球惑星科学分野では例えば,隕石アミノ
酸の D/L 分離の前処理などにしばしば用いられて
化法では,複数段階反応や加熱を必要としたり,
のものは 5 分ほどで完了する。以上に述べた長所
* GC/MS analysis of amino acids as ethoxycarbonyl ethyl ester
** 東京大学 海洋研究所 〒 164-8639 東京都中野区南台 1-15-1
Yasuhiko T. Yamaguchi and Yusuke Yokoyama: Ocean Research Institute, The University of Tokyo 1-15-1
Minamidai, Nakano-ku, Tokyo 164-8639 Japan
*** 東京大学 大学院理学系研究科 地球惑星科学専攻 〒 113-0033 東京都文京区本郷 7-3-1
Yasuhiko T. Yamaguchi, Yusuke Yokoyama and Naohiko Ohkouchi: Department of Earth and Planetary Science, The
University of Tokyo 7-3-1 Hongo, Bunkyo-ku, Tokyo 113-0033 Japan
**** 独立行政法人 海洋研究開発機構 海洋・極限環境生物圏領域 〒 237-0061 神奈川県横須賀市夏島町 2-15
Yasuhiko T. Yamaguchi, Yoshito Chikaraishi, Yusuke Yokoyama and Naohiko Ohkouchi: Institute of Biogeosciences,
Japan Agency for Marine-Earth Science and Technology 2-15 Natsushima-Cho, Yokosuka 237-0061 Japan
***** 東京工業大学 大学院総合理工学研究科 化学環境学専攻 〒 226-8502 神奈川県横浜市緑区長津田町 4259
Naohiko Ohkouchi: Department of Environmental Chemical Engineering, Tokyo Institute of Technology 4259
Nagatsuda, Midori-ku, Yokohama 226-8502, Japan
e-mail: y-t-yamaguchi@ori.u-tokyo.ac.jp
−71−
山口保彦・力石嘉人・横山祐典・大河内直彦
(a) Protein L--amino acids
(a-1) Essential (indispensable)
(b) Non-protein amino acids
*
(a-2) Non-essential (dispensable)
iVal
5-ALA
*
Arg
His
Ala
*
Asn
3-ABA
2-AAA
*
Ile
Cys
Asp
Leu
Sar
Hyp
*
Lys
Gln
Met
Glu
-Ala
*
Phe
Thr
Gly
Pro
3-AiBA
Orn
*
1MH
*
Trp
Val
Ser
Tyr
GABA
3MH
(*: Chiral center)
Fig. 1. Chemical structures of amino acids: (a-1) essential and (a-2) non-essential protein L-α-amino acids, and
(b) typical non-protein amino acids. Abbreviations refer in Table 1.
から,アミノ酸のエトキシカルボニル / エチルエ
3. 分析方法
ステル誘導体化は今後,有機地球化学を含む様々
な地球惑星科学分野の研究(特にアミノ酸の窒素
3.1. アミノ酸の抽出と誘導体化
同位体組成分析)で応用が広がっていくことが期
アミノ酸の抽出とエトキシカルボニル / エチル
エステル誘導体化の分析手順を Fig. 2 に示す。通
待される。
本報では,その誘導体化法と GC/MS 分析法(同
常,試料に含まれるタンパク質に含まれるタンパ
定法)を紹介する。GC/MS による同定法の先行研
ク質を分析したい場合にはまず,12 規定(mol/l)
究としては,25 種類のアミノ酸誘導体化体につ
いて報告した Huang et al. (1993) が挙げられるが,
塩酸によって酸加水分解(100℃,12-24 時間)す
ることが多い。ただし加水分解の過程でアスパラ
本報では新たに 10 種類の非タンパク性アミノ酸
ギン・グルタミンはそれぞれアスパラギン酸・グ
(Table1 の No.1, 4, 5, 6, 7, 13, 20, 23, 26, 27)を加え
ルタミン酸に変換されてしまうので,本報の代表
た同定法を報告する。
2. 試
試料では加水分解は行わず,試料に含まれる遊離
体アミノ酸を直接,誘導体化した。まず試料(シ
料
代 表 試 料 とし て,
「 ハ イパ ード ル フィン 」調
ロウリガイ,ダイコン,イカナゴ)に含まれる組
織液を 1 ml 抽出し,有機溶媒(ジクロロメタン /n-
査 潜 航(NT08-10,Dive#846)に お い て 相 模 湾
ヘキサン)での液 -液抽出により脱脂した。次に,
初島沖の冷湧水域から採取されたシロウリガイ
(Calypotogena sp.)
,青森県で栽培されたダイコン
水:エタノール:ピリジン:エチルクロロフォル
メイトが体積比で 20:10:2.5:1 になるように,試料
(Raphanus sativus)
,瀬戸内海で採取された魚(イ
カナゴ,Ammodytes personatus)の分析結果を示す。
水溶液 1 ml に対しエタノール 500 μl とピリジン
125 μl を加えて軽く振り混ぜた後,エチルクロロ
−72−
No.
Compoud
Abbreviation
formula
Molecular weight
Prominent fragment ions (m/z)
Level of
Retention time
identification**
(min)
underivative derivative
Base
Others
1 Sarcosine*
(2-amino-N-methylethanoic acid)
Sar
C8H15NO4
89
189
18.7
116 88, 70, 44
2 Alanine
Ala
C8H15NO4
89
189
19.0
116 189, 88, 72, 44
4
75
175
19.2
102
4
3 Glycine
Gly
C7H13NO4
(2-amino-2-methylbutanoic acid)
iVal
C10H19NO4
117
217
20.5
144 188, 116, 98, 72
4 Isovaline*
3-AiBA C9H17NO4
103
203
20.8
130 102, 84, 58
4
5 3-Aminoisobutyric acid* (3-amino-2-methylpropanoic acid)
(3-aminopropanoic acid)
89
189
21.2
115 189, 144, 116, 102, 98
4
C8H15NO4
6 β-Alanine*
β-Ala
103
203
21.7
102 158, 130, 129, 112, 84
7 2-aminobutyric acid*
2-ABA
C9H17NO4
117
217
21.9
144 116, 72
4
8 Valine
Val
C10H19NO4
129
157
23.2
84 157
4
9 pyro-Glutamic acid
p-Glu
C7H11NO3
131
231
23.8
158 102, 86
4
10 Leucine
Leu
C11H21NO4
105
205
24.1
132 175, 129, 101, 86
4
11 Serine
Ser
C8H15NO5
131
231
24.1
158 102, 86
4
12 Isoleucine
Ile
C11H21NO4
(4-aminopentanoic acid)
GABA
C9H17NO4
103
203
24.2
116 158, 130, 112, 102, 86
13 4-aminobutyric acid*
119
219
24.2
129 175, 146, 101, 74
4
14 Threonine
Thr
C9H17NO5
115
215
24.6
142 98, 70
4
15 Proline
Pro
C10H17NO4
132
214
25.1
141 174, 102, 69
4
16 Asparagine
Asn
C9H14N2O4
133
261
28.1
188 142, 116, 74, 70
4
17 Aspartic acid
Asp
C11H19NO6
(4-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid)
Hyp
C10H17NO5
131
231
29.2
158 86, 68
4
18 Hydroxyproline*
149
249
29.6
175 188, 176, 142, 129, 101, 61
4
19 Methionine
Met
C10H19NO4S
5-ALA
C11H21NO4
131
231
29.6
129 186, 158, 140, 101
20 δ-Aminolevulinic acid* (5-amino-4-oxo-pentanoic acid)
147
275
30.7
202 156, 128, 84
4
21 Glutamic acid
Glu
C12H21NO6
165
265
32.0
176 192, 131, 120, 102, 91, 74
4
22 Phenylalanine
Phe
C14H19NO4
(2-amino-hexanedioic acid)
2-AAA
C13H23NO6
189
289
32.9
216 170, 128, 124, 98
23 2-Aminoadipic acid*
121
293
33.0
220 174, 148, 114, 102, 74
24 Cystine
Cys
C11H19NO6S
146
246
34.1
84 173, 128
4
25 Glutamine
Gln
C10H18N2O5
(2-amino-3-(3-methylimidazol-4-yl)propanoic acid) 3MH
C12H19N3O4
169
269
36.3
95 196, 180, 96
26 3-Methylhistidine*
(2-amino-3-(1-methylimidazol-4-yl)propanoic acid) 1MH
C12H19N3O4
169
269
36.6
95 196, 180, 150, 96
27 1-Methylhistidine*
(2,5-diaminopentanoic acid)
Orn
C13H24N2O6
132
304
36.9
142 258, 212, 70
28 Ornithine*
146
318
38.8
156 272, 226, 84
4
29 Lysine
Lys
C14H26N2O6
155
327
39.8
238 327, 282, 254, 154, 81
4
30 Histidine
His
C14H21N3O6
181
353
41.7
107 280, 264, 192
4
31 Tyrosine
Tyr
C17H23NO7
204
304
43.8
130 304, 231, 215
4
32 Tryptophane
Trp
C16H20N2O4
Peak numbers refer to chromatogram in Fig.2 (Sar, iVal, 2-ABA, GABA, 5-ALA, 2-AAA, Cys, 3MH, 1MH and Orn were obtained by authentic standards, but not found in the samples presented in this
paper) and spectra in Fig.3.
*: Non-protein amino acid (IUPAC name in bracket)
**: All compounds are identified by coincidence in GC retention time and mass spectra with those of authentic standards.
Table 1. Summary of retention time and prominent fragment ions for ethoxycarbonyl-amino acid-ethyl esters
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の GC/MS による解析
−73−
山口保彦・力石嘉人・横山祐典・大河内直彦
フォルメイト 50 μl を加えた。バイアルの栓を固く
締めて 10 秒ほどよく振り,常温で 5 分静置した。
Samples
* Decarbonated (2mol/l HCl) & dried up by N2 stream (at 100)
* HCl hydrolyzed (1ml of 12mol/l HCl at 100 for 12-24h)
その後,炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を 1 ml 加
えた。最後に水 -有機溶媒(ジクロロメタン /n-ヘ
* Filtrated (removed solid matter)
Defatted (dichloromethane/n-hexane 6:5, v/v, 2mlx3)
* Removed impurities (cation-exchange column chromatography)
キサン)での液 -液抽出により,アミノ酸のエトキ
シカルボニル / エチルエステル誘導体化体を得た。
* Dried up by N2 stream (at 100) Amino acids
Esterified (sample water/ethanol/pyridine/ethyl chloroformate, 20:10:2.5:1, v/v,
at room temperature for 5min)
3.2. GC/MS 分析
Added 1ml of saturated sodium hydrogen carbonate solution
GC/MS 分 析は,Agilent HP 6890 ガ スクロマト
Extracted with dichloromethane/n-hexane (6:5, v/v, 2mlx3)
グラフ /HP MSD 5973N 質量分析計を用いた。導
入 法 は PTV 法 を 用 い,50 ℃ で 0.2 分 間 保 持 し,
Ethoxycarbonyl/amino acid/ethyl esters
350℃まで 600℃ / 分で昇温した後,350℃で 10 分
間保持した。分析カラムは,J&W HP-5MS(30 m
長,0.25 mm 径,0.15 μm 膜厚)を使用し,40℃で
GC/MS & GC/C/IRMS
Fig. 2. Extraction and derivatization procedures of amino
acids. Asterisks indicates optional processes.
4 分間保持し,90℃まで 10℃ / 分で昇温し,90℃
から 220℃まで 5℃ / 分で昇温した後,220℃で 10
分間保持した。キャリアーガスの流速は,1.4 ml/
Fig.3
(a) Deep-sea clam (Calyptogena sp.)
22
3
31
29
2
12
14
10
15
8
5 6
911
19
32
17 18
30
21
16
Intensity
(b) Radish (Raphanus sativus)
25
22
13
8
14
17
11
10
15
16
31
21
19
29 30
29 30
22
(c) Fish (Ammodytes personatus)
32
31
10 14
2
8
6
3
19
15
11
9
12
16
17
32
21
20
25
30
35
40
Retention time (min)
Fig. 3. TIC chromatograms of amino acids from (a) deep-sea clam, (b) radish, and (c) fish. Peak numbers correspond to the
compound numbers in Table 1 and Fig.4.
−74−
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の GC/MS による解析
分の定流速(constant flow)モードで使用した。
ピークとして見られる。
Fig. 3 に,各試料の分析で得られた TIC クロマ
酸性アミノ酸であるアスパラギン酸(Fig. 4, No.
17)
,グルタミン酸(Fig. 4, No. 21)
,2-アミノアジ
ピン酸(Fig. 4, No. 23)では,[M − 73] + が基本の
トグラムを,Table 1 に,同定レベルを示す。 アミ
ノ酸のエトキシカルボニル / エチルエステル誘導
イオンフラグメントとなる。グルタミン酸ではさ
らに,[M − 73] + から C2H5OH が脱離して五員環
体化体の基本的なマススペクトルは,エチルエス
テル基が脱離した [M−45]+,エトキシカルボニル
構造をとった m/z156 と,さらに ‐ 73 + H+ で生
じる m/z 84 が安定であるため,大きなピークとし
基が脱離した [M−73] +,エトキシカルボニル基二
つが脱離して H+ がアミノ基に付加した [M−145] +
て見られる。2-アミノアジピン酸も同様の機構で,
m/z170,m/z98 を示す。なおグルタミン酸は,誘導
4. 分析結果
などに対応したイオンフラグメントを示す。各ア
体化の際にカルボキシル基とアミノ基の分子内縮
ミノ酸に特有な開裂も多いので,代表的なものを,
以下に簡単に紹介するほか,Fig. 4 では構造式に
合により,ピログルタミン酸(Fig. 4, No. 9)を生成
する。誘導体化の条件が酸性であるほど,ピログ
開裂パターンを示した。詳しい開裂のスキームは,
Huang et al. (1993) を参照されたい。
ルタミン酸がより多く生じる(Husek et al. 1991)
。
メチオニン(Fig. 4, No. 19)とシステイン(Fig. 4,
側鎖が C2 以上の脂肪族アミノ酸である,2-アミ
ノ酪酸(Fig. 4, No. 7)
,バリン(Fig. 4, No. 8)
,ロイ
No. 20)は,硫黄原子の影響を受けた開裂を示す。
メチオニンは,硫黄原子で活性化された側鎖末端
シン(Fig. 4, No. 10)
,イソロイシン(Fig. 4, No. 12)
は,側鎖と α 位炭素の結合が開裂して,m/z174 の
の水素がカルボキシル基に移行して(McLafferty
転位)
,トレオニンやセリンと同様に m/z175,m/
イオンフラグメントを示す。さらに,エチルエス
テル基やカルボニル基が脱離した,それぞれ m/
z 129,m/z101 を 示 す。 ま た, ス ル フ ォ ニ ウ ム
z129,m/z102 のイオンフラグメントも示す。イソ
バリン(Fig. 4, No. 4)は,α 位炭素に水素ではなく
メチル基が結合しているので,m/z188 を示す。
ヒドロキシル基を持つセリン(Fig. 4, No. 11)と
トレオニン(Fig. 4, No. 14)は,m/z175,m/z 129,
m/z101 を 特 徴 的 に 示 す。m/z175 は,McLaffertytype 転 位( 水 素 が 転 位 する特 殊 な McLafferty 転
位;Huang et al. 1993)によってヒドロキシル基の
イ オ ン(CH3SCH2+)の 脱 離 に よ っ て,m/z61,m/
z188 も示す。システインでは,バリンなどと同様
に m/z174 を示すほか,McLafferty 転 位によって
NH2COOC2H5 が脱離して m/z204 を示す。
芳香族アミノ酸である,フェニルアラニン(Fig.
4, No. 22)
,3-メチルヒスチジン(Fig. 4, No. 26)
,
1-メチルヒスチジン(Fig. 4, No. 27)
,ヒスチジン
(Fig. 4, No. 30)
,チロシン(Fig. 4, No. 31)
,トリ
水素がカルボニル基の酸素に転位して生じ,続い
プトファン(Fig. 4, No. 32)では,側鎖の脱離と,
McLafferty 転位による NH2COOC2H5 の脱離が起き
て C2H5OH が脱離して五員環構造をとると m/z 129
に,さらに C2H4 が脱離すると m/z101 となる。また,
やすい。また,トリプトファンでは,特異的に親
イオン m/z304 が大きなピークとして見られる。
プロリンにヒドロキシル基が置換した構造のヒド
ロキシプロリン(Fig. 4, No. 18)では,[M − 145] +
塩基性アミノ酸である,オルニチン(Fig. 4, No.
28)とリシン(Fig. 4, No. 29)は,分子内求核置換
で生じた m/z86 から,さらにヒドロキシル基が脱
水して m/z68 を特徴的に示す。
反応機構によって,[M − 73] + から NH2COOC2H5
アミド基を持つアスパラギン(Fig. 4, No. 16)と
グルタミン(Fig. 4, No. 25)では,アミド基は誘導
が脱離して安定な環構造をとることで,それぞれ
m/z142,m/z156 を大きなピークとして示す。また,
体化されない。特にアスパラギンでは,誘導体化
親イオンから C2H5OH が脱離して環構造をとるこ
とで,それぞれ m/z258,m/z272 を示す。
の際にアミド基が脱水してシアノ基となるため,
親イオンは m/z214 となる。グルタミンではアミド
しかしこれらのアミノ酸は,ロイシン(Fig. 4,
No. 10)とイソロイシン(Fig. 4, No. 12)のように,
基はそのままで,[M − 73] + が五員環構造をとっ
た後に NH2COOC2H5 が脱離した m/z84 が大きな
構造異性体であることが多く,そのフラグメント
パターンは非常に類似していることが多い。アミ
−75−
山口保彦・力石嘉人・横山祐典・大河内直彦
Fig.4
M-45
Common fragment ions for
ethoxycarbonyl ethyl ester
M-73
M-73+H+
M-45
No.1, Sar
M-73
116
44
70
88
189
M-73
Intensity
116
44
72
M
M-45
88
189
144
MW=189
9
No.3, Gly
M-73
102
74
56
M-45
M
130
175
MW=175
5
No.2, Ala
M
144
MW=189
M-45
No.4, iVal
M-73
144
188
-72
116
M-145
72
55
98
188
116
m/z
MW=217
Fig. 4. Mass spectra of amino acids as ethoxycarbonyl ethyl ester derivatives. Compound numbers correspond to the
compound numbers in Table 1 and the peak numbers in Fig. 3.
−76−
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の GC/MS による解析
No.5, 3-AiBA
M-73
130
M-145
58
84
102
M-45
M
158
203
MW=203
No.6, -Ala
115
M-73
102
116
M-45
144
98
70
M
88
189
160
MW=189
174
No.7, 2-ABA
Intensity
-72
-45
102
129
102
56
74
112
84
129
158
130
M-45
M-73
M
203
174
174
M-73
No.8, Val
MW=203
MW=2
2
144
M-145
55
98
102 116 129
72
M
174
MW=217
7
217
No.9, p-Glu
M-73
84
M
157
m/z
−77−
MW=15
5
MW=157
山口保彦・力石嘉人・横山祐典・大河内直彦
No.10, Leu
M-73
158
102
M
129
86
Intensity
No.11, Ser MW=231
1
M-73
132
M-145
86
60
129
101
74
175
MH+
102
206
231
174
No.12, Ile
MW=205
M-73
158
102
129
M
86
174
No.13, GABA
231
MW=231
1
116
116
86
102 112
M-73
M-45
130
158
M
203
MW=203
No.14, Thr 101
129
M-145
100
74
M-73
102
175
146
MW=219
MW
219
m/z
−78−
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の GC/MS による解析
No.15, Pro
M-73
142
M-145
70
98
114
M-45
M
170
215
MW=215
MW=2
174
No.16, Asn
M-145
M-73
69
141
102
No.17, Asp
214
MW=214
M-73
Intensity
M
174
188
M-145
142
116
M-45
M
216
261
MW=261
No.18, Hyp
M-73
158
68
M-145
M
86 96
186
213
231
MW=231
MW
MW=2
2
H+
175
No.19, Met
61
61
188
129
175 M-73
101
114
142
157
M
176
188 203
249
MW=249
m/z
−79−
山口保彦・力石嘉人・横山祐典・大河内直彦
102
No.20, 5-ALA
129
101
102
M-45
M-73
140
186
158
M
231
84
M-73
156
202
128
M-45
183
230
M
275
MW=275
No.22, Phe
Intensity
91
91
174
176
176
M-73
102
192
120 131
148
M
H+
265
No.21, Glu
MW=231
MW=265
No.23, 2-AAA
M-73
216
98
170
124
128
M-45
244
No.24, Cys MW=289
M-73
220
174
102
204
74
132 148
114
204
174
M
248
188
293
m/z
−80−
H+
MW=293
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の GC/MS による解析
No.25, Gln
84
M-73
173
128
156
183
H+
96
180
96
180
H+
M-73
M
196
269
MW=269
Intensity
No.27, 1MH
95
150
96
M-73
M
180 196
269
MW=269
142
No.28, Orn
142
-89
(231)
70
258
212
157 175
MW=246
95
M
246
No.26, 3MH
229
207
M
304
MW=304
No.29, Lys
156
84
171
199
226
272
M
318
m/z
−81−
MW=318
山口保彦・力石嘉人・横山祐典・大河内直彦
81
-72
No.30, His
238
M-73
H+
254
81
154
238
M-45
M
282
327
H+
MW=327
Intensity
154
107
-72
No.31, Tyr
107
179
192
-72
264
192
264
135
179
M-73
280
220
M
307
353
H+
MW=353
130
No.32, Trp
130
M
304
103
215
M-73
215 231
258
H+
m/z
−82−
MW=304
アミノ酸(エトキシカルボニル / エチルエステル誘導体)の GC/MS による解析
ノ酸のエトキシカルボニル / エチルエステル誘導
as tert-butyldimethylsilyl derivatives : Preparation of
体化体の同定は,標準物質の保持時間の情報をあ
derivatives in a single reaction. J. Chromatogr. A 387,
わせて比較する必要がある。
241-253.
謝
Meierhenrich U. J. , G. M. Muñoz Caro, J. H. Bredehöft,
辞
E. K. Jessberger, W. H. -P. Thiemann (2004)
本稿で用いたイカナゴは,奄美栽培漁業セン
Identification of diamino acids in the Murchison
ターから提供され,シロウリガイは,小栗一将博
meteorite, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 101, 25,
9182-9186.
士(海洋研究開発機構)から提供されたものであ
る。また,小川奈々子博士,高野淑識博士,柏山
Metges C. C., Petzke K. -J., Hennig U. (1996) Gas
祐一郎博士(海洋研究開発機構)には,アミノ酸
ghromatography/combustion/isotope ratio mass
の分析に関して議論していただいた。深く感謝い
spectrometric comparison of N-acetyl- and N-pivaloyl
たします。本稿の内容は,科学研究費補助金(力
amino acids esters to measure 15N isotopic
石・横山)および環境省地球環境研究総合推進費
abundances in physiological samples: A pilot study
(横山)により実施した研究成果の一部を取り纏め
on amino acids synthesis in the upper gastro-intestinal
tract of minipigs. J. Mass. Spectrom. 31, 367-376.
たものである。
Montigon F., Boza J. J., Fay B. (2001) Determination
引用文献
of 13C- and 15N-enrichment of glutamine by
gas chromatography/mass spectrometry and gas
Engel M. H., Macko S. A., Silfer J. A. (1990) Carbon
isotope composition of individual amino acids in the
chromatography/combustion/isotope ratio mass
Murchison meteorite. Nature 348, 47-49.
spectrometry after N (O,S)-ethoxycarbonyl ethyl
ester derivatisation. Rapid Commun. Mass. Spectrom.
Godin J. P., Faure M., Breuille D., Hopfgartner G., Fay L.
15, 116-123.
B. (2007) Determination of 13C isotopic enrichment
of valine and threonine by GC–C–IRMS after
Pan B. S., Wolyniak C. J., Brenna J. T. (2007) The
formation of the N(O,S)-ethoxycarbonyl ethyl ester
intramolecular δ15N of lysine responds to respiratory
derivatives of the amino acids, Anal. Bioanal. Chem.
status in Paracoccus denitrificans, Amino Acids 33,
388, 909-918.
631-638.
Huang Z. H., Wang J., Gage D. A., Watson J. T., Sweeley
Pelz O., Cifuentes L. A., Hammer B. T., Kelley C. A.,
C. C. (1993) Characterization of N-ethoxycarbonyl
Coffin R.B. (1998) Tracing the assimilation of organic
ethyl esters of amino acids by mass spectrometry, J.
compounds using δ13C analysis of unique amino
Chromatogr. 635, 271-281.
acids in the bacterial peptidoglycan cell wall. FEMS
Husek P. (1991) Rapid derivatization and gas chromatographic determination of amino acids. J. Chromatogr.
Microbiol. Ecol. 25, 229-240.
Sacks G. L., Brenna J. T. (2005) N-15/N-14 position-
552, 289-299.
specific isotopic analyses of polynitrogenous amino
MacKenzie S. L., Tenaschuk D., Fortier G. (1987)
Analysis of amino acids by gas-liquid chromatography
−83−
acids. Anal. Chem. 77, 1013–1019.