Review 真核生物mRNAの 分解制御 星野真一 遺 伝 情 報 で あ るmRNAは 核 に お け る転 写 とス プ ラ イ シ ン グ,キ ャ ッ ピ ン グや ポ リ(A)付 加 な ど の プ ロ セ シ ン グ を 受 け た の ち,核 外 に輸 送 され,細 胞 質 に お い て 翻 訳 の 鋳 型 と な る こ と で 遺 伝 子 発 現 に お け る 使 命 を 完 了 す る.mRNAが myces cerevisiaeを 分 解 さ れ る 過 程 は,近 年 と く に 酵 母Saccharo モ デ ル 系 と して そ の 詳 細 が 解 明 され つ つ あ る が,mRNAの の 関 係,す な わ ち,翻 訳 を 終 え たmRNAが 分 解 と翻 訳 と 何 を 引 き金 と して 分 解 さ れ る の か と い う,分 子 生 物 学 上,非 常 に重 要 な 問 題 に対 す る答 え は明 らか に され て い な か った.筆 者 ら は,翻 訳 終 結 因子 eRF3の 機 能 を 解 析 す る過 程 で,翻 訳 終 結 の シ グ ナ ル がmRNA分 解 の トリガ ー と な る こ と を見 Database Center for Life Science Online Service い だ した. 遺 伝子発現mRNA分 解 翻訳終 結 は じめ に 転 写 され たmRNAが こ れ まで の 遺 伝 子 発 現 の 研 究 は 転 写 が 主 流 で あ り,転 訳 を受 け る た め,転 写 以 後 の 調 節 機構 が 遺 伝 子 発現 調 節 写 後 の調 節 機 構 の 重 要 性 に つ い て はあ ま り触 れ られ て こ にお い て 非 常 に 重 要 な位 置 を 占め る よ う に な っ た と考 え なか っ た の が 実 情 で あ る.大 腸 菌 を は じめ とす る原 核 生 られ る.実 際,真 核 生 物 にお い てmRNAの 物 にお い て は,転 遺 伝 子 発 現 調 節 に 大 き くか か わ る こ と を示 す 例 が,近 年 写 と翻 訳 は 連 動 して 起 こ る た め遺 伝 子 一 度 核 外 に 輸 送 され て は じめ て 翻 代 謝過 程が 発 現 は転 写 レベ ル で の 調 節 が 主 体 とな るが,真 核 生 物 に し だ い に 集 積 しつ つ あ る.最 も初 期 の 研 究 で は,10種 お い て は核 と細 胞 質 は 核 膜 に よ っ て 物 理 的 に 隔絶 さ れ, 類 の 普 遍 的 なハ ウ ス キ ー ピ ン グ 遺 伝 子 に つ い てmRNA 図1mRNAの 構造 (a)一 般 的 なmRNAの 構 造.5'末 端 に は キ ャ ップ構 造,3'末 端 に は ポ リ(A)鎖 を 有 し,固 有 のORFに 平 均 約210塩 3'UTRか 加 え て ヒ トで は 基 の5'UTRと 約1kbの らな る, (b)5'末 端 キ ャ ップ と3'末 端 ポ リ(A)鎖 に はそ れ ぞれelF4E,PABPが 結 合 し, 両 者 が 足 場 蛋 白 質 で あ るelF4Gと す る こ とでmRNAは 結合 環状構造 をとりう る. (c)in vitroで の 再 構 成 に よ りmRNA が環 状 化 す る こ とを 証 明 した 原 子 間 力顕 微 鏡 像,(文 献5よ Shinichi Hoshino,東 Regulation り許可 を得 て 転 載) 京 大 学 大 学 院 薬 学 系 研 究 科 生 理 化 学 教 室E-mail:hoshino@mol.fu-tokyo.ac.jp of mRNA decay in eukaryote 蛋 白 質 核 酸 酵 素Vol.48No.9(2003) 1229 の 蓄 積 量 とmRNAの 果,mRNAの 安 定 性 や 転 写 との 関 係 を調 べ た 結 蓄 積 量 は 転 写 速 度 を 反 映 せ ず,む mRNAの しろ Ⅰ.一般 的 なmRNAの 安 定 性 に よ っ て 規 定 さ れ て い る こ とが 示 さ れ 構 造 的 特 徴:mRNA環 状化 構造(図1) て い る1).こ の よ うな 結 果 は,酵 母 や 哺 乳 類 に お け る最 近 の トラ ンス ク リ プ トー ム解 析 に よ り再 確 認 さ れ て い る. 翻 訳 と分 解 過 程 に お け る 調 節 機 構 を 理 解 す る 目 的 か ら,ま ま た,と くに 細 胞 の 活 性 化 ・癌 化,分 化や免 疫応答 に 中 心 的 な役 割 を担 うサ イ トカ イ ン,増 殖 因 子,癌 原遺伝 たmRNAの 基,酵 な わ ち,転 写 時 お よ び転 写 後 母 で は60∼90残 に応 答 して遺 伝 子 発 現 が 制 御 され うる とい う点 に あ る と 基(最 長2.8kb)の5'非 い え る.ま た,卵 の 成 熟 過 程 や 初 期 胚 の 発 生 過 程 に お い 長8.6kb)の3'非 分 解 と翻 訳 の 調 節 に よ り遺 伝 子 発 現 は ヒ トで200∼250残 訳 開始 ら 終 止 コ ド ン(UAA,UGA,UAG)ま 蛋 白 質 コ ー ド領 域(ORF)以 て,母 性mRNAの 端 ポ リ(A) 基 と 報 告 さ れ て い る.翻 の 調 節 機 構 の 利 点 は,こ の よ う な外 界 か らの 刺 激 に 迅 速 mRNAは べ て のmRNAに 端 キ ャ ッ プ 構 造 と3'末 写 直 後 の ポ リ(A)鎖 コ ド ンAUGか 構 造 的 特 徴 につ い れ な 例 外 を 除 き,す 共 通 す る 構 造 は5'末 鎖 で あ る.転 安 定 性 制 御 が 重 要 な役 割 を 果 たす こ とが 明 ず 一 般 的 なInRNAの て 概 説 し た い.ま 子 な どの 発 現 に お い て,細 胞 外 か らの シ グ ナ ル に 応 答 し らか に さ れ て きて い る.す Database Center for Life Science Online Service mRNAの 外 に,ヒ での トで は 平 均210塩 翻 訳 領 域(5'UTR),平 翻 訳 領 域(3'UTR)が 均1kb(最 存 在 す る. 直 鎖 状 構 造 を と る と 考 え ら れ て い た が,そ が 制 御 され る とい う例 は,転 写 後 調 節 機 構 の 重 要 性 を示 の 一 方 で 電 子 顕 微 鏡 観 察 に よ り環 状 構 造 を と る こ とが報 す 顕 著 な 例 で あ る.そ 告 さ れ て お り2∼4),長 い 間 そ の 問 題 は 未 解 明 で あ っ た. の ほ か,細 胞 周 期 に か か わ る 遺 伝 子 の発 現 制 御 や概 日 リズ ム をつ く り出す 時 計 遺 伝 子 の 発 ご く 最 近,5'末 現 制 御,神 が,ま 経 終 末 特 異 的 な遺 伝 子 発 現 調 節 な ど に お い て も,転 写 後 の 調 節 機 構 の重 要性 が 示 さ れ て い る. 態制 品 質 管 理 と抗 ウ イ ル ス 防 御 機 構 をあ げ る こ と が で き る.異 常 なmRNAを 分 解 し排 除 す る 品 質 管 理 機 構 は,正 常 なmRNAの 翻訳 と 分 解 に非 常 に 密 接 な 関 連 性 を もつ.本 稿 で は,主 酵 母 に お け る 詳 細 なmRNA分 と して 解 機 構 の 解 析 と哺 乳 類 に お い て 明 ら か に され て き た転 写 産 物 固 有 のmRNA分 機構,そ 解 して 筆 者 らが 最 近 明 らか に し た翻 訳 終 結 と共役 したmRNA分 端 ポ リ(A)鎖 に は ポ リ(A)結 PABP1[poly(A)-binding こ の よ う な遺 伝 子 発 現 調 節 の ほ か に,mRNA動 御 の 主 要 な 役 割 と して,mRNAの た3'末 端 キ ャ ッ プ 構 造 に は 翻 訳 開 始 因 子eIF4E 解 機 構 に つ い て 紹 介 す る. scaffold蛋 protein]が 結 合 し,両 者 が 白 質 で あ る 翻 訳 開 始 因 子eIF4G(eukaryotic initiation factor4G)を が 報 告 さ れ,実 介 して 三 者 複 合 体 を形 成 す る こ と 際 に こ れ ら の 翻 訳 因 子 とmRNAと 構 成 実 験 に よ りmRNAが の再 環 状 構 造 を とる こ とが 原 子 問 力 顕 微 鏡 を 使 っ て 証 明 さ れ た5).ま たeⅠF4Gは40Sリ ソ ー ム サ ブ ユ ニ ッ トを 結 合 す るeIF3と と で,翻 合 蛋 白 質 訳 開 始 を 促 進 す る こ と が 示 さ れ て い る.こ う なPABP1と mRNAの ボ 相 互作用 す る こ の よ 翻 訳 開 始 複 合 体 と の 結 合 を 介 し た 環 状 化 は,翻 訳 を終 え た リ ボ ソ ー ム を 次 の 翻 訳 開始 部 位 に リサ イ クル す る こ とで 翻 訳 開 始 の効 率 を促 進 す る と い う,翻 訳 活性 化 機 構 の 構 造 的 基 盤 と して 説 明 さ れ て い る. 5'キ ャ ッ プ 構 造 と3'末 端 ポ リ(A)鎖 略 ARE : AU-rich element eEF1A eIF eRF NMD Nudix : : : : : PABP PRE TTP 1230 号 eukaryotic elongation factor 1A eukaryotic initiation factor eukaryotic releasing factor nonsense-mediated mRNA decay nucleoside dephosphate linked to some other moiety, X : poly (A) -binding protein : polypyrimidine-rich element : tristetraprolin 蛋 白 質 核 酸 酵 素Vol.48No.9(2003) 訳 の 効 率 を 高 め る 一 方 で,エ 端 か ら のmRNA分 は,こ の よ うに 翻 キ ソ ヌ ク レ アー ゼ に よ る末 解 を 阻 害 す る こ と で,翻 訳 とmRNA 分 解 の 双 方 の 過 程 に お い て 遺 伝 子 発 現 制 御 に 大 き く貢 献 し て い る. Ⅱ.一 般 的 なmRNA分 解 経 路(図2) 最 初 に述 べ た よ う に,真 核 生 物 のmRNA分 解 経路 は 酵 母 を モ デ ル 系 と して そ の 大 枠 が 明 らか に さ れ て きた. Database Center for Life Science Online Service 図2真 核 生 物 のmRNA分 真 核 生 物 のmRNA分 解 経路 解 経 路 はデ ア デニ レー シ ョンの 依存 性 か非 依 存 性 か に よ り2つ に 大別 さ れ る,通 常 のmRNAは が分 解 の 第-段 階 で あ り,律 速 段 階 であ る.デ ア デ ニ レー シ ョ ン非 依 存 性 の 経 路 と して はNMD経 て い る.ま たNSD(non-stop decay)は デ ア デ ニ レー シ ョン 路 とエ ン ドヌ ク レ アー ゼ 経 路 が 知 ら れ ポ リ(A)鎖 の分 解 と そ れ に続 く3'→5'経 路 に よ る分 解 が 進 行 す る が,こ の 場 合 の ポ リ(A)鎖 の 短 縮 化 は デ ア デニ レー ス で はな くエキ ソソー ム によ る もの で あ る. mRNA分 解 は 無 秩 序 に起 こ る 反 応 過 程 で あ る と考 え ら れ が ち で あ る が,実 は 非 常 に制 御 され た 過 程 で あ る とい う こ とが 証 明 さ れ て い る6).通 常mRNA分 解 の 第1段 階 は,3'末 端 ポ リ(A)鎖 の 短 縮 化 過 程(デ ァ デニ レー シ ョ ン)に あ る.酵 母 に お い て 転 写 直 後 のmRNAの (A)鎖 は60∼90残 基 の 長 さ を 有 す る が,こ ポリ れ が約10残 は,上 記 の 経 路 と は 異 な り,そ ン グ 反 応 で あ り,そ し,mRNAは の 第1段 の 後5'→3'方 向 の 分解 経路 が 進 行 急 速 に 分 解 を 受 け る.こ NMD(nonsense-mediated て い る8).ま た,終 mRNA 合 に は,NSD(non-sto pdecay)と 端 ポ リ(A)鎖 解 が 進 行 す る.こ の 分 解 経 路 が 通 常 のmRNA分 る9,10). こ の よ う にmRNA分 ア デ ニ レー シ ョ ン後,3'→5' 方 向 の 分 解 経 路 も進 行 しう る こ とが 示 さ れ て い る.し か し,5'→3',3'→5'経 の 分 解 の 第1段 のmRNAに で あ る.ま mRNA分 は,5'キ の 場 合 に は3'末 向へ の 経 路 で 分 解 が進 行 す 解 の 鍵 を に ぎる構 造 的 な特 徴 ャ ッ プ 構 造,3'ポ リ(A)鎖,そ して 終 止 コ ドン で あ る. 路 の い ず れ の 場 合 に お い て も,そ 階 は デ ア デ ニ レー シ ョン に あ り,大 部 分 お い て こ の 過 程 がmRNA分 た,こ か ら3'→5'方 場 よ ば れ る経 路 で分 解 を 受 け る こ と が ご く最 近 報 告 さ れ た.こ そ の 代 替 経 路 と して,デ 路 と よば れ 止 コ ド ン の な い 異 常 なmRNAの 断 を受 け(デ キ ャ ッ ピ ン グ),一 義 的 に5'→3'方 向 へ の分 け る 主 要 経 路 で あ る. の 分 解 経 路 は decay)経 基 程 度 に まで 短 縮 化 さ れ る と,5'末 端 キ ャ ップ構 造 が 切 解 にお 階 はデキ ャッピ 解 の律 速段 階 の デ ア デ ニ レー シ ョン速 度 の 調 節 が, 解 の 制 御 に 最 も効 果 的 で あ る7)。 に ナ ン セ ンス 変 異(終 止 コ ドン)が 挿 入 さ れ た 異 常 なmRNAの 通 常 のmRNA分 解 の 第1段 場合に 階 で あ る デ ア デ ニ レー シ ョ ン を 制 御 す る 主 要 な 酵 素mRNAデ Pan2-Pan3(PAN)複 こ れ に 対 して,デ ア デ ニ レー シ ョ ン非依 存 性 のmRNA 分 解 経 路 も存 在 す る.翻 訳 領 域(ORF)内 1.デ ア デニ レー シ ョン過程(表1) つ で あ る11).Pan2-Pan3複 合 体 の2 合 体 は生 化 学 的 解 析 か ら最 初 に 発 見 さ れ た デ ア デ ニ レ ー ス で あ り,転 れ た ポ リ(A)鎖 ア デ ニ レ ー ス は, 合 体 とCcr4-Pop2-Not複 写 直 後 に付 加 さ を転 写 産 物 に固 有 の 長 さ に トリ ミ ン グす 蛋 白 質 核 酸 酵素Vol.48No.9(2003) 1231 核 生物 のmRNA分 解 を制御 す る 因子群 Database Center for Life Science Online Service 表1真 酵 母 に お いて 遺 伝学 的 ・生 化 学 的 に解 明 さ れ た 因子 と,ヒ る 過 程 に 働 く 酵 素 と し て 報 告 さ れ た.Pan2は RNaseDフ ァ ミ リ ー に 属 す る3'→5'エ 構 造 上 キ ソヌ ク レア ー ゼ を コ ー ド し て い る.PAN複 合 体 の 特 徴 は,デ レ ー ス 活 性 の 発 現 にPABPが 必 要 で あ る とい う点 であ る.ま た,Ccr4-Pop2-Not複 合 体 は 当 初ADH2を アデ ニ は じ トにお い て 同定 さ れ たそ の 相 同 因子 を示 す. 詳 細 に つ い て は い まだ 明 らか に され て い な い. 一 方 ,PARN-DANは 仔 ウ シの 胸 腺 に お い て は じめ て 発 見 さ れ た デ ア デ ニ レ ー ス で あ り,当 初 はXenopu5で の 解 析 か ら卵 成 熟 の 過 程 に お け る母 性mRNAの ニ レー シ ョン と翻 訳 抑 制 に お い て機 能 す る こ とが 報 告 さ め とす る多 くの 遺伝 子 の 発 現 に か か わ る 一般 的 な転 写 因 れ,発 子 と し て 同 定 さ れ た.Pop2はRNaseDフ あ らゆ る臓 器 で発 現 して い る こ と や,HeLa細 しCcr4と と も に3'→5'エ て い る が,Ccr4が ァ ミ リー に 属 キ ソ ヌ ク レア ー ゼ を コ ー ドし デ アデ ニ レース の触 媒 活性 を有す る こ と が 報 告 さ れ て い る12,13).酵 母Pan2とCcr4の 欠 損 株 で は,デ と か ら,こ ア デ ニ レ ー ス 活 性 を ま っ た く示 さ な い こ れ ら両 複 合 体 が 主 要 な デ ア デ ニ レ ー ス で あ る こ と が 証 明 さ れ た11).し 1232 二 重 か し な が ら,両 蛋 白 質 核 酸 酵素Vol.48No.9(2003) 者の使 い分 けの デ アデ 生 過 程 に お け る役 割 が 注 目 さ れ て い た.し か し, 中 で のin vitro mRNA分 胞抽 出液 解 過 程 の研 究 な どか ら,体 細 胞 に お い て も主 要 な デ ア デ ニ レ ー ス と して 機 能 す る 可 能 性 が 指 摘 さ れ て い る14).こ の 酵 素 の 特 徴 は5'キ ャ ッ プ 構 造 に結 合 す る こ と に よ っ て,デ 化 す る 点 に あ る.し ア デ ニ レー ス活 性 が 活 性 か し な が ら,mRNA分 解機 構 の研 究 に お け るモ デ ル 生 物 と して 用 い ら れ て き た 出 芽 酵 母 に お い てPARN-DANは mRNA分 存 在 し な い こ と か ら,特 解 に か か わ る 可 能 性 も 考 え ら れ る. Nocturninは の 研 究 で あ り,Xenopusの cleoprotein)が 劇 的 な 構 造 変 化 を起 こ す こ とが 報 告 さ れ て い る24).す な わ ち,デ ア デ ニ レ ー シ ョ ン に 伴 っ てPABP ご く最 近 に な っ て 発 見 さ れ た 第4番 デ ア デ ニ レ ー ス で あ る15).発 目の 見 の き っ か け は概 日 リ ズ ム 光 受 容 体 特 異 的 に 発 現 し,夜 と と も にeIF4EやeIF4GがmRNAか 7-Pat1複 ら解 離 し,Lsm1- 合 体,Dcp1-Dcp2複 合 体 がmRNAに 会 合 し, デ キ ャ ッ ピ ン グ が 促 進 さ れ る と い う も の で あ る.ま に お い て発 現 が ピ ー ク に 達 す る遺 伝 子 産 物 を デ ィ フ ァ レ Dhh1はLsm1-7-Pat1複 ン シ ャ ル デ ィス プ レイ 法 に よ っ て ス ク リ ー ニ ング し同 定 複 合 体 と も 相 互 作 用 す る こ と が 報 告 さ れ て お り,デ さ れ た.そ ニ レ ー シ ョ ン と デ キ ャ ッ ピ ン グ/5'→3'分 の 発 見 の 経 緯 か ら,“ 夜 ”を 意 味 す る “Noc turnin” と 名 づ け ら れ た.Xenopusに お い て は,網 膜 の 光 受 容 細 胞 で あ る 桿 体 と 錐 体 に 特 異 的 に 発 現 し,他 の時 計 遺 伝 子 と 同 様,24時 が 示 さ れ て い る.し 間 を周 期 と し て 日内 変 動 す る こ と た が っ て,概 日 リズ ム の 制御 に お け る 機 能 の 特 異 性 が 推 定 さ れ る が,マ ウス にお い て は あ ら ゆ る 臓 器 で 発 現 が 確 認 さ れ て お り,よ Database Center for Life Science Online Service 異 的 な の 関 与 も 否 定 で き な い.Nocturninは り普 遍 的 な 機 能 へ 発 見 当 初 か らCCR4 と構 造 上 の 相 同 性 が 指 摘 さ れ て い た が,ご (A)鎖 く最 近,ポ を特 異 的 に分 解 す る デ ア デ ニ レ ー ス と して の 酵 素 活 性 が 証 明 さ れ た.Nocturninも 合 体 と と も にPop2-Ccr4-Not 高等真核 生物 に特徴 的 アデ 解 を結 ぶ掛 け 橋 と し て の 役 割 を 果 た し て い る こ と が 推 定 さ れ る. 3.5'→3'分 mRNAは 解 過程 デ キ ャ ッ ピ ン グ 後,5'→3'方 進 行 し,mRNA本 体 が 壊 さ れ る が,こ と よ ば れ る5'→3'エ Pat1複 向へ の分解 が の 反 応 に はXrn1 キ ソ リ ボ ヌ ク レア ー ゼ が 唯 一 そ の 役 割 を 担 っ て い る25).こ リ た, 合 体,Dcp1-Dcp2複 の 酵 素 は 細 胞 内 に お い てLsm1-7合 体 とと もに同一 の顆粒状 の 構 造 体 に 局 在 化 し て い る こ と が 報 告 さ れ て い る26). 4.3'→5'分 解 過程 な デ ア デ ニ レ ー ス で あ る. 上 述 の と お り,正 2,デ キ ャッピン グ過程 ポ リ(A)鎖 端 キ ャ ップ構 造 の切 の 反 応 を触 媒 す る のが デ キ ャ ッ ピ ン グ 酵 素 で あ る.デ キ ャ ッ ピ ン グ 酵 素 の2つ Dcp1,Dcp2の う ち,MutT-Nudix(nucleoside の サ ブユ ニ ッ ト dephos phate linked to some other moiety,X)モ Dcp2が チ ー フ を もつ 触 媒 サ ブ ユ ニ ッ ト で あ り,Dcp1はDcp2と 結 合 しDcp2に キ ャ ッ ピ ング の 活性 化 因子 が 複 数 単 離 さ れ て い る(表1).環 るRNA結 状 型 の7量 合 蛋 白 質 複 合 体Lsm1-7-Pat120),液 質 輸 送 因 子Vps1621),DEADボ す るRNAヘ リ カ ー ゼDhh122)を (enhancer of decapping)1,Edc223)な 体 を形成す 類 の 蛋 白 質 か ら な る 分 子 量300∼400Kの 合 体 で あ り,10種 解経 キ ソ リ ボ ヌ ク レ ア ー ゼ 活 性 を 有 す る.エ 胞 質 と 核 の 双 方 に 局 在 す る が,核 snRNA(small キ ソ ソ ー ム は細 の エ キ ソ ソ ソーム は nuclear RNA),rRNA,snoRNA(small cleolar RNA)な nu ど の プ ロ セ シ ン グ と分 解 を 制 御 す る の に た,エ Ski8複 巨大 な分子複 類 す べ て の サ ブ ユ ニ ッ ト が3'→5'エ 胞 質 の エ キ ソ ソ ー ム がmRNAの 合 蛋 白 質Edc の3'→5'分 キ ソ ソ ー ム と は 少 な く と も10種 る27).ま 分解 にかか わ キ ソ ソ ー ム の 補 助 因 子 で あ るSki2/Ski3/ 合 体 とSki7が,エ キ ソ ソ ー ム に よ るmRNA分 解 に 必 要 で あ る. ど で あ る.Lsm1- キ ャ ッ ピ ン グ に 必 要 な 因 子 で あ り,NMDの 因 子 複 合 体eIF4F(eIF4EとeIF4Gが て 制 御 さ れ て い る.エ 対 し,細 は じ め,Dcp1-Dcp2 路 は補 助 的 路 は エ キ ソ ソ ー ム ーSki複 合 体 と よ ば れ る 酵 素 群 に よ っ ッ ク ス フ ァ ミリ ー に 属 通 常 の デ ア デ ニ レ ー シ ョ ン依 存 性 の デ ッ ピ ン グ 反 応 に は 関 与 し な い.ま な 役 割 を 果 た し て い る と 考 え ら れ る.こ 胞 の蛋 白 を 直 接 活 性 化 す る 低 分 子 量 のRNA結 7-Pat1,Dhh1は 直接 対 し促 進 活 性 を 有 す る16∼19).遺 伝 学 的 あ る い は 生 化 学 的 解 析 か ら,デ 解 過 程 に お い て,5' →3'方 向 の 分 解 が 主 要 経 路 で あ り,3'→5'経 が 除 去 さ れ る と,5'末 断 が 起 こ る が,こ 常 なmRNA分 た こ れ に 対 し,翻 訳 開 始 結 合 し た 複 合 体) が デ キ ャ ッ ピ ン グ の 阻 害 因 子 と し て 唯 一 知 ら れ て い る. こ の デ キ ャ ッ ピ ン グ反 応 が デ ア デ ニ レ ー シ ョン に ひ き 続 い て 起 こ る 過 程 に お い て,mRNP(messenger Ⅲ.高 等真核生物のmRNA分 解経路 際の デキ ャ ribonu これ まで 述 べ て きた よ うに,mRNA分 解 過程 の研 究 は 主 と して酵 母 をモ デ ル 系 と して 解 析 され て きた とい う 歴 史 的 背 景 が あ る.こ れ に対 して 高 等 真 核 生 物,と 哺 乳 類 のmRNA分 くに 解 経 路 の 詳 細 に つ い て は不 明 な点 が 多 い. 蛋 白質 核 酸 酵 素Vol.48No.9(2003) 1233 ま ず,mRNA分 解 の 第1段 母 と 同 様,デ 階 が 哺 乳 類 に お い て も酵 ア デ ニ レ ー シ ョ ンで あ る とい う こ と に 関 し て は 間 違 い な い よ う で あ る.し プ が 酵 母 と は 異 な り,哺 か し な が ら,次 乳 類 で は3'→5'方 向 の分 解 経 路 グ ロ ビ ン,β グ ロ ビ ン な ど で あ る.と く に αグ ロ ビ ン に お い て は 特 異 的 な エ ン ド リ ボ ヌ ク レ ア ー ゼErEN が 同 定 さ れ て い る35).ErENに の3'UTRに よ る αグ ロ ビ ンmRNA お け る 分 解 は,デ ア デ ニ レー シ ョ ン を 経 ず で 進 行 す る とい う結 果 が 最 近 に な っ て相 次 い で 報 告 され に グ ロ ビ ン遺 伝 子 の 急 速 な 分 解 を 可 能 に し て い る.ま た28∼32).最 初 の 報 告 はARE(AU-riche ア ル ブ ミ ンに はポ リ ソー ム に存 在 す る エ ン ドリボ ヌ ク レ も つ 不 安 定 なmRNAで lement)(後 あ るc-myc mRNAを 述)を 用 い たin vitro分 解 系 に 基 づ く も の で あ る28).そ の 後,や vitro分 解 系 を 用 い て,ARE-mRNAを 含 む 少 な くと も い く つ か のmRNAに 3'→5'方 お い て は,エ AREは 解 経 路 を 触 媒 す る が, こ の エ キ ソ ソ ー ム に よ る 分 解 を 促 進 す る.ま エ キ ソ ソ ー ム はARE-mRNAの 同 定 さ れ て い る. Ⅴ.転 写 産物 固 有 のmRNA分 解制 御(表2) キ ソソー ム による キ ソ ソ ー ム が 主 要 な 分 解 酵 素 で あ り, デ ア デ ニ レ ー シ ョ ン後 の3'→5'分 ア ー ゼRNase1が た は りin 向 の 分 解 経 路 が 主 要 経 路 と して 働 く こ とが 報 告 さ れ た.こ の 場 合,エ Database Center for Life Science Online Service のス テ ッ 9E3,α た 不 安 定 化 に 働 くTTP (tristetraprolin)な ど のARE結 合 蛋 白 質 と会 合 す る こ と でARE-mRNAに リ ク ル ー ト さ れ る.そ して 最 終 的 に 以 上 述 べ て き た よ う に,mRNA分 3'ポ リ(A)鎖 解 は5'キ ャ ップ と とい っ た す べ て のmRNAに 共 通 の構 造 を 標 的 と して 制 御 され て い る.し か し,こ の よ う な 一 般 的 な 機 構 だ け で は,mRNAは つ こ と に な る.と すべ て同 じ ような寿 命 を も こ ろ が,実 際 に はmRNAの 半 減期 は 数 分 か ら数 日 とい う よ うに,細 胞 の 倍 化 時 間 の 百 分 の 一 よ り短 い もの か ら,細 胞 の数 世 代 に わ た っ て 保 持 され続 キ ャ ッ プ 構 造 ま で 到 達 し た と こ ろ で,DcpS(scavenger け る も の まで 多 岐 に わ た る.最 近 の トラ ンス ク リプ トー decapping ム解 析 の結 果 で は,mRNAの enzyme)と よ ば れ るDcp1-Dcp2と は異 なる 酵 素 が デ キ ャ ッ ピ ン グ 反 応 を 行 な う30・33).ま た,ご 近PRE(polypyrimidine-richelement,後 グ ロ ビ ン のmRNAに 続 く3'→5'経 関 し て も,デ 述)を く最 も つ α- アデニ レー シ ョンに 路 で 分 解 を受 け る こ とが 報 告 され て い る34). 半 減 期 とmRNA(ORF)の 長 さや レ ア コ ドン(使 用 頻 度 の 低 い コ ド ン)の 含 量 と の 間 に は 単 純 な 相 関 は な く,mRNA上 度(リ ボ ソー ム に よ るmRNAの も 酵 母 と 同 様,デ ン グ と5'→3'分 乳類 において ア デ ニ レ ー シ ョ ン依 存 性 の デ キ ャ ッ ピ 解 経 路 の 存 在 を 裏 づ け る 結 果 も報 告 され 保 護)や 細 胞 内 のmRNA 含 量 な ど も無 関 係 で あ る こ とが 示 さ れ て い る36). 転 写 産 物 固 有 のmRNA分 そ の 一 方 で こ の よ う な 報 告 と は 別 に,哺 の リ ボ ソー ム の 密 解 制 御 機 構 の 解 析 は,酵 母 よ り哺 乳 類 に お け る研 究 が む しろ先 行 し て い る.そ 哺 乳 類 に お け るmRNA分 増 殖 因 子,転 解 の 研 究 が,サ 写 因 子,癌 れは イ トカ イ ン, 原 遺 伝 子 な ど非 常 に不 安 定 な初 て い る.す な わ ち,哺 乳 類 に お い て もDcp1,Dcp2,Pop2, 期 応 答 遺 伝 子 のmRNAや,グ ロ ビ ン遺 伝 子 な ど に 代 表 Xrn1,Lsm1-7が さ れ る非 常 に 安 定 なmRNAを 対象 に進 ん で きたため で 存 在 す る と い う 事 実 で あ る.と 近 単 離 さ れ た ヒ トDcp2に ポ リ(A)に くに最 よ る デ キ ャ ッ ピ ン グ 反 応 は, よ る 阻 害 を 受 け る こ と な ど か ら,酵 母 と 同様 デ ア デ ニ レ ー シ ョ ン依 存 性 の デ キ ャ ッ ピ ン グ 過 程 が,哺 あ る.こ の よ うな 転 写 産 物 固 有 のmRNAの と して3'UTRに る.そ 分 解 は,主 存 在 す る シ ス配 列 に よ り制 御 さ れ て い の 代 表 例 が 次 に示 すAREとPREで あ る. 乳 類 に お い て も機 能 し て い る こ と を 間 接 的 に 示 して い 1,不 安 定化 シ ス配列AREを る18). 癌 遺 伝 子,サ Ⅳ.エ ン ドリボ ヌ ク レアー ゼ に よる分 解 上 述 の よ う に,一 般 的 なmRNA分 解 はすべ てエ キ ソ くつ か の 特 殊 な 例 イ トカ イ ン,増 殖 因 子,転 半 減 期 の 短 いmRNAの3'UTRに AREが ヌ ク レ ア ー ゼ に よ る も の で あ る が,い ル ブ ミ ン,ア ポ リ ポ プ ロ テ イ ン Ⅱ,c- ケ モ カ イ ンのmRNAに myc,Groα,IGF2,ト ラ ンス フ ェ リ ン受 容 体,XIhbox2B, 酵 素Vol.48No.9(2003) ら の基 本 単 位 の く り返 しに よ り3ク ラ ス7グ ル ー プ に分 類 され て い る.ク て い る(図2).ア 核酸 基 本 配 列 はAUUUAか な る5塩 基 の 配 列 で あ るが,そ Ⅲ は 癌 原 遺 伝 子mRNAに,ク 蛋 白質 写 因 子 な ど, は 不安 定 化 シス 配列 存 在 す る37).AREの で は エ ン ドヌ ク レ ア ー ゼ に よ る 分 解 機 構 の 存 在 が 示 さ れ 1234 もつmRNA ラス1と ラ ス Ⅱ は サ イ トカ イ ンや 多 くみ ら れ る.ま の 多 様 性 と対 応 す る か の よ う にARE結 た こ れ らARE 合 蛋 白 質 も多 数 Database Center for Life Science Online Service 表2転 写産物 固有 のmRNA分 同 定 さ れ て い る.そ 解 にか かわ る シス因子 と トラ ンス因子 の 代 表 例 がAUF1-hnRNPD,HuR- で あ るCOX-2のmRNAは HuA,TTP,TIA-1,TIAR,HuC,HuD,HuB/Hel-N1で 安 定 化 す る が,こ あ り,そ の ほ か 酵 素 活 性 を 有 す る 乳 酸 デ ヒ ド ロ ゲ ナ ー ゼ, [(CUG)n GAPDH (glyceraldehydes が 関 与 し て い る.し 3-phosphate dehydrogenase), 紫 外 線 や γ線 照 射 に よ っ て の 安 定 化 に はAREへ triplet repeatRNA-binding COX-2mRNAの PM-Scl75な と は 対 照 的 に,HuR(Hu 基 本 的 にAREは 不 安 定 化 配 列 で あ り,デ シ ョ ン と そ れ に 続 く3'→5'分 解過程 やデ キ ャッピングの 促 進 を 介 し て 急 速 なmRNA分 が,あ る 種 のmRNAに レ ス に よ るARE-mRNAの が,そ 解 を ひ き 起 こ す.と ころ お い て は刺 激 に 応 じて 安 定 化 に も 働 き う る 場 合 が あ る.代 常ARE-mRNAの ア デ ニ レー 表 的 な 例 は,熱 ショックス ト 安 定 化 で あ る.AUF1は 通 不 安 定 化 に 働 く蛋 白 質 因 子 で あ る のARE-mRNAの ソ ー ム 系 に よ るAUF1の 分 解 は,ユ ビ キ チ ンープ ロ テ ア 分 解 と 密 接 に 連 関 し て い る. protein2]の か し,CUGBP2のAREへ AUH (enoyl CoA hydratase), 3-oxoacyl-CoA thiolase - Hsp (heat shock protein) 70, Hsc70, CUGBP2, KSRP, ど で あ る. のCUGBP2 の結合 は 翻 訳 を 抑 制 す る の で,結 胞 に お け るCOX-2の 結 合 果 的 には 癌 細 フ ァ ミ リ ーRNA結 発 現 抑 制 に 働 く39).AUF1やTTP antigenR)を は じめ とす るHu 合 蛋 白 質 はARE-mRNAを る が,ARE-mRNAの 安定化 す の よ う なARE結 安 定 化 と 不 安 定 化 の 制 御 に は,こ 合 蛋 白質 問 の競 合 が か か わ っ て い る こ と が 示 唆 さ れ る. 2.安 定化シス配列の代表例PRE グ ロ ビ ンmRNAは,赤 血 球 分 化 の 過 程(有 球 が 脱 核 し て 赤 血 球 に 成 熟 す る 過 程)で mRNAの95%を 核 の赤芽 細胞全体 の 占 め る ま で に 蓄 積 す る.こ の 過 程 で 熱 シ ョ ッ ク ス トレス刺 激 時 に は プ ロ テ ア ソ ー ム が不 活 性 はす で に 転 写 は 停 止 状 態 に あ り,こ の よ う なmRNAの 化 し,誘 核 に局在化 す る こ 構 成 変 化 はmRNAの 安 定 化 す る38).ま す な わ ち グ ロ ビ ンmRNAを 導 さ れ たHsp70がAUF1を と に よ っ て 細 胞 質 のARE-mRNAは た,ア ラ キ ド ン酸 を プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン に 変 換 す る 酵 素 安 定 性 の 変 動 に よ る もの で あ る. 安 定 化 し,そ の ほ か のmRNA を 選 択 的 に 不 安 定 化 す る こ と に よ る40).α グ ロ ビ ン 蛋 白質 核 酸 酵素Vol.48No.9(2003) 1235 mRNAの3'UTRに は 約50残 基 か ら な る シ ス 配 列PRE [あ る い はCRE(cytosine-rich element)と 情 報 伝 達 系 を 介 し て 制 御 さ れ て い る. も よ ば れ る] ナ ー ゼ を 介 し た 情 報 伝 達 系 に よ るARE が 存 在 し て お り,こ こ に α複 合 体 と よ ば れ る 蛋 白 質 複 mRNAの 合 体 が 結 合 す る.α 複 合 体 の 構 成 因 子 で あ る αCP1, か わ る 遺 伝 子 の 発 現 調 節 に 重 要 な 役 割 を 果 た して い αCP2は,ポ 合 蛋 白 質PCBPの る42∼44).COX2,TNF-α,IL-3,IL-6,IL-8,MIP1α, リ(C)結 に 結 合 す る と 同 時 にPABPに ニ レ ー シ ョ ン を 抑 え,α る.ま 一 員 で あ り,PRE も結合 す る ことで デ アデ グ ロ ビ ンmRNAを 安 定化 す た α 複 合 体 は エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼErENに よる 分 解 を 抑 え る こ と で も 安 定 化 に 寄 与 し て い る. こ の よ う な α グ ロ ビ ンmRNAの サ ラ セ ミ ア(と 安 定 化 の 機 構 は,α く に α-Constant Spring変 分 解 制 御 は,細 胞 増 殖,分 異)の 研 究 に ら れ る α グ ロ ビ ン 遺 伝 子 の 変 異 に 起 因 す る も の で あ り, ロ キ ナ ー ゼ プ ラ ス ミノ ー ゲ ン ア クチ ベ ー タ ー,c-fosを 含 むARE-mRNAがp38MAPキ ARE結 ど のmRNAに MAPK経 安 定 性 を 制 御 し て い る と 考 え ら れ る. ま た,酵 母 の 翻 訳 開 始 因 子TIF51AのmRNAは3' こ の グ ル コ ー ス 刺 激 に 伴 うmRNAの 有 し グ ル コ ー ス に よ り安 定 化 す る が, に お け る α複 合 体 形 成 を 阻 害 す る こ と に よ り αグ ロ ビ は りp38MAPK経 ンmRNAの っ て,こ ち な み に α グ ロ ビ ンmRNAの 分解 経路 は上述 の よ うに デ ア デ ニ レ ー シ ョ ン が 第1段 階 で あ り,そ 分 解 が 進 行 し て 最 終 的 にDcpSに 起 こ る.PCBPは α-CP1∼ が 同 定 さ れ て お り,α ビ ン,α コ ラ ー ゲ ン,エ シ ゲ ナ ー ゼ,チ の 後3'→5'の α-CP4とhnRNP-Eの5種 グ ロ ビ ンmRNAの 類 ほ か,β 路 の 介 在 が 示 さ れ て い る46).し れ ら と よ く似 た 機 構 と し て 知 ら れ て い る も の と し て は,同 JNK(c-Jun じ くMAPキ N-terminal 活 性 化 の 際 に 安 定 化 を 受 け る が,こ mRNAの5'UTR上 高濃度 の グル コース存 以 上 増 大 し安 定 化 す る.イ mRNAの3'UTRに は や は りPREが ンス リ ン 存 在 す る が,こ の ク レ オ リ ンが こ の 安 定 化 に 働 く46}. 上 述 の よ う な 転 写 産 物 固 有 のmRNA分 は,同 以 上 の よ う に,転 写 産 物 特 異 的 なmRNA分 わ る シ ス の 因 子 は お も にmRNAの3'UTRに mRNAの と え ば,酵 母 にお い て イクル な どエ ネル ギ ー代謝 に か か わ る 酵 素 を コ ー ドす る 転 写 産 物 は ど れ も 同 様 に 長 解 にかか 存 在 し, 主 と して 律 速 段 階 で あ る デ ア デ ニ レー シ ョ ン 過 程 に 影 響 を 与 え る こ と で,そ 解 制 御 機 構 じ機 能 を共 有 す る転 写 産 物 の グ ル ー プ単 位 で 働 い 解 糖 系 や 糖 新 生 系,TCAサ 安 定 化 す る41). の 場 合 に はIL-2 トラ ン ス の 因 子 で あ るYB-1,ヌ tract-bindingprotein)が ン ス リ ンmRNAを 胞 の re て い る 可 能 性 が 示 さ れ て い る.た グ ル コ ー ス に 依 存 し てPREに し たIL-2 に 存 在 す る シ ス 配 列JRE(JNK 場 合 に は α 複 合 体 と は 異 な るPTB(polypyrimidine 結 合 し,イ 路 を 介 安 定 性 制 御 で あ る.IL-2mRNAはT細 sponseelement)と 在 下 で 半 減 期 が2倍 kinase)経 ポ キ ロ シ ン ヒ ド ロ キ シ ラ ー ゼ な ど のmRNA ン ス リ ン のmRNAは ナ ー ゼ フ ァ ミ リー に 属 す る mRNAの リ ス ロ ポ エ チ ン,CD81,リ たが 考 え ら れ る. グ ロ の 安 定 性 を 制 御 し て い る. ま た,イ 安 定化 の 過程 にや の よ うな 機構 は真 核 生 物 に普 遍 的 に存 在 す る と さ ら に,こ よるデキ ャ ッピングが お い ては 路 に よ る リ ン 酸 化 を 介 し て こ れ ら のmRNAの UTRにAREを 安 定 化 が 障 害 を 受 け る と 考 え ら れ て い る. く 合 蛋 白 質 で あ るTTP(tristetraprolin)がp38 αグ ロ ビ ン の 終 止 コ ド ンの 変 異 に よ っ て 翻 訳 終 結 が 起 ス キ ャ ン し続 け てPRE ナ ー ゼ 経 路 に よ る 制 御 を 受 け る こ と が 示 さ れ て い る .と こ らず,リ ボ ソ ー ム が3'UTRを 化 や免疫 応 答 にか GMCSF,VEGF,ウ に,TNF-α,GMCSF,IL-3な 端 を 発 す る.こ の 疾 患 は 東 南 ア ジ ア に お い て 高 頻 度 で み Database Center for Life Science Online Service p38MAPキ の転写 産物固有 の半減期 を つ く り 出 し て い る と 考 え る こ と が で き る. い 半 減 期 を も ち,逆 に接 合 因 子 の情 報 伝 達 系 に か か わ る も の は ど れ も 非 常 に 短 い 半 減 期 を 有 す る.さ ら にサ ブユ ニ ッ トを 構 成 す る よ う な 因 子 群 に 関 し て は よ り 厳 密 に 近 い 半 減 期 を も つ.20Sプ 14の ロ テ ア ソー ム の コ ア を 構 成 す る 蛋 白 質 の う ち13種,リ ボ ソ ー ム 蛋 白 質131種,4 種 の ヒ ス ト ン そ れ ぞ れ に お い て 非 常 に 一 致 し たmRNA Ⅵ.情 報伝達によるmRNA分 分 解 速 度 を も つ こ と が 報 告 さ れ て い る.こ 解の制御 mRNA分 これ ら転 写 産 物 固 有 のmRNA分 解 に 関 し て は,何 が そ の トリガ ー に な る か とい う こ とが しだ い に 明 らか に さ れ つ つ あ る.す な わ ち,あ 1236 る種 のmRNAは 蛋 白 質 核 酸 酵 素Vol.48No.9(2003) い くつ か の 解 に お い て も 転 写 同 様,同 節 さ れ る 制 御 単 位(regulon)が れ て い る36). の よ うに じ機 構 に よ っ て 調 存 在 す る可 能 性 が指 摘 さ PABP1はmRNAの3'末 Ⅶ.翻 訳 終 結 が 正常 なmRNA分 解 の トリガー と し 端 に 存 在 す る ポ リ(A)鎖 と 特 異 的 に 結 合 す るRNA結 合 蛋 白質 で あ る.PABPの は お も に酵 母 に お い て 解 析 が 進 ん で お り,①mRNA上 て働 く の ポ リ(A)鎖 と 結 合 す る こ と に よ りmRNAを 上 述 し た 転 写 産 物 固 有 のmRNA分 に 正 常 なmRNAの 場 合,分 解 と は 別 に,と く 解 の ト リガ ー と な る もの が 何 か と い う こ と が こ れ ま で ま っ た く 不 明 で あ っ た.筆 ら は,翻 訳 終 結 機 構 を 解 析 す る 過 程 で,翻 のmRNA分 者 訳終結が通常 解 の ト リガ ー と な る こ と を 見 い だ し た (Hosoda,N.e る こ と,② mRNAを Database Center for Life Science Online Service 会 合 す るこ とで 環 状 化 し,リ ボ ソー ム の リサ イ ク リ ン グ を 促 進 して 翻 訳 開 始 を 制 御 す る こ と,が 示 唆 され て い た.し た が っ て,eRF3がPABPと の相 互 作 用 を 通 して これ ら 翻 訳 終 結 以 外 の 機 能 を制 御 す る 可 能 性 が 示 唆 され た. の過 程 か ら Ⅷ.eRF3はmRNA分 成 り立 っ て い る が,翻 訳 終 結 は 終 結 因 子eRF(eukaryotic b).翻 翻 訳 開 始 因 子eIF4Fと 安 定化 す tal.:投 稿 中). 真 核 生 物 の 翻 訳 は 開 始 ・伸 長 ・終 結 の3つ releasing 機能 factor)1,eRF3に 訳 開 始,伸 部 位 に く る と,eRF1は こ れ を 認 識 し て 結 合 し,合 成 し の と きeRF3 リボ ソ ー ム に 運 搬 す る こ と で 終 結 反 応 を 促 進 す る.eRF1はtRNAの 分 子 擬 態 構 造 を 有 す る こ とが 示 さ れ て お り47),さ 分解 過 程 を制 御 す る 止 コ ド ン が リ ボ ソ ー ムA た ポ リ ペ プ チ ド鎖 の 解 離 を ひ き 起 こ す.こ は,eRF1を (A)鎖 の デア デ ニ レー シ ョン に働 きmRNAの よ っ て 制 御 さ れ て い る(図3 長 を 経 て,終 解 の 律速段 階 であ る ポ リ eRF3は 酵 母 か ら ヒ トに 至 る ま で 高 度 に 保 存 さ れ て お り,酵 母 に お い て もeRF3とPABPの 相 互 作 用 が観 察 さ れ る こ とか ら,酵 母 を用 い て 遺 伝 学 的 解 析 を 行 な っ た.そ の 結 果,酵 母eRF3の 温.度感 受 性 変 異 株gst1に ら にeRF3 は 伸 長 因 子eEFIA(eukaryotic elongation factor1A)と 構 造上 相 同 性 を 有 す る こ と か ら,eEF lAが ア ミ ノ ア シ ルtRNAを リ ボ ソー ム に 運 搬 す る 翻 訳 伸 長 機 構 と の 類 似 性 が 示 唆 さ れ る. eRF3は 約200ア な る 固 有 のN末 ミノ酸 か ら 端 領 域(Nド イ ン)とeEFIAと す る 約400残 (Cド メ 相 同性 を 有 基 のC末 端 領 域 メ イ ン)か ら な る と い う 特 徴 的 な ド メ イ ン を も つ(図3a). eRF1と の 結 合,翻 訳 終 結 因 子 と し て の 機 能 に はeRF3のC ドメ イ ン の み で 十 分 で あ り,N ドメ イ ン の 機 能 に つ い て は ま っ た く不 明 で あ っ た.そ こ で,N ドメ イ ン の 機 能 を 解 明 す る 目 的 か ら,酵 母two-hybrid system 図3翻 を 用 い てeRF3ヒ トT細 ラ イ ブ ラ リ ー か らNド 胞 の メ イ ン と特 異 的 に 結 合 す る 因 子 を探 索 し,PABP1を 同 定 し た48}. 訳 終 結 因 子eRF3の (a)eRF3の1次 機能 構 造,翻 訳 伸 長 因 子eEF1Aと 相 同 なCド メ イ ン と 約200ア ミ ノ酸 か らな るN ドメ イ ンと か ら構 成 され る. (b)eRF3は 終 止 コ ドンを 直接 認 識 す る 翻 訳 終 結 因 子eRF1を 終 結 過程 を制 御 して い る,eRF3のNド リボ ソ ー ム に 運搬 す る こ と で翻 訳 メイ ン は翻 訳 終結 に は直 接 関与 せ ず,PABPと の結 合 蛋 白 質 核酸 酵 素Vol.48No.9(2003) 1237 に か かわ る, お い て 制 限 温 度 下 にmRNAの のmRNA分 安 定 化 が 観 察 さ れ た.こ 解 系 の 異 常 は,野 生 型eRF3の 完 全 に相 補 され た.ま eRF3Nド た,PABPと 導入 に よ り の相互作用 に必要 な メ イ ンの 欠 失 変 異 株 は,翻 訳 終 結 過 程 に は ま 分 解 機 構 で あ り,コ ー ド領 域 内 に 生 じた ナ ンセ ンス 変 異(終 止 コ ドン)が トリ ガ ー と な るmRNA分 解 で あ る.ま た,最 近 報 告 さ れ たNSDは 終 止 コ ド ンが な い 異 常 なmRNAの も に終 止 コ ド 分 解 機 構 で あ り,と っ た く異 常 が み られ な い が,調 べ た す べ て のmRNAに ンの 異 常 に よ っ て 起 こるmRNA分 お い て 安 定 化 が 観 察 され,分 解 系 に異 常 を きた して い る して,筆 こ とが 示 さ れ た.eRF3Nド 終 止 コ ド ン に 起 因 す る 正 常 なmRNAの メ イ ンの 欠 失 変 異 株 に お い て は,ポ リ(A)鎖 の 長 いmRNAの 蓄 積 が 観 察 さ れ, mRNA分 解 の律 速 段 階 で あ る ポ リ(A)鎖 の 短 縮 化 に異 常 が あ る こ とが 明 らか と な っ た.し PABPと た が っ て,eRF3は 解 で あ る.こ れ に対 者 らが 明 らか に したmRNA分 解機 構 は正常 な 分解機構であ る. Ⅸ,mRNAサ ー ベイ ラ ンス シス テ ム の 相 互 作 用 を 介 して デ ア デ ニ レー シ ョ ンの 過 程 でmRNAの 分 解 を制 御 して い る こ とが示 され た. さ らに,翻 訳 開 始 コ ドン の 上 流 に ス テ ムール ー プ構 造 を 導 入 し たmRNAは Database Center for Life Science Online Service なmRNAの mRNAの 翻 訳 さ れ な い が,こ 安 定 性 はeRF3のNド 終 止 コ ド ン は 翻 訳 終 結 因 子 で あ るeRF3-eRF1に よっ て 認 識 さ れ る こ と は 先 に 述 べ た が,正 常 な 終 止 コ ド ン と, の よ うな 変 異 や 読 み 誤 りに よ っ て生 じた 異 常 な 終 止 コ ド ンを見 分 メイ ン欠失 に よ って影 け る シ ス テ ム が 生 体 に は 備 わ っ て い る.こ の よ う な シ ス テ 響 を受 け な い こ と を見 い だ した.こ の 結 果 は,eRF3が ム はmRNAサ ー ベ イ ラ ン ス あ る い はNMDと 翻 訳 と 共 役 したmRNAの い る8).翻 訳 領 域 に ナ ン セ ン ス 変 異 を もつmRNA,イ 分 解 を 制 御 す る こ と を示 して い る.以 上 の 結 果 か ら,eRF3はeRF1と の相 互作 用 を と お して 翻 訳 終 結 反 応 を 行 な い,そ れ と共 役 し た 形 で PABPと の 相 互 作 用 を 介 して,mRNAの シ ョ ン と そ れ に ひ き続 くmRNAの と考 え られ る(図4).同 よばれて ン トロ ンが ス プ ラ イ ス さ れ ず に 細 胞 質 に 運 ば れ た プ レ mRNA,uORF(upstream open reading frame)を もつ 一 デ アデ ニ レー 部 のmRNAな ど が そ の 基 質 と な り,積 極 的 に 分 解 を 受 分 解 を制 御 して い る け る.NMD経 路 に お い て 中 心 的 な役 割 を 果 た す 制 御 因 様 の 実 験 結 果 は,高 等 真 核 細 胞 に お い て も観 察 さ れ た. 子 と し て は,Upf1,Upf2,Upf3が 知 ら れ て お り,酵 母 か ら ヒ トに至 る ま で 高 度 に保 存 され た こ れ らの 遺 伝 子 の 終 止 コ ド ンに 起 因 す るmRNA分 解 とい う観 点 か ら 考 変 異 は 正 常 なmRNAの え る と,前 例 が な い わ けで は な い.す で に述 べ た よ う に ン ス 変 異 を 有 す るmRNAを NMDはmRNAの 知 ら れ て い る.ま ナ ンセ ン ス変 異 に 伴 っ て 生 じ る異 常 分 解 に は 影 響 を 与 え ず,ナ ンセ 特 異 的 に 安 定 化 す る こ とが た 蛋 白 質 合 成 阻 害 剤 に よ っ て もNMD は 阻 害 さ れmRNAは る.す な わ ち,通 安 定化す 常 のmRNA の 分 解 過 程 に 似 て,NMD経 路 の 発 動 に も翻 訳 と の 共 役 が 必 要 で あ る.そ れ と よ く一 致 す る か の よ う に こ れ らUpf遺 物 が,eRF3,eRF1と 伝 子 産 相互作用 す る こ と が 報 告 さ れ て い る49). Upf1はDNA/RNAヘ で あ り,そ RNA結 リカーゼ のATPase活 合 活 性 はNMDに 性 と 不 可 欠 で あ る が,eRF3はUpf1と の 結 合 に よ っ て 両 活 性 を 阻害 す 図4翻 訳 終 結 と 共 役 し たmRNA分 eRF3はCド メ イ ンでeRF1を す る 形 でNド 1238 リボ ソー ム に運 搬 し,翻 訳 終 結 過 程 を 制 御 す る が,そ れ と 共 役 メ イ ン にお いてPABPと ョン)に お い てmRNA分 解 相 互 作 用 し,ポ リ(A)鎖 の 短 縮 化 過 程(デ ア デ ニ レー シ 解 を 制御 して い る. 蛋 白 質 核 酸 酵 素Vol.48No.9(2003) る こ と が 示 さ れ て い る.し っ て,eRF3は たが ナ ンセ ンス コ ド ン にお い て も 通 常 の 終 止 コ ドン と同 様,コ ド ン認 識 に お い て機 能 しNMDの て い る と考 え られ て い る.ま た,Upf遺 制 御 に働 い 伝 子 の変 異 は,ナ ンセ ン ス サ プ レ ッサ ー と し て も働 くこ とか ら,Upf複 体 はeRF3,eRF1と 合 ともに通常 の翻 訳 終結 過程 にお い て も機 能 す る こ とが 示 唆 され て い る. NMDの い が,高 しだ い に 明 らか に され つ つ あ る.と 等 真 核 生 物 に お い て はmRNAの 最 も3'末 端 側 くに,卵 の成 熟 過 程 や 胚 の 初 期 発 生 過 程 に お い て は 新 た な転 写 が 起 こ らず, 転 写 後 調 節 す な わ ちmRNAの 翻 訳 と分 解 に よ っ て 遺 伝 子 発 現 が 制 御 さ れ て い る が,そ 詳 細 な機 構 につ い て は 必 ず し も明 らか で は な の 際 の 種 々 のmRNAの 翻 訳 抑 制 と再 活 性 化 の 機構 にポ リ(A)鎖 の 分 解 と細 胞 質 ポ リ ア デ ニ レ ー シ ョ ンが 関 与 し て い る.す な わ ち,デ ア に あ る エ キ ソ ンーエ キ ソ ン連 結 部 位 か ら55塩 基 以 上 上 流 デ ニ レー シ ョ ンはmRNAの に終 止 コ ドンが あ る 場 合 に,そ れが ナ ンセ ン ス変 異 と して 制 御 にお い て も重 要 な役 割 を果 た して お り,遺 伝 子 発 現 見 な され てNMDの の 転 写 後 調 節 にお け る役 割 は 非 常 に 大 きい.前 述 の とお boundary 基 質 に な る と考 え ら れ て い る(-55 rule).通 常 のmRNAの 場 合,3'UTRに はエ キ ソ ンーエ キ ソ ン連 結 部 位 が な い た め,NMDの は な らな い.ま 基質に た,大 部 分 の 遺 伝 子 が イ ン トロ ン を も た な い 酵 母 にお い て は ① 翻 訳 領 域 内 にDSE(down Database Center for Life Science Online Service あ る が,こ の 過 程 は翻 訳 の 調 節 に お い て もそ の重 要 性 が element)が stream 存 在 し,こ れ よ り5'末 端 側 に あ る 終 止 コ ド ンが ナ ン セ ン ス 変 異 と し て 見 分 け ら れ る か,あ ② 翻 訳 終 結 に 必 要 な3'UTR上 ム との 相 互 作 用 が,コ のRNP構 るい は 造 とリボ ソー ー ド領 域 に生 じた ナ ンセ ンス 変 異 り,mRNAは3'ポ リ(A)鎖 が5'キ ャ ッ プ構 造 と物 理 的 に 連 結 す る こ とで 環 状 化 構 造 を と り う るが,こ の環状化 に よ り,翻 訳 を終 え た リボ ソー ムが 次 の サ イ ク ルの 翻 訳 開 始 に効 率 的 に リサ イ ク ル され る こ とで 翻 訳 が 活 性 化 さ れ る こ とが 示 唆 され て い る.こ は,in の よ う な翻 訳 の効 率化 vitro翻 訳 系 に お い て キ ャ ッ プ と ポ リ(A)鎖 に よ る 翻 訳 の 相 乗 的 活 性 化 と して観 察 す る こ とが で き る.筆 者 ら は,こ の ポ リ(A)鎖 を 介 し た 翻 訳 の 相 乗 的 活 性 化 機 に 由 来 す る 終 止 コ ド ン上 で は 行 な え な い こ と に よ る “F aux-UTR” モ デ ル に 従 っ て分 解 を受 け る50). 一方 ,NMDに よ るmRNAの 分解 過程 は正常 な 構 に お い て もeRF3が mRNAの 子 で あ るeRF3とPABP,翻 分 解 過 程 と は 異 な り,ポ リ(A)鎖 の 短 縮 化 を 分 解 制 御 だ け で な く,翻 訳 重 要 な役 割 を果 た して い る こ とを 見 い だ した51).す な わ ち,翻 訳 を 終 え た リ ボ ソ ー ム が 効 率 よ く次 の翻 訳 開 始 に リサ イ ク ルす る 過 程 に 翻 訳 終 結 因 訳 開 始 因 子eIF4G-4Eの 相 介 さな い.ま ず デ キ ャ ッ ピ ン グ反 応 が 起 こ り,5'→3'方 互 作 用 が 関与 す る と考 え られ る.こ 向へ のmRNAの は 単 な る 翻 訳 を終 わ らせ る た め だ け の 反 応 過 程 で は な 分 解 過 程 が 進 行 す る(図2). 以 上 の よ う に,eRF3は 加 え て,Upfと も つmRNAの 正 常 なmRNAの 分解 経 路 に の 複 合 体 形 成 を 介 して ナ ンセ ンス 変 異 を 分 解 経 路 に も 関与 す る と考 え られ,そ 終 止 コ ドン を 認 識 したeRF1-eRF3か の の よ うに,翻 訳 終 結 く,翻 訳 を終 え た リ ボ ソー ム を 次 の 翻 訳 開 始 へ 効 率 よ く リ ク ル ー トす る過 程 や,翻 訳 を 終 え たmRNAを 分解す る 過 程 と共 役 し連 動 してい る. ら動 因 さ れ る こ れ ら2種 の 分 解 経 路 の 問 の ス イ ッチ ン グ機 構 の解 明 が期 待 さ れ る. 1) 2) おわ り に 本 稿 で は,主 と して 酵 母 に お け る 詳 細 なmRNA分 解 3) 機 構 と,哺 乳 類 に お い て 明 らか に され て き た転 写 産 物 固 有 のmRNA分 解 機 構,そ して 筆 者 らが 最 近 明 らか に し た 翻 訳 終 結 と共 役 したmRNA分 4)脇 5) た. 翻 訳 終 結 と共 役 し たmRNA分 解, 解 の ど ち らの 場 合 に お い 6) 7) 8)山 て も,そ の 作 用 点 はmRNA3'末 端 ポ リ(A)鎖 の 短 縮 化 (デ ア デ ニ レ ー シ ョ ン)で あ り,デ ア デ ニ レー シ ョ ン は mRNA分 解 に お い て 鍵 を に ぎ る 最 も重 要 な ス テ ッ プ で 山 素 明 ・矢 崎 和 盛:蛋 白質 核 酸 酵 素,46,1836-1841 (zoos) 解 機 構 に つ い て概 説 し す で に述 べ た よ う に,転 写 産 物 固 有 のmRNA分 Carneiro, M., Schibler, U. : J. 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